细菌一般染色方法.ppt

常用的细菌染色方法 革兰染色抗酸染色细菌基本形态结构观察细菌染色意义由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。细菌染色方法及原理常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型：碱性染料（basic dye）带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。酸性染料（Acid dye）带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。革兰染色原理细菌的等电点较低，约在pH 25之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。一、细菌染色标本片的制备一、细菌染色标本片的制备细菌染色检查，首先要进行细菌标本制备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、固定三步。固定的目的和方法使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次革革兰染色染色染色：初染初染（结晶紫）（结晶紫）媒染媒染（碘液）脱色脱色（酒精）（酒精）复染复染（复红）（复红）滤纸吸干油镜镜检safraninCrystal violet染色步骤染色步骤结晶紫初染结晶紫初染结晶紫初染结晶紫初染卢戈碘液媒卢戈碘液媒卢戈碘液媒卢戈碘液媒染乙醇脱色复红复染（）（）（）（）分钟水洗分钟水洗秒水洗秒水洗吸干结晶紫初染分钟 水洗 碘液媒染分钟 水洗酒精脱色秒水洗 复红复染秒水洗滤纸吸干油镜镜检抗酸染色法(acid-fast stain)分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染色法不易着色，须用抗酸染色法。注意事项涂片要略厚加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液分枝杆菌呈红色(+)其他细菌和背景为蓝色(-)。操作过程取痰液 涂片（略厚）干燥固定 石炭酸复红加温染色810分钟后用3%的盐酸酒精脱色约12分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗，印干 镜检形态：形态：细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。染色性：染色性：不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。结核分枝杆菌结核分枝杆菌(M.tuberculosis)细菌基本形态结构观察基本形态球菌杆菌弧菌特殊结构芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌荚膜 肺炎球菌鞭毛 变形杆菌葡萄球菌葡萄球菌链球菌链球菌肺炎球菌肺炎球菌脑膜炎球菌革兰阳性革兰阳性革兰阴性革兰阴性肺炎（双）球菌肺炎（双）球菌 荚膜荚膜