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高中生物实验(超详细).doc
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1、For personal use only in study and research; not for commercial use蚂高中生物实验总结袈实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布(必修一P26)螇一、实验原理:薃1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA大部分存在于细胞质中。衿2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。利用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。薀3、盐酸的作用薆 盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞;蚃
2、盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,有利于DNA与染色剂结合芀 4、0.9%的NaCl溶液作用:保持口腔上皮细胞的正常的形态肈二、目的要求:芅初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法螃三、材料用具:蚁人的口腔上皮细胞(也可用其他动物或植物细胞代替,如洋葱鳞片叶表皮细胞)蝿大烧杯、小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜莈 质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,吡罗红甲基绿染色剂(取A液20mL,B液80mL配成染色剂,使用时现配。A液:取吡罗红甲基绿粉1g,加入100mL蒸馏水中溶解,放入棕色瓶中备用。B液:取乙酸钠16
3、.4g,用蒸馏水溶解至1000mL。取乙酸12mL,用蒸馏水稀释至1000mL。取稀释的乙酸钠溶液30mL和乙酸20mL,加蒸馏水50mL,配成pH为4.8的溶液),蒸馏水螃五、方法步骤:肁1、取口腔上皮细胞制片膇在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。肆 用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下,把牙签袃上附有碎屑的一端,放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。蒂点燃酒精灯,将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。(固定细胞)衿2、水解袅在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸,将烘干的载玻片放入小烧杯中。羃在大烧杯中加入30温水。蕿将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5mi
4、n。莇3、冲洗涂片蚄用蒸馏水缓水流冲洗载玻片10s。肂4、染色羀用吸水纸吸去载玻片上的水分。聿将吡罗红甲基绿染色剂滴2滴在载玻片上,染色5min。蚇吸去多余染色剂,盖上盖玻片。膂5、观察莁低倍镜观察:选择染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰。薇换用高倍物镜观察:调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。蒆六、考点提示:节1、取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质;螂2、取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞;艿3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水龙头冲洗;膅4、用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载
5、玻片均匀受热,以免破裂;莂5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自然冷却1分钟。膃蚇实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(必修一P18)芈一、实验原理:莂某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。莀1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖;蔗糖分子内没有,为非还原糖。实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖,而不能鉴定可溶性非还原糖。蒈糖类中的还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu2O沉淀。用斐林试剂鉴定还原糖时,
6、溶液变化过程为:浅蓝色棕色砖红色沉淀羇淀粉遇碘变蓝色(直链)或紫(红)色(支链)。蒂2、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 螀脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色(或被苏丹染液染成红色)。膀3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应。)螅 薂 因此,可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反
7、应,检测生物组织中糖类,脂肪或蛋白质的存在。膁二、实验目的: 薈尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质。薄三、实验材料:蚂1、做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果或梨匀浆。(因为组织的颜色较浅,易于观察。)薂经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。芀2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子、花生种子匀浆为最好,实验前一般要浸泡34小时(也可用蓖麻种子)。薇3、做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的豆浆、鲜肝提取液。螁4、淀粉的鉴定:马铃薯匀浆。虿四、实验用具:双面刀片、试管(最好用刻度试管)、试管夹、试管架、大小烧杯、小
8、量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜螈五、实验试剂:莆1斐林试剂(甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液,乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)袁2苏丹或苏丹染液肀3双缩脲试剂(A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液,B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)蒀4体积分数为50%的酒精溶液膅5碘液膅6蒸馏水蒁六、方法步骤:羈1.实验材料、仪器和试剂的选择 每小组从老师提供的实验材料中选择一两种,预测其中含有哪些化合物,再选择所需要的仪器和试剂。膈2.设计记录表格,记录预测结果,然后按照试验步骤进行检测,用“+”或
9、“-”记录实测结果。芅3.检测的方法步骤袂(1)可溶性糖的检测和观察蚀1. 制备组织样液。羇(去皮、切块、研磨、过滤)苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。莅2. 取1支试管,向试管内注入2mL待测组织样液。芃3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。(应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混合均匀后在注入)。 肇(切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH )2在70 900oC下分解成黑色CuO和水,甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反
10、应,无Cu ( OH )2生成)。蚆4.试管放在盛有50-65oC温水的大烧杯中,加热约2min。蒅5.观察试管中出现的颜色变化:浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。葿(好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不要朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热,短实验时间。防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤。)衿(2)脂肪的检测和观察蒄方法一:向待测组织样液中滴加3滴苏丹III染液,观察样液被染色的情况。薅方法二:制作子叶临时切片,用显微镜观察子叶细胞的着色情况(以花生为例)。袀取材 取一粒浸泡过的花生种子,去掉种皮。(干种子要浸泡34小时,新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短,不易切片;
11、浸泡时间过长,组织较软,切片不易成形。切片要尽可能薄些,便于观察)芇切片 用刀片在花生子叶的横断面上平行切下若干薄片,放入盛有清水的培养皿中待用。蒇制片从培养皿中选取最薄的切片,用毛笔蘸取放在载玻片中央;在花生子叶薄片上滴23滴苏丹,染色3min(如果用苏丹染液,染色1min),(染色时间不宜过长),薄片周围染液,再滴加12滴体积分数为50%的酒精溶液,洗去浮色,(酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。)用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精,滴上一滴蒸馏水(滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡),盖上盖玻片,制成临时装片。薅
12、观察 在低倍显微镜下找到花生子叶的最薄处,移至视野中央,将影像调节清楚;换高倍镜观察,视野中被染成橘黄色的脂肪颗粒清晰可见。(装片不宜久放,时间一长,油滴会溶解在乙醇中)芁(3)蛋白质的检测和观察罿制备组织样液(浸泡、去皮研磨、过滤)。黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间。可用蛋清代替豆浆,蛋清要先稀释。如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。芆向试管内注入2mL待测组织样液。蚅向试管内注入双缩脲试剂A液1mL,摇匀。蚂向试管内注入双缩脲试剂B液4滴,摇匀。蒇(先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白
13、质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。CuSO4溶液不能多加,否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色)肅观察试管中出现的颜色变化。(溶液变紫色)螄(4)淀粉的检测和观察蝿向试管内注入2mL待测组织样液。腿向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化。(碘液不要滴太多,以免影响颜色观察)螄七、考点提示:袄1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些?膀答:葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 莁2、还原性糖植物组织取材条件?薁答:含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 螈3、研磨中为何
14、要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?莅 答:加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显。 肃4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用? 莀答:混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。 螈5、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为? 螆答:浅蓝色 棕色 砖红色。薀6、花生种子切片为何要薄?腿 答:只有很薄的切片,才能透光,而用于显微镜的观察。 袈7、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?膇 答:切片的厚薄不均匀。 节8、脂肪鉴定中乙醇作用? 答:洗去浮色。 膁9、双缩脲试
15、剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化? 羈答:不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。芃10、在鉴定蛋白质的实验中,若用鸡蛋清作实验材料,必须稀释,以免实验后黏住试管,不易洗刷。羄11、斐林试剂与双缩脲试剂的区别:羀 (1)溶液浓度不同(斐林试剂乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液,双缩脲试剂B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)肈 (2)使用原理不同蚄 斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热的条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定还原糖的存在,实验中溶液颜色的变化过程为:浅蓝色-棕
16、色-砖红色蒂 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应的实质是在碱性条件下,Cu2+与双缩脲发生的紫色反应。而蛋白质分子中有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲发生颜色反应,可以使用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。蝿(3)使用方法不同:斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混合均匀后在注入;双缩脲试剂先向试管内注入A液1mL,摇匀,再向试管内注入B液4滴,摇匀。膈肅实验三 用显微镜观察多种多样的细胞(必修一P7)膄一、目的要求:蒈1.使用高倍显微镜观察几种细胞,比较不同细胞的异
17、同点芇2.运用制作临时装片的方法蒆二材料用具:薂 1.建议选用的观察材料:真菌(如酵母菌)细胞,低等植物(如水绵的丝状绿藻)细胞,高等植物细胞(如叶的保卫细胞),动物细胞(如鱼的红细胞或蛙的皮肤上皮细胞)。以上这些材料,做成临时装片后就可以观察。也可以使用其他替代材料。薁 2.用具:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、清水。如果实验过程中需要染色,应准备常用的染色液。芇三方法步骤:蚃转动反光镜使视野明亮。莄在低倍镜下观察清楚后,把要放大观察的物像移至视野中央。芀转动转换器,换成高倍物镜。莇观察并用细准焦螺旋调焦。肄四:讨论:螂 1.使用高倍镜观察的步骤和要点是什么?聿 答:(1)首先用低倍镜观
18、察,找到要观察的物像,移到视野的中央。蒇 2.试归纳所观察到的细胞在结构上的共同点,并描述它们之间的差异,分析产生差异的可能的原因:蒅 答:这些细胞在结构上的共同点是:有细胞膜、细胞质和细胞核,植物细胞还有细胞壁。蒃各种细胞之间的差异和产生差异的可能原因是:这些细胞的位置和功能不同,其结构与功能相适应,这是个体发育过程中细胞分化产生的差异。肂 3.P8图是一个大肠杆菌的电镜照片和结构模式图,大肠杆菌与你在本实验中观察到的细胞有什么主要区别?薇答:从模式图中可以看出,大肠杆菌没有明显的细胞核,没有核膜,细胞外有鞭毛,等等。袆五、考点提示:羁(1)是低倍镜还是高倍镜的视野大,视野明亮?为什么?袀
19、提示:低倍镜的视野大,通过的光多,放大的倍数小;高倍镜视野小,通过的光少,但放大的倍数高。蚇 问(2)为什么要先用低倍镜观察清楚后,把要放大观察的物像移至视野的中央,再换高倍镜观察?芆 提示:如果直接用高倍镜观察,往往由于观察的对象不在视野范围内而找不到。因此,需要先用低倍镜观察清楚,并把要放大观察的物像移至视野的中央,再换高倍镜观察。蚃 问(3)用转换器转过高倍镜后,转动粗准焦螺旋行不行?虿 提示:不行。用高倍镜观察,只需微调即可。转动粗准焦螺旋,容易压坏玻片。螇注:莃1.目镜无旋转螺丝,镜头越长,放大倍数越小;物镜有旋转螺丝,镜头越长,放大倍数越大。膁2.获取蛙皮肤上皮细胞的方法,是把蛙养
20、在无水的玻璃缸内23h,待蛙的皮肤稍干后,再移入有水的玻璃缸内。数分钟后,蛙的部分上皮开始龟裂并脱落到水中。用肉眼可以看见水中有浅灰色、透明的上皮膜。取一小块上皮膜用于制片、观察,看到的就是蛙皮肤的单层上皮细胞。这种制备方法不会对蛙造成伤害。莈袇螄实验四 用高倍镜观察线粒体和叶绿体(必修一P47)袃一、实验原理:蒁1、叶肉细胞中的叶绿体,散布于细胞质中,呈绿色、扁平的椭球形或球形。可以在高倍显微镜下观察它的形态和分布。袆2、线粒体普遍存在于动物细胞和植物细胞中,线粒体的形态多样,有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。健那绿(Janus green B)染液是将活细胞中线粒体染色的专一性染料,可以使
21、活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时,通过染色,可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态和分布。膅二、目的要求:芁使用高倍显微镜观察叶绿体、线粒体的形态和分布。膀三、材料用具:羆新鲜的藓类的叶(叶子薄而小,叶片是绿色的单层细胞,叶绿体清楚,可取整个小叶直接制片,不需加工即可进行观察,所以作为实验的首选材料)或菠菜叶(若用菠菜叶作实验材料,要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。因为表皮细胞不含叶绿体)、黑藻叶等。薆新配制的质量分数为1%的健那绿染液(将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解)肃显微镜、载玻片、
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