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河北省人民医院检验科文件 血液实验室作业指导书河北省张家口市第二医院检验科编制: 审核： 批准： 河北省张家口市第二医院凝血酶原时间-纤维蛋白原（PTFIB)测定1。 实验原理本实验可同时测定凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FIB）浓度。原理:确定量的抗凝血浆（50微升）样本经一定时间加温后,将组织凝血活酶、钙离子加入其中,激活外源凝血途径，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，测定其凝固过程中90o散射光变化，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值.在检测PT的同时，血浆浊度的变化与血浆中FIB的含量成正相关，通过测定凝固终点和起始点光散射强度的差值，再根据试验前已经做出的由不同已知FIB浓度与相应的光散射差值关系的标准曲线即可推测出FIB的浓度.2. 标本采集2。1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。2.2 3。8(w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。3。 标本存放：全血贮存在410oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min15min）分离血浆，此血浆在室温2224oC下可存放2小时，在24oC可存放4小时，在20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时,应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动,使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确.4。 标本运输:低温条件下运输。5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固,溶血，脂血标本不能作测定。6. 实验材料：6。1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N： 84688210）兔脑促凝血激酶10mL X8瓶2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N:20003700）3）参比液 Reference Emulsion(代号P/N：9756900）4)因子稀释液 Factor diluent（代号P/N： 9757600） 5）正常质控血浆Normal control plasma（代号P/N：20003110）6）低水平质控血浆Abnormal control plasma level I/Low(代号P/N： 20003210）7）高水平质控血浆Abnormal control plasma level II/High（代号P/N: 20003310)注：促凝血酶原激酶当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时,其秒数结果将会有较显著的差异。而对于口服抗凝药的病人来说,需要一个能进行比较的PT结果。国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值(国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响。但美国贝克曼库尔特公司提供的PTFIB试剂，每一批号都经过了严格的测试,与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性,其ISI值均注明在试剂盒说明书中。在ACL7000上，当输入试剂的ISI值后，机器会自动给出INR值。INR=(PT Ratio) ISI6.2试剂准备用8mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶,盖上盖子，轻摇至完全溶解，置1525oC30分钟,用前摇匀,勿用力振摇.6。3试剂保存未开封的试剂可保存在28 oC至试剂盒上标明的有效期。试剂溶解后，于原瓶中28 oC，3天内有效；在ACL7000上（15oC)，8小时有效。建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于28 oC。7. 仪器设备:7。1 仪器名称：syxmex CA7000全自动血凝仪 7。2 仪器厂家：日本希森美康公司7.3 仪器型号：CA70007.4 仪器技术参数：7。4.1 试剂位：18个，具冷藏功能。7.4。2 样本位:40个，可通过换盘连续添加。7。5 仪器校准程序:7。5.1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。7。5。2 校准操作：设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行)。8. 操作步骤:8.1 开机：CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检8。2洗针：在主屏幕上选Rinse Probe键，然后按Execute进行洗针8。3 检查消耗品：1。准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加.2。准备试剂:按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好,放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示位置放置试剂。注意：共三个位置放清洗液.3。查看仪器的洗液瓶和废液瓶8。4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。8.5 输入检测项目：主菜单上的按下Work list键，进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键重复：按屏幕下菜单的REPEAT键,在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数,仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。输入样本号：按屏幕下菜单的ID NO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。开始检测：录入完所有测试信息,按下屏幕右上角START键，开始检测查看结果:返回到主屏幕, 检测的项目如果由变成表明此试验已经完成。按下Stored Date键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。8。6 洗针:当做完一批标本后,需要洗针，按下Rinse Probe然后按下Execute进行洗针8。7 关机：回到主屏幕下,在洗完针后方可关机，切断电源，同时关闭压力泵和总电源。9. 检验结果的判断与分析：9。1 仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息:.出现错误，不能得到分析数据.不能计算参数.数值超出线性范围.9。2 仪器设定PT参考范围在10-14秒,如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记： 出现错误信息 数据低于可报告的低限 数据高于可报告的高限10。 质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(正常值和高值)的质控品,以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量.至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。 11. 临床意义:PT是用于筛查外源性凝血系统（、）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。11.1 参考范围：秒数S：12-16 S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）活动度：80120%国际标准化比值INR：0.8-1。511.2 PT延长:见于先天性凝血因子、缺乏；低（无）纤维蛋白原血症;获得性见于急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶症、维生素K缺乏、广泛而严重的肝脏实质性损伤（如急性重症肝炎及肝硬化）、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素)。11.3 PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态(DIC早期、急性心肌硬塞等)、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。11.4 监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标.一般要求：PT(S）：1824 S INR：2.53。5,不同疾病不同值。口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍，PT活动度参考值为75%120%，降低到40%可能有出血倾向。12。 变异的潜在来源12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查12。2 标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异.12。3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等.12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。12。5 FDP增加使凝固时间延长.12。6 某些药物,如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。12。7血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂 肝 素PT 100mg/dl 15mg/dl 700mg/dl 0。5U/mlFIB 100mg/dl 1 5mg/dl 700mg/dl 1.0U/mlFDP对PTFIB的影响比对FIBClauss法小。13. 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用.13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。14. 仪器维护与保养14.1 每日保养：14。1.1开机前观察样品参比液液面，看是否够做测定.14.1。2 注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶。14。1。3让开关机尽量减少到最少。14.1。4 检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯。14.1。5在每天工作前和工作后，执行冲洗程序：按“PROG”，显示应用菜单，选择“PRIMING”,按“ENTER”确认。14。2每周保养14。2。1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔.14。2。2进入清洁程序清洁吸样针14。2。3清洁冲洗/废液池。14。3每月保养清洁空气过滤网14。4根据需要14.4.1清洁废液管路14.4。2清洁溢出的样本14。4。3更换吸样针组件14。4。4调整吸样针位置14.4.5对吸样针/试剂针排污处理15. 参考文献15。1 叶应妩。王毓三等全国临床检验操作规程第三版，东南大学出版社.15。2CA7000全自动血凝仪操作手册活化部分凝血活酶时间（APTT）测定1. 实验原理将试剂加入抗凝血浆中,试剂中的微粒硅胶是血小板因子3的表面活性剂，与牛脑磷脂一同作用于内源凝血系统，当加入CaCl2后，开始凝集,产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,然后通过标准曲线求出活化部分凝血活酶时间。2. 标本采集2。1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血.2。2 3。8（w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1。8ml，混匀。3。 标本存放：全血贮存在410oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min15min)分离血浆，此血浆在室温2224oC下可存放2小时,在24oC可存放4小时，在20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时,应将盛血浆的容器置37oC水浴中,并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗,解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。4. 标本运输：低温条件下运输。5。 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确,凝固，溶血,脂血标本不能作该项目检测.6。 实验材料:6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。1）APTT测定试剂盒(代号P/N: 8468710）冻干脑磷脂5瓶CaCl25瓶（25mmol/L)2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N： 20003700)3）正常质控血浆Normal control plasma(代号P/N: 20003110)4）低水平质控血浆Abnormal control plasma level I/Low（代号P/N: 20003210）5）高水平质控血浆Abnormal control plasma level II/High（代号P/N： 20003310)6）因子稀释液（代号P/N:9757600）6。2试剂准备用9mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干脑磷脂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置1525oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。6。3试剂保存未开封的试剂可保存在28 oC至试剂盒上标明的有效期。脑磷脂:试剂溶解后，于原瓶中28 oC，7天内有效;在ACL9000（15oC），8小时有效。CaCl2:于原瓶中28 oC，30天内有效。建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于28 oC，不要将试剂冷冻。7。 仪器设备：7.1 仪器名称：syxmex CA7000全自动血凝仪7。2 仪器厂家：日本西森美康公司7.3 仪器型号:CA70007.4 仪器技术参数：7。4。1 试剂位：18个,具冷藏功能。7。4。2 样本位:40个,可通过换盘连续添加。7.5 仪器校准程序:7。5。1 校准频率:当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。7。5。2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行）.8. 操作步骤：8。1 开机:CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检,当屏幕上边显示Ready时可进行试检8。2洗针:在主屏幕上选Rinse Probe键，然后按Execute进行洗针8。3 检查消耗品:1。准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。2.准备试剂:按照仪器对试剂的要求,把每一项的试剂准备好,放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期.如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示位置放置试剂.注意：共三个位置放清洗液.3.查看仪器的洗液瓶和废液瓶8.4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。8.5 输入检测项目：主菜单上的按下Work list键，进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键重复：按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息.输入样本号：按屏幕下菜单的ID NO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号.开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START键，开始检测查看结果：返回到主屏幕， 检测的项目如果由变成表明此试验已经完成。按下Stored Date键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。8.6 洗针：当做完一批标本后,需要洗针,按下Rinse Probe然后按下Execute进行洗针8。7 关机：回到主屏幕下,在洗完针后方可关机,切断电源，同时关闭压力泵和总电源。9. 检验结果的判断与分析：9.1 仪器测定APTT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数,若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息：。出现错误，不能得到分析数据。不能计算参数.数值超出线性范围。9。2 仪器设定APTT参考范围在24-36秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记： 出现错误信息 数据低于可报告的低限 数据高于可报告的高限10. 质量控制：每批样本同时测定三个浓度水平（正常值低值和高值）的质控品，以2S为警告限，3S为失控限,绘制质控图，判断是否在控.每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量.至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。 11。 临床意义：APTT常用于内源性凝血系统（、因子）的筛选及肝素抗凝治疗的监测。11。1参考范围：24-36秒(患者结果超过正常对照10秒以上为异常)11。2 APTT延长：见过先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子、缺乏、VWF等）；多种凝血因子缺乏(如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物质存在。11.3 APTT缩短：见于凝血因子、活性增高、血小板增多症高凝状态：DIC高凝期、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病血管病变、脑梗塞、深静脉血栓、妊趁高血压综合症和肾炎综合症,静脉穿刺不顺利混入组织液.11。4 是监测肝素治疗的首选指标：肝素抗凝治疗中APTT的预算期为正常值的1.5-2.5倍。12。 变异的潜在来源12。1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查。12。2 标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力使标本溶血，造成结果变异。12.3 纤溶药物的影响（如双香豆素、链激酶、尿酶等)，超剂量使用肝素.12.4 FDP增加使凝固时间延长.12。5 某些药物的影响（如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等）。12。6血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂APTT 100mg/dl 15mg/dl 700mg/dl13。 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解13。1 确认溶剂类型，一般溶解液包括:蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液,必须按说明书要求使用。13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。14。 仪器维护与保养14。1 每日保养:14。1.1开机前观察样品参比液液面,看是否够做测定。14.1.2 注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶。14。1.3让开关机尽量减少到最少。14。1。4 检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯。14.1.5在每天工作前和工作后，执行冲洗程序:按“PROG”，显示应用菜单,选择“PRIMING”，按“ENTER”确认。14.2每周保养14.2.1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔。14。2。2进入清洁程序清洁吸样针14.2。3清洁冲洗/废液池。14.3每月保养清洁空气过滤网14.4根据需要14.4。1清洁废液管路14。4.2清洁溢出的样本14.4.3更换吸样针组件14.4。4调整吸样针位置14。4。5对吸样针/试剂针排污处理15. 参考文献15。1 叶应妩.王毓三等全国临床检验操作规程第三版，东南大学出版社。15.2 CA7000全自动血凝仪操作手册凝血酶时间(TT)测定1. 实验原理将试剂加入抗凝血浆中，试剂中的牛凝血酶可直接作用血浆中的纤维蛋白原生成纤维蛋白凝块,通过660nm光照射血浆,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶时间。2. 标本采集2。1 早晨空腹采血（空腹12小时左右),静脉采血.2。2 3.8%（w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀.3. 标本存放：全血贮存在410oC不超过2小时，最好1小时内（3000r/min15min)分离血浆，此血浆在室温2224oC下可存放2小时，在24oC可存放4小时，在-20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下,在-70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时,应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。4。 标本运输：低温条件下运输。5。 标本拒收的标准：抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固，溶血,脂血标本不能作测定.6。 实验材料:6。1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。1)TT测定试剂盒(代号P/N: 9758515）冻干牛凝血酶（含缓冲液和稳定剂)4瓶浓缩稀释液（含CaCl2500mmol/L、缓冲液、防腐剂）1瓶注意:稀释液中含有叠氮钠，在金属铅制品中可形成爆炸性叠氮化物，应适当处理.2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N： 20003700）3）正常质控血浆Normal control plasma(代号P/N: 20003110)6.2试剂准备浓缩稀释液：用蒸馏水1：5（1+4）稀释浓缩的稀释液。冻干牛凝血酶：根据样品来源和分析需要来制备。稀释好的稀释液/1瓶凝血酶浓度筛选实验5.0ml3。0uNIH/ml8.0ml1.9uNIH/ml肝素治疗2.0ml7.5uNIH/ml盖上盖子，轻摇至完全溶解，置1525oC30分钟，用前摇匀,勿用力振摇.6。3试剂保存未开封的试剂可保存在28 oC至试剂盒上标明的有效期。稀释好的稀释液在1525oC可保存1个月；牛凝血酶溶解后，于原瓶中28 oC，15天内有效建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于28 oC.7. 仪器设备：7.1 仪器名称： syxmex CA7000全自动血凝仪 7.2 仪器厂家：日本希森美康公司7.3 仪器型号：CA70007。4 仪器技术参数：7。4.1 试剂位:18个，具冷藏功能。7.4.2 样本位:40个，可通过换盘连续添加。7。5 仪器校准程序:7.5。1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。7。5。2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。8。 操作步骤：8.1 开机:CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检,当屏幕上边显示Ready时可进行试检8。2洗针：在主屏幕上选Rinse Probe键，然后按Execute进行洗针8.3 检查消耗品：1。准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。2.准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting,按屏幕显示位置放置试剂。注意:共三个位置放清洗液。3。查看仪器的洗液瓶和废液瓶8.4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。8。5 输入检测项目:主菜单上的按下Work list键，进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键重复：按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。输入样本号：按屏幕下菜单的ID NO。Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。开始检测:录入完所有测试信息,按下屏幕右上角START键,开始检测查看结果：返回到主屏幕， 检测的项目如果由变成表明此试验已经完成.按下Stored Date键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息.如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。8。6 洗针：当做完一批标本后,需要洗针，按下Rinse Probe然后按下Execute进行洗针8。7 关机：回到主屏幕下,在洗完针后方可关机，切断电源,同时关闭压力泵和总电源。9。 检验结果的判断与分析:9。1 仪器测定TT的线性范围在5600秒,测定完成后仪器显示TT秒数，若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息:.出现错误，不能得到分析数据。不能计算参数。数值超出线性范围。9.2 仪器设定TT参考范围在1118秒，如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记： 出现错误信息 数据高于可报告的高限10。 质量控制：每批样本同时测定三个浓度水平(正常值低值和高值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考ACL9000全自动血凝仪操作手册。 11. 临床意义: 11.1 参考范围：1118秒（不同厂家试剂有不同参考范围，请参照试剂说明书）11。2 TT延长：患者血循环中AT-活性明显增高，肝素增多或类肝素抗凝物质存在,如SLE、肝病肾病等;异常纤维蛋白原血症，低（无）纤维蛋白原血症（80mg/dl)，纤维蛋白原降解物FDP的增加（如DIC纤溶期),异常球蛋白增多(如MM）等。11.3 TT缩短：常见于血样本有微小凝块或钙离子存在及PH呈酸性时。12。 变异的潜在来源12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查12.2 标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。12。3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。12。5 FDP增加使凝固时间延长。12。6 某些药物,如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。12。6血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。试剂制备 游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂5ml 500mg/dl 20mg/dl 1000mg/dl8ml 500mg/dl 20mg/dl 500mg/dl2ml 无影响 20mg/dl 1000mg/dl13. 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解13。1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡.14。 仪器维护与保养14.1 每日保养：14.1.1开机前观察样品参比液液面，看是否够做测定。14。1。2 注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶.14.1。3让开关机尽量减少到最少.14。1。4 检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯。14.1。5在每天工作前和工作后，执行冲洗程序：按“PROG”,显示应用菜单，选择“PRIMING”,按“ENTER”确认。14。2每周保养14.2.1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔.14。2.2进入清洁程序清洁吸样针14。2。3清洁冲洗/废液池.14.3每月保养清洁空气过滤网14。4根据需要14。4.1清洁废液管路14.4.2清洁溢出的样本14。4.3更换吸样针组件14.4。4调整吸样针位置14.4.5对吸样针/试剂针排污处理15。 参考文献15。1 叶应妩.王毓三等全国临床检验操作规程第三版，东南大学出版社.15.2 CA7000全自动血凝仪操作手册血浆纤维蛋白原(Fbg）测定1。 实验原理将试剂加入稀释的抗凝血浆中，试剂中过量的牛凝血酶可直接作用血浆中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，此反应过程的速率即反映了纤维蛋白原的浓度和功能.通过660nm光照射血浆，测定其凝固反应的散射浊度变化。2. 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右），静脉采血。2。2 3.8%(w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀.3。 标本存放 全血贮存在410oC不超过2小时，最好1小时内（3000r/min15min）分离血浆,此血浆在室温2224oC下可存放2小时，在24oC可存放4小时，在20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。4. 标本运输:低温条件下运输。5。 标本拒收的标准:抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。6. 实验材料：6。1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。1）FIB-C测定试剂盒（代号P/N:8469110）冻干牛凝血酶（35uNIH/ml）8瓶异常质控血浆2瓶2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N： 20003700)3）正常质控血浆Normal control plasma（代号P/N： 20003110）4）低纤维蛋白原质控血浆Low fibrinogen control（代号P/N:20004200）5)因子稀释液（代号P/N：9757600） 6）清洗液A Cleaning solution（代号P/N：9831700）7）清洗液B Cleaning agent(代号P/N：9832700)6。2试剂准备牛凝血酶：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶牛凝血酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解,置1525oC 30分钟，用前摇匀,勿用力振摇。异常质控血浆:用1mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶血浆,盖上盖子，轻摇至完全溶解,置1525oC 30分钟,用前摇匀，勿用力振摇。6.3试剂保存未开封的试剂可保存在28 oC至试剂盒上标明的有效期。试剂溶解后，凝血酶：于原瓶中28 oC，3天内有效；于原瓶中-20 oC，1个月有效;ACL(15oC)，3小时有效。异常质控血浆：于原瓶中，1525oC,4小时有效;-20 oC，7天有效。建议试剂不使用时,最好将其倒回原瓶中,保存于28 oC.7. 仪器设备：7。1 仪器名称：syxmex CA7000全自动血凝仪 7.2 仪器厂家：日本希森美康公司7.3 仪器型号：CA70007.4 仪器技术参数：7。4.1 试剂位:18个，具冷藏功能.7.4.2 样本位：40个，可通过换盘连续添加.7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准.7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行)。8。 操作步骤:8。1 开机：CA7000的开关在仪器的右侧.开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检8.2洗针：在主屏幕上选Rinse Probe键,然后按Execute进行洗针8.3 检查消耗品：1.准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。2.准备试剂:按照仪器对试剂的要求,把每一项的试剂准备好,放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示位置放置试剂。注意：共三个位置放清洗液.3.查看仪器的洗液瓶和废液瓶8。4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。8.5 输入检测项目：主菜单上的按下Work list键，进入工作菜单.输入项目，直接点击相应的实验项目键重复：按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息.输入样本号：按屏幕下菜单的ID NO。Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。开始检测:录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START键，开始检测查看结果：返回到主屏幕， 检测的项目如果由变成表明此试验已经完成。按下Stored Date键，出现已存储结果界面,屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线,按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。8.6 洗针：当做完一批标本后，需要洗针，按下Rinse Probe然后按下Execute进行洗针8.7 关机:回到主屏幕下，在洗完针后方可关机，切断电源,同时关闭压力泵和总电源。9. 检验结果的判断与分析：9.1 仪器测定Fbg线性范围在0。25g/L10g/L，测定完成仪器将显示每个参数的计算结果（包括凝固时间与Fbg含量g/L）,若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：，出现错误，不能得到分析数据，不能计算参数，数值超出线性范围.9.2 仪器设定Fbg参考范围在24g/L,如果得到一个不正常数值，在数据的左侧将出现下列标记： 出现错误信息 数据低于可报告的低限 数据高于可报告的高限10. 质量控制：每批样本同时测定三个浓度水平(正常值低值和高值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。至少每8小时做一次质控分析.用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。 11. 临床意义：Fbg是用于判定血栓前状态或血栓性疾病的必查项目。11.1 参考范围: 2-4g/L11。2 Fbg含量增高：高凝状态（如糖尿病伴血管病变,急性心肌梗塞,脑血管病变，口服避孕药,妊娠及其中毒症,深静脉血栓形成,动脉粥样硬化，高血脂症等);亦见于急性传染病，急性感染，肾小球疾病活动期，放射治疗后，烧伤，休克，外科手术后，恶性肿瘤，多发性骨髓瘤等.11.3 Fbg含量减少：肝脏疾病（重症肝炎，慢性肝炎,肝硬化等）；DIC消耗性低凝血期及纤溶期,溶栓治疗的监测，原发性纤维蛋白原缺乏症,原发性纤溶活性亢进，恶性贫血及肺、甲状腺、子宫、前列腺手术等.11。4 纤维蛋白原异常：纤维蛋白原异常是一种遗传疾病,是常染色体显性遗传。患者Fbg含量可能在正常范围，但纤维蛋白原有质的异常。主要是Fbg分子的一个多态上出现一个异常氨基酸，临床上可无症状或有轻度出血倾向。12。 变异的潜在来源12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不能用于Fbg测定项目，抗凝比例不当也将影响结果的准确性。12.2 样本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现小凝块；混匀时过分用力，使红细胞破坏出现溶血，均会造成结果变异。12.3 纤溶药物的影响：如双香豆素、链激酶、尿酶等12。4 妊娠与急性炎症的影响13. 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括