亚抑菌浓度抗生素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响说课材料.doc
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1、此文档收集于网络,如有侵权请联系网站删除 青岛大学硕士学位论文亚抑菌浓度抗生素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响姓名:李俊娟申请学位级别:硕士专业:内科学(呼吸病学)指导教师:蒋捍东20110526此文档仅供学习和交流 亚抑菌浓度抗生素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响目的:研究四种抗生素在不同亚抑菌浓度下对铜绿假单胞菌生物膜形成的影环丙沙星和阿米卡星的诹街峙嘌芯和痩。静态造膜结果:在校婷顾嘏时能抑制生物膜的形成,而在浓度时促进生物膜的形成;在培养基中,阿奇霉素浓度为时均促进铜绿假单胞茵生物膜形成。亚抑菌浓度的头孢他啶和环丙沙星在蚅嘌芯种粕锬纬桑话卓窃贛培养基中浓度为关键词:铜绿假单胞菌,生物膜,阿奇
2、霉素,亚抑菌浓度 , 琫 疘琧簆, 引言引言在人类感染疾病中有的非社区获得性感染与生物膜相关】。很多细菌如铜 材料和方法第一章论文菌株来源头孢他啶:葛兰素史克产品戊二醛虾硫代硫酸钠无水物本翘嘶邢薰无水氯化钙奇杞;邢薰硝酸银嘌粢嘶嫌邢拊鹑喂对苯二酚毡救呋喃酮细菌培养箱毡恒温摇床妫医用硅胶片钲谑辛V谖耙迪鹚芸萍加邢薰 青岛大学硕士学位论文先将菌种取出于固体培养平板划线,置于温箱内过夜培养,后挑取单菌落取菌液用酶标仪测值,稀释菌液至在孔内混匀后取出尤氲煸群笤偃转至第校来渭又恋趖。先将菌种取出于固体培养平板上划线,置于温箱内过夜培养,后挑取单菌用灭菌水新配置四种抗生素,并加入到上述四个试管中,使得阿奇
3、霉素、头孢他啶、环丙沙星及阿米卡星的终浓度均为。做好标记挑取单菌落接种子四个试管中,于恒温摇床中培养分别于,菌液测定值描绘细菌生长曲线微管静置造膜,绘制生物膜生长时间曲线离心管阄乱补培养用对菌液进行适当稀释; 材料和方法孔板静置造膜,绘制生物膜生长时间曲线将孔板倒扣于吸水纸上,将水分吸干;新配置四种抗生素,并于管中倍比稀释至一系列的亚抑菌浓度在孔板中第入已倍比稀释的抗生素好靠准尤。每列为一个亚抑菌浓度,每个浓度有鲋馗础贚蚆培养基中分别造膜。其中在加入阿奇霉素的铜绿假单胞菌造膜中,另外测定阿奇霉素浓度为和试管内静态造膜 青岛大学硕士学位论文用灭菌水新配制阿奇霉素,在用双蒸水多次充分漂洗,去掉浮游
4、菌。蒸馏水清洗蒸馏水清洗跛嵋芤悍从 蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗 结果第二节结果环丙沙星及阿米卡星在两种培养基中一致,分别为痩及。生长曲线测定在培养基培养时,四种抗生素阿奇霉素、头孢他啶、环丙沙星和阿米乏至三兰麓麓微管生物膜生长曲线测定 青岛大学硕士学位论文微图疚狿装迳锬氖奔淝摺门嘌狹髓培养基。纵 时,阿奇霉素浓度为时的硅胶片生物膜形成最多,空白组居中,不同浓度的阿奇霉素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响:在嘌校婷顾嘏任、及时生物膜形成量少于空白对照组,与空白对照组比较差别有统计学意义注:表示与空白对照组比较, 青岛大学硕士学位论文物膜形成量多于空白对照组,差别有统计学意义,任,鏼跏对亚抑菌浓度的环丙沙星
5、星对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响:、时生物膜形成量均少于空白对照组,统计学意义,尺迪昙 虹巍蜼亚抑菌浓度的阿米卡星对生物膜形成的影响:时所形成的生物膜量明显少于空白对照组,与空白对照组比较差别有生物膜形成量明显多于空白对照组,差别有统计学意义釵迪昙 青岛大学硕士学位论文 讨论第三节讨论并且极易形成生物膜。在呼吸科,肺部结构病变的患者往往会伴有的感染,如肺,、支气管扩张及慢性阻塞性肺部疾病等患者往往存在铜绿假单胞菌的持续的慢性感染,常常可形成铜绿假单胞菌生物膜。细菌生物膜是指在多聚糖、蛋白质和核酸等组成的基质内相互粘连粘附于物体表面的细菌群体。细菌生物膜一旦形成,固着态的耐药性将在原来浮游态的基
6、础上增加数倍至数千倍,常规药敏试验敏感的药物可能已经耐药,导致感染难以清除。极易形成生物膜,这也是导致临床上抗茵治疗失败的重要原因之一。是近年来感染领域研究的热点,主要集中于其耐药机制的研究:如可产生抗生素灭活酶或抗生素修饰酶,如一内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等;改变抗菌药物作琇嘌信嘌钡腗值为痩。可见不同培养条件下浮游菌对 青岛大学硕士学位论文的形成,对于其机制尚不明确。膜结果亦提示亚抑菌浓度的阿奇霉素能促进生物膜的形成。亚抑菌浓度抗生素对细菌生物膜形成的调控随抗生素种类、浓度、作用时间和菌种 讨论依据本实验条件,亚抑菌浓度的阿奇霉素能抑制浮游菌的生长,但是却促株生物膜的形成过程如下:发现菌株在左
7、右即开始在玻片表面黏附聚集,在培养熳笥沂保皇浅醪叫纬缮锬天时基本具备生物膜三维结构,此后生物膜逐渐达到平衡状态。但在本实验在孔板、玻璃试管内及硅胶片静置造膜时,的阿奇霉素与空白对照组比较抑制了的胞外多糖的产生。故推断在本实验中培 青岛大学硕士学文论文对生物膜的促进作用,并非通过激活发挥主要作用的,这也是与众多研究在嘌信嘌保繁承桥任狹时均可以抑制生物膜 大,故本实验选用了倍比稀释的方法,这样就不可避免导致两个浓度间距太大。但是目前关于亚抑菌浓度头孢他啶和环丙沙星对铜绿假单胞菌生物膜的影响研究并不且根据实验结果得出:亚抑菌浓度阿奇霉素促进生物膜的形成;而亚抑菌浓度的头孢他啶、环丙沙星及阿米卡星对生
8、物膜的影响与浓度和培养基有密切的关系。对于亚抑菌浓度抗生素对铜绿假单胞菌生物膜的影响的机制尚不清楚,尤其是大环内酯类阿奇霉素所表现的促进生物膜形成的作用,本实验可以除系统引起的作用,对于其具体机制需要进一步探讨。 霉素的敏感性亦不同。件密切相关 附图空白图婷顾嘏任杞浩炷峁放大倍数醅二二、:了一。懈。 青岛大学硕士学位论文、:冀。骸鬻蘩鎏、,“:鬻遂摹攀。:建摹琷茹裫鬻笺一 口痩痩 : 甈琈琣甂瓸,瓵甆珺:珿甒;鳎瓸簃 ;:铑龋炊嘌圆煌竿碳俚锬舾行缘挠跋靃山东医药,甴海痺產産痯狟琓: 。 ,: 青岛大学硕士学位论文志,:成的动态观察谌酱笱:,:,甁琍觯琍 ,】,:;珻琍,琘琕 珺 : 瓾珼 铜绿
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