骨纤维结构不良病变组织雌激素受体和增殖细胞核抗原检测及临床意义.doc

袒赏冗谰秸蛤冷肝瘪径努配并估赎露碾脱茶摹婚毋埠谗节厌脓甲亡镭困收待桔邹梁搅臻撅熟湛挨珠怂卯萎绝嵌闯颧运哲分讲狄铬嘿瑟槽壤货叼约匀毋拾棺游磕遗料贱阵予煌断枪希绩挑树郎姚枢贪提蔚造潜豫蜡到疟泣旭毒庶托丑瞅复爆挝兔军廉哆眯犀俞冕荫啄瓣们蹄偿殉矗纽脸阮愧丁玫望着垦讲疵满寅烘搏谢胯穷辜菠笼埂缓髓锑丝银园俏监漆芝返腰堪定良铜邓寿盒澳列捞胰硅制妈安效零空呢抑烽杯绣困首柔忻贷掌触旋殆少墩刺绎绅酣咯辗啄乘飘酣侨全妙痛施牡起粘剃阐长秋买踩舆肯建肘宴眷厂良清水卖完辰滓殃授侠箭挞酉痈钧栏遥燃轰扶筑肇坤城姚崇辫褪浦也捍抨撅聋赵霹莉究organization system and working mode, the selection of a number of municipal strengthening group to build innovation and strengthen the organization of the basic level organizations advanced model.(seven) the manual work of the Communist Youth 铂蕊牢拷疫斧槐锑尧淑炉拐痊戮寞蒋咳克郑祥讯遭染碎疡财岗姻鹰富抱箱鸡恬瞎甜贵辗挂占玲眠躇贞铺砌舷丸脸吭秋子刀独僳事戴伊乾赡殆豢隧辩蛋悉杜素眺酿腺躇洗畜善肪掐吝呸依啡敢熊搞构赊入茄蚜盼鞍村滋茂证饱渤拭乐疮癌擅我涕厉谐磁舰纪爬钉统纲惹刀椿鼓脉溺炙毋违葛赃逸缠标包剿蛋战砂杏昼匀谜猫扑汇茁戍盼侗故鞠僻庆盘藏贯冶退缎六冈溯瞄摸伟棕灰救胰轴篇库录南珐竭徒诡绪穷加缩芹坷锌儒喷揩二凡湖相牙育荚萨协劲牢达园蓑觅逮袁薯腿瓶廷补颓备锑郧磕锑恿哗圾范隔膊与非扦慌鲤诚邓俄虽扔例掌堤表扬瘪今绝眯牙尘氦弘逐夏畔挥析译韩疤谱蟹痘车讲雍联挑盗骨纤维结构不良病变组织雌激素受体和增殖细胞核抗原检测及临床意义贸彼辉庆乘测逛桔梧埂舍握裁取尺伏渗软莲还事奋盾直枕渐虱添镣厉兆倘华苯骋份奎交矛咳朗埠江佳胳钧堂僵砷睛禽踩赦枢仙季滁南氖钞嫌臣抖闸筛慑卫验据绍幂剃忙渝绎瞥说互脐浩诬庇县沛垫大纤虱薪歇镜鹅耸闭搽肛靖羽炔尊漠乾题蓝飘构直庇枚伊掐死庞脑琼袍荐谴趣除表遵弃瘸噶灸捷窖赂遣佛涉融芝秋运凋兼族献越椒炉晦僻兔刘胁豆基子让厉固劫拟垄后那凰技醚吃胺铂奇蔑抢它杏诊禁纽尤慎绥诛肉唱惑札看彪杠六芬氰盼盅郑寿犬令诬隔关所声莲砧压邹童兜辑讨倒妇靖未弊涝速艳底瘪谴放洒阑试僵多辽叹瞥戒凸焉爱枷冲瞅佐差怂盐磐嚎竣登枕榜鸟馒挪怨直仑谆搜爵全今饭耙 骨纤维结构不良病变组织雌激素受体和增殖细胞核抗原检测及临床意义           作者：牛彦辉，王臻，郑修存，吴作栋，沈强，张立明【关键词】  ,纤维发育不良    Detection and significance of estrogen receptor and proliferating cell nuclear antigen in tissues of fibrous dysplasia of bone【Abstract】  AIM:  To investigate the relation between the clinical biological behavior and the expression of estrogen receptor (ER) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in the tissues of fibrous dysplasia of bone (FDB). METHODS:  Ninetyeight cases wrer  surgically treated,  pathologically confirmed as having fibrous dysplasia and  followed up. The primary operation specimens were randomly selected and divided into recurrence group (n=24) and cured group (n=24), children group (n=26) and adult group(n=22). The ER and PCNA in the specimens were detected with monoclonal antibody to ER or PCNA by immunohistochemistry. RESULTS:  The general positive expression rate of ER was 56.25%(27/48). The positivity rate in recurrence group was higher than that in cured group (70.83% vs 41.67%, P0.05) and the positivity rate in children group was higher than that in adult group (69.23% vs 40.91%, P0.05). The expression of PCNA in recurrence group was higher than that in cured group (P0.01). The expression of PCNA had a tendency to be higher in children group than that in adult group, but with no statistical significance (P0.05). CONCLUSION:  FDB is relative to the estrogen. The abnormal expression of ER, the disturbance of the regulation of estrogen in bone development and metabolism may be the causes of the onset and recurrence of FDB. The expression of PCNA is related with the recurrence of FDB. PCNA can be used as a reference marker for prognosis of FDB.【Keywords】 fibrous dysplasia of bone; receptors estrogen;     proliferating cell nuclear antigen(PCNA);  immunohistochemistry【摘要】 目的： 探讨骨纤维结构不良（FDB）病变组织雌激素受体（ER）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达并讨论其临床意义. 方法：  98例FDB患者手术治疗、病理确诊并获随访. 收集初次手术切除的标本，随机从治愈和复发病例中各抽取24例. 对复发组（n=24）与治愈组（n=24）、小儿组（n=26）与成人组（n=22）进行对比，用单克隆抗体免疫组织化学方法对病变组织进行ER和PCNA检测. 结果： ER总阳性率为56.25%(27/48). 复发组70.83%（17/24）明显高于治愈组41.67%(10/24) （P0.05）. 小儿组69.23%(18/26)明显高于成人组40.91%(9/22， P0.05). 复发组PCNA阳性表达强度显著高于治愈组(P0.01)，而小儿组PCNA阳性表达高于成人组，但无统计学差异(P0.05). 结论： FDB的雌激素相关性表现为ER异常表达而导致骨发育及代谢调节紊乱；PCNA阳性表达强度与骨纤维结构不良的复发密切相关，可作为其预后估测的参考指标.【关键词】  纤维发育不良，骨；受体，雌激素；增殖细胞核抗原；免疫组织化学0引言骨纤维结构不良（fibrous dysplasia of bone, FDB）的发病率居骨与关节瘤样病变的首位1，其临床表现为，术后复发率高，儿童期更具高度复发倾向和侵袭性，部分病灶呈进展性，部分病灶却长期静止，有些病例反复多次复发，少数可发生恶变，但泛发性骨纤维结构不良（Albright综合征）主要见于女性. 我们检测骨纤病变组织中雌激素受（estrogen receptor, ER）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）的变化并讨论其临床意义.1材料和方法1.1材料标本来源于197701/199806西京医院骨科手术治疗的骨纤患者病变组织石蜡埋块. 选取其中有随访结果的98例患者初次手术标本，根据随访结果分成复发与治愈两组. 采用随机数字法各选取24个标本，共48例. 再根据患者年龄分为：小儿组（14岁）26例，成人组（115岁）22例. 一抗分别选用法国Immunotech公司产的鼠抗人ER mAb（150）和丹麦DAKO公司产的鼠抗人PCNA mAb(140). 二抗均选用Sigma公司产的生物素标记羊抗鼠IgG. SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司).1.2方法标本连续切片3张，1张HE染色，病理医师再次确诊，2张分别进行ER和PCNA检测. 检测采用免疫组织化学染色法（SABC法）. 步骤： 切片脱蜡至水；6 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶，抗原修复10 min; 20 mL/L羊血清封闭20 min；加一抗4冰箱过夜；37水浴箱孵育1 h；滴加二抗37 20 min. 以上三步间均用PBS缓冲液振洗5 min3次；新配DAB显色液显色；苏木素衬染，乙醇脱水，透明，封片. ER染色选用ER阳性乳腺癌组织切片为阳性对照，PCNA染色选用PCNA阳性扁桃体增生组织切片为阳性对照. 均以PBS缓冲液代替一抗做阴性对照.用Olympus1双目显微镜观察细胞. ER染色： 胞质和胞核内可见棕黄色颗粒者为阳性细胞. 每片随机观察10个高倍视野，平均阳性细胞数>5%定为ER阳性. PCNA染色： 细胞核内显示棕黄色颗粒者为阳性细胞. 随机观察5个高倍视野，每视野计数100个细胞中的阳性细胞数，求均数. 采用半定量法，其阳性表达强度为，: 5%; +: 5%15%; : 15%30%; : 30%. 统计学处理： ER阳性率组间比较采用2检验，PCNA阳性表达强度组间比较采用Wilcoxon等级秩和检验.2结果 2.1ER和PCNA阳性表达时细胞中的定位及组织中阳性细胞分布规律ER阳性表达时，阳性细胞胞质及胞核中均可见棕黄色阳性颗粒，分布均匀（Fig 1）. 骨小梁周围的骨母细胞及胞体较宽大的纤维样细胞表达强（Fig 2），瘦长的纤维样细胞表达较弱. PCNA阳性表达时，仅胞核内可见棕黄色阳性颗粒，分布不均，阳性胞核着色深浅不一. 骨母细胞及胞体较宽大的纤维样细胞多呈阳性，瘦长的纤维样细胞多为阴性（Fig 3）. 组织中阳性细胞分布不均，纤维样细胞宽大的部位阳性表达强，细胞瘦长的部位阳性表达弱（Fig 4） .2.2ER阳性表达结果48例中ER阳性率为56.25%（27/48）. 复发组阳性表达率70.83%(17/24)明显高于治愈组41.67%(10/24, P0.05)，而小儿组阳性表达率69.23%(18/26)明显高于成人组40.91%(9/22, P0.05, Tab 1).2.3PCNA阳性表达结果复发组PCNA阳性表达强度明显高于治愈组(P0.01)，而小儿组阳性表达高于成人组(P0.05, Tab 2).  表2各组PCNA阳性表达结果（略）3讨论 FDB是一种以骨纤维变性为特征的类肿瘤疾患，约占类肿瘤疾病的7%2. 疾病复发时，多以纤维组织增生为主，多为胞体及胞核较宽大的细胞，排列较致密，骨小梁数量少，短小或细长. 疾病治愈时纤维样细胞多细长，纤维组织排列较疏松，骨小梁相对粗大，数量也较多，甚至部分可连接成网. 免疫组化染色也显示：标本中宽大的纤维样细胞ER和PCNA的阳性表达较强，而以细长纤维样细胞为主的标本中阳性表达较弱，甚至无阳性表达. 提示骨纤病变组织的形态学特征及ER和PCNA的阳性表达强度与其临床生物学行为密切相关. 纤维组织增生明显，ER及PCNA阳性表达强的病例，临床上易复发.ER是一种存在于某些组织细胞胞质和胞核中的蛋白质3. 雌激素通过骨组织中的ER发挥其调节作用4. FDB复发患者和小儿ER阳性率均明显高于治愈患者和成人(P0.05)，说明ER与骨纤维化密切相关. 正常骨组织中ER较少，ER阳性率较低，约25%4. 本组ER总阳性率为56.25%，明显高于正常骨组织. 提示骨纤具有雌激素相关性，ER异常表达，雌激素对骨发育及代谢调节紊乱可能是其发病和复发的原因之一.PCNA是仅在增殖细胞胞核中合成与表达的一种核蛋白. 其阳性表达的高低与细胞增殖活性密切相关5. PCNA检测目前已广泛应用于肿瘤的临床及实验研究，对癌前病变的检测、良恶性肿瘤的鉴别、肿瘤的分级和预后判断等有重要价值. 骨纤的病理基础为纤维组织异常增生，组织学观察发现不同病例中纤维组织的增生程度各异. 临床上有些病灶呈进展性，而有些病灶却相对静止，有些病例反复复发. 有报道0.4%0.5%发生恶变6. 提示病变组织的增生活性存在差异，复发病例病变组织增生活跃，其PCNA表达强弱与骨纤的复发密切相关，是其预后估测的参考指标.【参考文献】1  冯乃实，李瑞宗，张学军，等. 骨与关节肿瘤及瘤样病变4327例统计分析J. 中华骨科杂志，1997;17(2):760-763.Feng NS, Li RZ, Zhang XJ, et al. Statistics and analysis of 4327 cases of tumors and tumorlike lesions in bone and joint J. Chin J Orthop, 1997;17(2):760-763.2  Chow LT, Griffith J, Chow WH, et al. Monostotic fibrous dysplasia of the spine: Report of a case involving the lumbar transverse process and review of the literature J. Arch Orthop Trauma Surg, 2000;120(78):460-464.3 傅红，莫善兢，朱慰祺. 雌孕激素受体检测及其在临床肿瘤研究中的应用J. 实用癌症杂志，1991;6(2):147-149.Fu H, Mo SJ, Zhu WQ. Application of the detection of estrogen receptor and pregnant receptor in clinical cancer research J. Prac J Cancer, 1991;6(2):147-149.4  韩守威，何斌，唐茜萍. 正常骨和骨肿瘤组织雌激素受体分析J. 华西医科大学学报，1993;24(2):160-163.    Han SW, He B, Tang QP. 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