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检验科生物安全培训材料
一、我科根据危险度评估结果将微生物因子归入二级生物安全水平􀋸需要进行二级生物安全
水平的设施、仪器、操作和规程.实验室操作时加防护服、生物危害标志􀋸开放实验台􀋸此
外需BSC 用于防护可能生成的气溶胶。生物安全水平对设施最低要求􀋻高压灭菌器、生
物安全柜.
二、二级生物安全水平实验室要求
1􀋹人员防护
1、在实验室工作时􀋸任何时候都必须穿着工作服.
2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物
的操作时􀋸应戴上合适的手套.手套用完后􀋸应先消毒再摘除􀋸随后必须洗手。
3、在处理完感染性实验材料后􀋸以及在离开实验室工作区域前􀋸都必须洗手。
4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害􀋸必须戴安全眼镜、
面罩􀋶面具􀋷或其他防护设备。
5、严禁穿着实验室防护服离开实验室􀋸􀋶如去餐厅、办公室、员工休息室和卫生间􀋷.
6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子.
7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜.
8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。
9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。
2􀋹操作规范
1、严禁用口吸移液管。
2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。
3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。
4、应限制使用皮下注射针头和注射器。皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作
其他用途。
5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时􀋸必须向实验室主管报告。实验室
应保存这些事件或事故的书面报告。
6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序􀋸并予以遵守执行.
7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染􀋶采用化学或物理学方法􀋷.根据
所处理的微生物因子的危险度评估结果􀋸可能需要准备污水处理系统。
8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染.
3􀋹基本生物安全设备
1、生物安全柜􀋸在以下情况使用􀋻
-—处理感染性物质􀋼如果使用密封的安全离心杯􀋸并在生物安全柜内装样、取样􀋸则
这类材料可在开放实验室离心
——空气传播感染的危险增大时
—-进行极有可能产生气溶胶的操作时􀋶包括离心、混匀、剧烈摇动、打开内部压力和周
围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器以及采集感染性组织。 。。
3、一次性塑料接种环􀋸也可在生物安全柜内使用电加热接种环􀋸以减少生成气溶胶。
4、螺口盖试管及瓶子。
5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器。
6、一次性巴斯德塑料移液管􀋸尽量避免使用玻璃制品。
7、在投入使用前􀋸像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进行验收。
废弃物处理
废弃物处理的首要原则是所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧.
污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序
对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理􀋸相关工作要遵守国家和国际规定。
废弃物可以分成以下几类􀋻
1、可重复或再使用􀋸或按普通“家庭"废弃物丢弃的非污染􀋶非感染性􀋷废弃物
2、污染􀋶感染性􀋷锐器—-皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃􀋼这些废弃物应收
集在带盖的不易刺破的容器内􀋸并按感染性物质处理
3、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料
4、高压灭菌后丢弃的污染材料
5、直接焚烧的污染材料。
锐器
皮下注射针头用过后不应再重复使用􀋸包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断
等􀋸应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。单独使用或带针头使用的一次性注射器应
放在盛放锐器的一次性容器内焚烧􀋸如需要可先高压灭菌.
盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的􀋸而且不能将容器装得过满.当达到容量的四
分之三时􀋸应将其放入“感染性废弃物"的容器中进行焚烧􀋸如果实验室规程需要􀋸可以先
进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场.
高压灭菌后重复使用的污染􀋶有潜在感染性􀋷材料
任何高压灭菌后重复使用的污染􀋶有潜在感染性􀋷材料不应事先清洗􀋸任何必要的清洗、
修复必须在高压灭菌或消毒后进行。
废弃的污染􀋶有潜在感染性􀋷材料
除了锐器按上面的方法进行处理以外􀋸所有其他污染􀋶有潜在感染性􀋷材料在丢弃前应
放置在防渗漏的容器􀋶如有颜色标记的可高压灭菌塑料袋􀋷中高压灭菌。高压灭菌后􀋸物品
可以放在运输容器中运送至焚烧炉.如果可能􀋸即使在清除污染后􀋸卫生保健单位的废弃物
也不应丢弃到垃圾场。如果实验室中配有焚烧炉􀋸则可以免去高压灭菌� .污染材料应放在指
定的容器。 。如有颜色标记的袋子。 。内直接运送到焚烧炉中。可重复使用的运输容器应是防渗
漏的. 。有密闭的盖子。这些容器在送回实验室再次使用前。 。应进行消毒清洁。
应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器、盘子或广口瓶。 。最好是不易破碎的容器. .如
塑料制品。 .。当使用消毒剂时. 。应使废弃物充分接触消毒剂. .即不能有气泡阻隔� .. 。并根据
所使用消毒剂的不同保持适当接触时间。盛放废弃物的容器在重新使用前应高压灭菌并清
洗。
实验室中生物安全柜的使用
位置
最为理想的是􀋸生物安全柜应位于远离人员活动、物品流动以及可能会扰乱气流的地方。在
安全柜的后方以及每一个侧面要尽可能留有30 cm 的空间􀋸以利于对安全柜的维护。
操作者
手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟􀋸以使安全柜调整完毕并且让里面的空气“扫
过”手和双臂的表面以后􀋸才可以开始对物品进行处理.要在开始实验之前将所有必需的物
品置于安全柜内􀋸以尽可能减少双臂进出前面开口的次数.
物品放置
Ⅱ级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻挡。放入安全柜内的物品
应采用70％酒精来清除表面污染.可以在消毒剂浸湿的毛巾上进行实验􀋸以吸收可能溅出的
液滴.所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台后缘的位置􀋸并使其在操作中不会阻
挡后部格栅.可产生气溶胶的设备􀋶例如混匀器、离心机等􀋷应靠近安全柜的后部放置。像
有生物危害性的废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品􀋸应该放在安
全柜内的某一侧.在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。
耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及吸管盛放盘不应放在安全柜的外面􀋸否则在使用这些
物品时双臂就必须频繁进出安全柜􀋸这样会干扰安全柜空气屏障的完整性􀋸从而影响对人员
和物品的防护。
操作和维护
大多数生物安全柜的设计允许整天24 h 工作.研究人员还发现􀋸连续工作有助于控制实验
室中灰尘和颗粒的水平。A1 型及_级A2 型生物安全柜􀋸在不使用时是可以关闭的。其他如
_级B1 型和_级B2 型生物安全柜􀋸是通过硬管安装的􀋸就必须始终保持空气流动以维持房
间空气的平衡.在开始工作以前以及完成工作以后􀋸应至少让安全柜工作5min 来完成“净
化"的过程。 。亦即应留出将污染的空气排出安全柜的时间。
紫外灯
生物安全柜中不需要紫外灯。如果使用紫外灯的话􀋸应该每周进行清洁􀋸以除去可能影响其
杀菌效果的灰尘和污垢.
明火
在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中􀋸应避免使用明火.在对接种环进行灭菌
时􀋸可以使用微型燃烧器或电炉􀋸而不应使用明火。
溢出
一旦在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时􀋸应在安全柜处于工作状态下立即进行
清理.要使用有效的消毒剂􀋸并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成.所有接触溢出
物品的材料都要进行消毒和􀋺或高压灭菌.
清洁和消毒
在实验结束时􀋸包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染􀋸并移
出安全柜。在每次使用前后􀋸要清除生物安全柜内表面的污染.工作台面和内壁要用消毒剂
进行擦拭􀋸所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物.在每天实验结束时􀋸
应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染.在对目标
生物体有效时􀋸可以采用漂白剂溶液或70％酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后􀋸
还必须用无菌水再次进行擦拭。推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话􀋸则应在
关机前运行5min 以净化内部的气体。
清除污染
生物安全柜在移动以及更换过滤器之前􀋸必须清除污染。最常用的方法是采用甲醛蒸气熏蒸.
应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染.
个体防护装备
在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。手套应套在隔离衣的外面􀋸可以戴加有松紧
带的套袖来保护研究人员的手腕。有些操作可能还需要戴口罩和安全眼镜。
实验室技术
实验室中标本的安全操作
标本容器
标本容器可以是玻璃的􀋸但最好使用塑料制品.标本容器应当坚固􀋸正确地用盖子或塞子盖
好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地粘贴标签以便于识别.标本的
要求
或说明书不能够卷在容器外面􀋸而是要分开放置􀋸最好放置在防水的袋子里。
标本在设施内的传递
为了避免意外泄漏或溢出􀋸应当使用盒子等二级容器􀋸并将其固定在架子上使装有标本的容
器保持直立.二级容器可以是金属或塑料制品􀋸应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作
用。
密封口最好有一个垫圈􀋸要定期清除污染。
标本接收
需要接收大量标本的实验室应当安排专门的房间或空间。
打开包装
接收和打开标本的人员应当了解标本对身体健康的潜在危害􀋸并接受过如何采用标准防护方
法的培训􀋸尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。标本的内层容器要在生物安全柜内打
开􀋸并准备好消毒剂。
血清的分离
1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作.
2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置.
3、规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸
取􀋸而不能倾倒。严禁用口吸液。
4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间􀋸然后
再丢弃或灭菌清洗后重复使用。
5、带有血凝块等的废弃标本管􀋸在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和􀋺或焚烧.
6、应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本
离心机的使用
1、离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部􀋸以正确放置十字轴和
离心桶。
2、离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成􀋸或最好为塑料制品􀋸并且在使用前
应检查是否破损。
3、用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧􀋶最好使用螺旋盖􀋷。
4、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。
5、离心桶和十字轴应按重量配对􀋸并在装载离心管后正确平衡。
6、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。
7、空离心桶应当用蒸馏水或乙醇􀋶异丙醇􀋸70􀋵􀋷来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属
具有腐蚀作用􀋸因此不能使用。
冰箱与冰柜的维护和使用
1、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁􀋸应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿
和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护􀋸清理后要对内表面进行消毒。
2、储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓
名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。
3、应当保存一份冻存物品的清单.
4、除非有防爆措施􀋸否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应注明这一点。
对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法
标本的收集、标记和运输
1、所有操作均要戴手套。
2、在静脉抽血时􀋸应当使用一次性的安全真空采血管取代传统的针头和注射器􀋸因为这样
可以使血液直接采集到带塞的运输管和􀋺或培养管中。用完后自动废弃针头.
3、装有标本的试管应置于适当容器中运至实验室。检验申请单应当分开放置在防水袋或信
封内。
4、接收人员不应打开这些袋子.
打开标本管和取样
1、应当在生物安全柜内打开标本管。
2、必须戴手套􀋸并建议对眼睛和黏膜进行保护􀋶护目镜或面罩􀋷。
3、在防护衣外面要再穿上塑料围裙。
4、打开标本管时􀋸应用纸或纱布抓住塞子以防止喷溅.
玻璃器皿和“锐器”
1、尽可能用塑料制品代替玻璃制品。只能用实验室级别􀋶硼硅酸盐􀋷的玻璃􀋸任何破碎或
有裂痕的玻璃制品均应丢弃。
2、不能将皮下注射针作为移液管使用。
用于显微镜观察的盖玻片和涂片
用于显微镜观察的血液、唾液和粪便标本在固定和染色时􀋸不必杀死涂片上的所有微生物和
病毒。应当用镊子拿取这些东西􀋸妥善储存􀋸并经清除污染和􀋺或高压灭菌后再丢弃.
清除污染
建议使用次氯酸盐和高级别的消毒剂来清除污染.一般情况可使用新鲜配制的含有效氯1g/L
的次氯酸盐溶液􀋸处理溢出的血液时􀋸有效氯浓度应达到5g/L。戊二醛可以用于清除表面污
染
实验室应急程序
刺伤、切割伤或擦伤
受伤人员应当脱下防护服􀋸清洗双手和受伤部位􀋸使用适当的皮肤消毒剂􀋸必要时进行医学
处理。要记录受伤原因和相关的微生物􀋸并应保留完整适当的医疗记录。
潜在感染性物质的食入
应脱下受害人的防护服并进行医学处理.要报告食入材料的鉴定和事故发生的细节􀋸并保留
应完整适当的医疗记录.
潜在危害性气溶胶的释放􀋶在生物安全柜以外􀋷
所有人员必须立即撤离相关区域􀋸任何暴露人员都应接受医学咨询.应当立即通知实验室负
责人和生物安全官员.为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降􀋸在一定时间内􀋶例如1 h 内􀋷
严禁人员入内.如果实验室没有中央通风系统􀋸则应推迟进入实验室􀋶例如24 h􀋷。
应张贴“禁止进入"的标志。过了相应时间后􀋸在生物安全官员的指导下来清除污染。应
穿戴适当的防护服和呼吸保护装备.
容器破碎及感染性物质的溢出
应当立即用布或纸巾覆盖受感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品。然后在上
面倒上消毒剂􀋸并使其作用适当时间。然后将布、纸巾以及破碎物品清理掉􀋼玻璃碎片应用
镊子清理.然后再用消毒剂擦拭污染区域。如果用簸箕清理破碎物。 。应当对他们进行高压灭
菌或放在有效的消毒液内浸泡。用于清理的布、纸巾和抹布等应当放在盛放污染性废弃物的
容器内。在所有这些操作过程中都应戴手套。如果实验表格或其他打印或手写材料被污染. 。
应将这些信息复制。 。并将原件置于盛放污染性废弃物的容器内.脱下受害人的防护服并进行
医学处理。
未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂
如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂􀋸应关闭机器电源􀋸让机器密闭􀋶例如30min􀋷
使气溶胶沉积.如果机器停止后发现破裂􀋸应立即将盖子盖上􀋸并密闭􀋶例如30min􀋷。发
生这两种情况时都应通知生物安全官员.随后的所有操作都应戴结实的手套􀋶如厚橡胶手
套􀋷􀋸必要时可在外面戴适当的一次性手套.当清理玻璃碎片时应当使用镊子􀋸或用镊子夹
着的棉花来进行。所有破碎的离心管、玻璃碎片、离心桶、十字轴和转子都应放在无腐蚀性
的、已知对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内.未破损的带盖离心管应放在另一个有消毒
剂的容器中􀋸然后回收。离心机内腔应用适当浓度的同种消毒剂擦拭􀋸并再次擦拭􀋸然后用
水冲洗并干燥。清理时所使用的全部材料都应按感染性废弃物处理。
在可封闭的离心桶􀋶安全杯􀋷内离心管发生破裂
所有密封离心桶都应在生物安全柜内装卸。如果怀疑在安全杯内发生破损􀋸应该松开安全杯
盖子并将离心桶高压灭菌。另一种方法是􀋸安全杯可以采用化学消毒.
实验室材料的清洁
氯􀋶次氯酸钠􀋷
氯属于快速作用的氧化剂􀋸是一种可广泛应用的广谱化学杀菌剂.它一般以次氯酸钠NaOCl􀋷
溶液来作为漂白剂销售􀋸使用时可以用水稀释成各种不同的有效氯浓度。氯􀋶尤其用作漂白
剂时􀋷是强碱性的􀋸能够腐蚀金属。有机物􀋶蛋白质􀋷会显著减弱其活性。如果在开口容器
中储藏高浓度的或使用浓度的漂白剂􀋸尤其在高温条件下􀋸会释放氯气而减弱其杀菌能力。
要根据漂白剂工作液的初始浓度、容器的类型􀋶如有无盖子􀋷和大小、使用的频率和特性以
及室内条件􀋸来确定它们的更换频率。一般而言􀋸对于那些需要一天多次浸泡处理含有高浓
度有机物的材料的漂白剂溶液􀋸应当至少每天更换一次􀋸而那些使用频率较低的漂白剂溶液􀋸
则可以维持一周时间。常规实验室消毒剂的有效氯浓度应为1 g/L.推荐使用含有5 g/L 有效
氯的更强作用的溶液来处理生物危害性物质的溢出以及含有大量有机物的情况。作为家用漂
白剂的次氯酸钠溶液含有50 g/L 的有效氯􀋸因此分别需要进行1􀋾50 或1􀋾10 的稀释来达
到终浓度1 g/L 和5 g/L。工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近120 g/L 的有效氯􀋸必须进行
相应的稀释来达到上述浓度.
清除局部环境的污染
需要联合应用液体和气体消毒剂来清除实验室空间、用具和设备的污染.清除表面污染时可
以使用次氯酸钠􀋶NaOCl􀋷溶液􀋼含有1􀋵有效氯的溶液适于普通的环境卫生设备􀋸但是当
处理高危环境时􀋸建议使用高浓度􀋶5 g/L􀋷溶液。用于清除环境污染时􀋸含有3􀋵过氧化氢
的溶液也可以作为漂白剂的代用品.
可以通过加热多聚甲醛或煮沸福尔马林所产生的甲醛蒸气熏蒸来清除房间和仪器的污染.这
是一项需要由专门培训的专业人员来进行的、非常危险的操作。
洗手􀋺清除手部污染
处理生物危害性材料时􀋸只要可能均必须戴合适的手套。但是这并不能代替实验室人员需要
经常地、彻底地洗手.处理完生物危害性材料和动物后以及离开实验室前均必须洗手。
大多数情况下􀋸用普通的肥皂和水彻底冲洗对于清除手部污染就足够了.但在高度危险的情
况下􀋸建议使用杀菌肥皂.手要完全抹上肥皂􀋸搓洗至少10 秒钟􀋸用干净水冲洗后再用干
净的纸巾或毛巾擦干􀋶如果有条件􀋸可以使用暖风干手器􀋷。推荐使用脚控或肘控的水龙头。
如果没有安装􀋸应使用纸巾或毛巾来关上水龙头􀋸以防止再度污染洗净的手.如上所述􀋸如
果没有条件彻底洗手或洗手不方便􀋸应该用酒精擦手来清除双手的轻度污染。
溢出清除程序
当发生感染性或潜在感染性物质溢出时􀋸应采用下列溢出清除规程􀋻
1、戴手套􀋸穿防护服􀋸必要时需进行脸和眼睛防护。
2、用布或纸巾覆盖并吸收溢出物。
3、向纸巾上倾倒适当的消毒剂􀋸并立即覆盖周围区域􀋶通常可以使用5％漂白剂溶液􀋼但在
飞机上发生溢出时􀋸则应该使用季铵类消毒剂􀋷。
4、使用消毒剂时􀋸从溢出区域的外围开始􀋸朝向中心进行处理。
5、作用适当时间后􀋶例如30 min􀋷􀋸将所处理物质清理掉。如果含有碎玻璃或其他锐器􀋸
则
要使用簸箕或硬的厚纸板来收集处理过的物品􀋸并将它们置于可防刺透的容器中以待处理。
6、对溢出区域再次清洁并消毒􀋶如有必要􀋸重复第2􀋽5步􀋷.
7、将污染材料置于防漏、防穿透的废弃物处理容器中。
8、在成功消毒后􀋸通知主管部门目前溢出区域的清除污染工作已经完成。
穿戴个人防护装备的顺序
戴口罩→戴帽子→穿防护服→戴防护眼镜→穿鞋套→戴手套
脱卸个人防护装备的顺序
外层手套→防护眼镜→隔离衣→口罩和防护帽→鞋套→内层手套__