生物多肽工艺流程.doc
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1、生物多肽工艺流程一、固相肽合成 (1)投料:树脂加入固相合成仪,加入DCM溶胀,抽干后加入DMF洗涤,洗涤结束抽干备用。 (2)缩合:将氨基酸用一定体积的DMF溶解,加入缩合剂活化后投入固相合成仪,补充DMF至反应浓度,搅拌反应。 (3)脱除保护基:以Kaiser试剂检测反应程度,反应结束后抽干溶剂,DMF洗涤,加入PIP/DMF溶液脱除保护基,以Kaiser试剂检测反应程度,反应完毕抽干溶剂,DMF洗涤,准备加入下一个氨基酸。 (4)缩合循环:按照树脂序列依次连接氨基酸,按照“脱保护洗涤-活化氨基酸投料缩合洗涤”步骤进行缩合循环操作,按照氨基酸序列完成剩余n个氨基酸的缩合。 (5)出料:合成
2、结束之后用IPA和DCM交叉洗涤树脂,完成树脂收缩收缩,出料至不锈钢托盘. (6)树脂干燥:树脂在真空干燥箱中室温干燥,干燥完毕称重,计算收率。 (7)有机废液回收,集中处理. (8)清场:操作结束后操作人员及时清场。 二、树脂裂解 (1)配液:按照裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存。 (2)投料:肽树脂加入反应釜中,加入预冷的裂解液,搅拌反应。 (3)出料:裂解结束后放出反应液,抽滤除去树脂并以TFA洗涤。 (4)浓缩:裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积。 (5)析出:浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚)中,搅拌使析出大量固体. (6)离心:浊液离心,并用预冷的醚洗
3、涤。 (7)粗肽干燥:涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥。 (8)有机废液回收,集中处理. (9)清场:操作结束后操作人员及时清场. 三、多肽HPLC纯化 (1)溶解:操作人员将粗肽溶解,调节PH至工艺规定范围。 (2)过滤:滤去粗肽溶液中不溶物,过滤ACN和纯化水。 (3)配制纯化液:根据工艺内容配制A相(乙腈)和B相(水). (4)纯化:在制备型液相上进行纯化,分别接收流份。 (5)检验及返工:对制备流份进行检查,合并合格流份,其他部分根据需要再次纯化。 (6)废弃流动相按有机废液回收,集中处理. 四、浓缩过滤冻干 (1)浓缩:合并滤液旋蒸除去有机溶剂,有机废液回收, 集中处理。 (2)过滤:浓缩后水相无菌过滤。 (3)冻干:滤液置冻干机中,设定升温程序冻干。 (4)出箱:出料、加内包.五、质量检查、入库工艺流程图如下所示.
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