枯草芽孢杆菌常用培养基配方说课材料.doc
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1、枯草芽孢杆菌常用培养基配方精品资料枯草芽孢杆菌常用培养基配方枯草芽孢杆菌常用培养基配方: 1l蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株t4412、tt2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(cm)的试管中,36振荡培养14h,各取1ml菌液转接入装有20ml液体完全培养基的250ml锥形瓶中,36振荡培养3h,使细胞生长进入对数前期,各加入25u/ml青霉素,使其终浓度为0.3u/ml,继续振荡培养2h。 2.收集细胞 各取菌液10ml,4000r/min离心10min,弃上清液,将菌体悬浮于磷酸缓
2、冲液中,离心。如此洗涤两次,将菌体悬浮10mlsmm中,每ml约含108109活菌为宜。 3.总菌数测定 各取菌液0.5ml,用生理盐水稀释,取10-5、10-6、10-7各1ml(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基,36培养24h后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4.脱壁 二株亲本菌株各取5ml菌悬液,加入5ml溶菌酶溶液,溶菌酶浓度为100ug/ml,混匀后于36水浴保温处理30min,定时取样,镜检观察原生质体形成情况,当95%以上细胞变成球状原生质体时,用4000r/min离心10min,弃上清液,用高渗缓冲液洗涤除酶,然后将原生质体悬浮于5ml高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5.剩余菌数测定 取0.5ml上述原生质体悬液,用无菌水稀释,使原生质体裂解死亡,取10-2、10-3、10-4稀释液各0.1ml,涂布于完全培养基平板上,36培养2448h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数,并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除 谢谢3
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