机能实验-肾缺血再灌注培训讲学.doc
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1、机能实验 肾缺血再灌注精品文档影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤(南方医科大学 广州 510515)【摘要】 目的 探究影响肾泌尿功能的因素,探究肾缺血后再灌注对肾的损伤现象。 方法 静脉分别补充37的生理盐水和20%的高渗葡萄糖,观测平均动脉压,尿量;结扎左肾动脉,一段时间后松开动脉夹再灌注,观测平均动脉压,尿量,血肌酐和尿肌酐含量,计算内生肌酐清除率(Ccr)。 结果 补充37的生理盐水和20%的高渗葡萄糖尿生成量增加,缺血再灌注后血肌酐浓度增高,尿肌酐浓度降低,内生肌酐清除率(Ccr)明显降低。 结论 增加血容量,肾滤过血液增多,尿生成增加;注射高渗溶液增加肾小管内原尿浓度,尿生成量增加
2、;缺血再灌注后肾排泄能力降低,肾的功能受损。【关键词】尿生成;肾缺血再灌注损伤;尿肌酐;内生肌酐清除率肾是机体主要的排泄器官之一,探究影响肾泌尿功能的因素有助于利尿药等干预肾脏功能药物的研发;肾缺血再灌注(Ischemic reperfusion,IR)损伤是临床上常见的病理过程,在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中,均可发生不同程度的再灌注损伤,它是急性肾衰最常见的原因,因此探究肾的缺血再灌注这一病理现象具有重要意义。肾缺血再灌注时,内生肌酐清除率(Ccr)明显降低,肾功能受损.本实验通过复制肾脏缺血再灌注损伤的模型,对肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐和尿肌酐的含量,以及内生肌酐清除率(Ccr
3、)进行测定,来探究肾脏的缺血再灌注损伤。1 材料与方法 1.1 实验材料动物 :家兔 器材 :医用计算机记录系统,家兔手术台,哺乳动物手术器械,压力换能器,动脉静脉插管,三通管,注射器,兔绳,分光光度计,恒温水浴箱。 药品与试剂 :20%乌拉坦,0.2%肝素,生理盐水,20%葡萄糖溶液,速尿,肌酐测定试剂。1.2 探究影响尿生成的因素的方法1家兔称重后用20%乌拉坦耳缘静脉麻醉,麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。家兔颈部剪毛,沿甲状软骨下正中剪开皮肤5cm,分离右侧颈总静脉和左侧颈总动脉。从右侧颈总静脉插入静脉导管,左侧颈总动脉插管,连接压力换能器用于记录血压。将家兔换成右侧卧位,在左肋弓下缘两
4、指处做一斜形切口,辨认输尿管并进行输尿管插管,用有刻度的试管收集尿液并计算每分钟尿量,取此时的尿液测量尿肌酐。静脉输入30ml生理盐水,用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量。一段时间后静脉输入10ml 20%葡萄糖溶液,用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量。1.3 肾缺血再灌注损伤模型复制的方法游离左肾动脉,用动脉夹夹闭,夹闭即刻观测动脉血压和尿量变化,夹闭30min后观测动脉血压和尿量变化。松开动脉夹,再灌注,同时静脉输入19ml 生理盐水加1ml速尿,再灌注30min后取尿测定尿肌酐浓度。1.4 尿肌酐测定方法取样 取尿液10l与2ml蒸馏水按1:200比例稀释。加样加样(
5、ml)标准管测定管空白管测试样品上清1.6试剂一(Cr标准品)1.6蒸馏水1.6试剂三0.5 0.5 0.5 试剂四0.5 0.5 0.5 测定 37 10min水浴,以蒸馏水调零, 测510 nm处光密度。计算 肌酐(mol/L) =(测定管OD -空白管OD)/(标准管OD 空白管OD)x 标准品浓度 x 201倍 内生肌酐清除率Ccr (ml/min) = 尿肌酐浓度 / 血肌酐浓度 x 尿量2 结果 2.1 血压记录输入生理盐水后,血压上升,输入20%葡萄糖后,血压上升不明显,缺血再灌注后血压下降。输尿管插管后输入生理30ml盐水后输入20%葡萄糖后再灌注30min后平均动脉压83.2
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