-2022届高三生物一轮复习教师用书-选修3-专题1-1.2-基因工程的基本操作程序.docx

　　一、基因工程的基本操作程序

基因表达载体的构建

将目的基因导入受体细胞

目的基因的检测与鉴定

二、目的基因的猎取
1．目的基因
主要是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。
2．目的基因的猎取方法
(1)从基因文库中猎取目的基因。
①基因文库
a．含义：将含有某种生物不同基因的很多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
b．种类
②
(2)利用PCR技术扩增目的基因。
①PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，全称是多聚酶链式反应。
②PCR原理：DNA双链复制。
③扩增过程
变性：目的基因DNA受热变性后解为单链
　↓
复性：引物与单链相应互补序列结合
　↓
延长：在DNA聚合酶作用下延长子链
(3)人工合成法：适于合成基因较小，且核苷酸序列已知的目的基因。
三、基因表达载体的构建——基因工程的核心
1．基因表达载体的功能
(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。
(2)使目的基因能够表达和发挥作用。
2．基因表达载体的组成

四、将目的基因导入受体细胞
1．转化
目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2．导入过程
(1)导入植物细胞
方法
(2)导入动物细胞
(3)导入微生物细胞
①方法：用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸取四周环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。
②受体细胞：原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌细胞)。
③原核生物的特点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少等。
五、目的基因的检测与鉴定
1．分子水平的检测(连线)

2．个体水平的鉴定
(1)抗虫或抗病的接种试验。
(2)对基因工程产品与自然 产品的功能进行活性比较。

一、目的基因的猎取
阅读教材P8～10，观看分析图1－6,1－8，探讨下列问题：
1．猎取目的基因的方法有哪些？
提示：有从基因文库中猎取，PCR技术扩增和人工合成三种方法。
2．联系DNA复制，比较PCR技术与DNA复制的不同点(填写下表)。

DNA复制
PCR技术
解旋方式
________催化
DNA在________作用下变性解旋
场所
________
(主要在________内)
________
(主要在________内)
酶
________、
一般的________等
耐热的________(Taq酶)
温度条件
细胞内________条件
需把握温度，在较高温度下进行
合成的对象
DNA分子
DNA片段或基因
提示：解旋酶　高温　细胞内　细胞核　细胞外　PCR扩增仪　解旋酶　DNA聚合酶　DNA聚合酶　温存
二、基因表达载体的构建
阅读教材P11，观看分析图1－10，探讨下列问题：
1．基因工程的核心是哪一步操作？其目的是什么？
提示：基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
2．如图是基因表达载体模式图，请回答下列问题：

(1)分别写出①②③④⑤各代表什么。
提示：①启动子，②终止子，③标记基因(抗生素抗性基因)，④复制原点，⑤目的基因(插入基因)。
(2)图中①②③各有什么作用？
提示：①启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，负责驱动目的基因转录出mRNA。②终止子：起终止转录的作用。③标记基因(抗生素抗性基因)：作用是检测受体细胞中是否有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来。
(3)启动子和终止子与起始密码子和终止密码子是一回事吗？
提示：不是一回事，启动子和终止子位于DNA上，是基因表达必需的部分。而起始密码子和终止密码子位于mRNA上，打算翻译的开头和结束。
3．尝试利用流程图表示如何构建基因表达载体。
提示：

三、将目的基因导入受体细胞
阅读教材P11～13内容，探究下列问题：
1．将目的基因导入不同种类生物所选用的方法是否相同？常选用的受体细胞是什么？
提示：不相同。常选用的受体细胞及导入方法如下表：
生物种类
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
常用方法
农杆菌转化法、基因枪法、
花粉管通道法
显微注射技术
Ca2＋处理法
受体细胞
体细胞
受精卵
原核细胞
2.依据图示简述目的基因在受体细胞中的位置不同会引起遗传上的差别吗？

提示：图中②会使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，缘由是在进行细胞减数分裂时，细胞核上的DNA经复制后平均安排到两个子细胞中，保证了亲子代遗传性状的稳定性，而①细胞减数分裂时，细胞质是不均分的，子细胞不肯定含有目的基因。
四、目的基因的检测与鉴定
阅读教材P13～15有关内容，认真观看分析图1－14、1－15，自主完成以下问题：
1．如何检测目的基因在真核生物中稳定遗传？
提示：接受DNA分子杂交技术。
2．什么是基因探针？如何检测目的基因是否开头发挥功能？
提示：基因探针是用放射性同位素标记的目的基因的DNA片段。从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作探针，与mRNA杂交，假如显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA，意味着目的基因开头发挥功能。
3．检测目的基因是否翻译出蛋白质的方法是什么？其原理是什么？
提示：抗原—抗体杂交法。原理是抗原能与相应抗体特异性结合。
4．举例说明进行个体生物学水平的鉴定方法有哪些？
提示：如做抗虫或抗病的接种试验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与自然 产品的功能进行活性比较，以确定转基因产品的功能活性是否与自然 产品相同等。

　(浙江高考)自然 的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少把握蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B，现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是(　　)
A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经过逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中猎取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
[研析]　本题通过特定的实例主要考查基因工程的相关概念及操作要领。具体解题过程如下：
[审]——提取信息
　 信息a：由A项“提取矮牵牛蓝色花的mRNA”可知猎取目的基因的方法为逆转录。
　 信息b：由B项的“基因文库”可知目的基因可直接提取，无需再切割猎取。
　 信息c：由C项的“基因B与质粒连接”可知连接工具为DNA连接酶。
　 信息d：由D项的“基因B直接导入”可知这种方法是错误的，因未构建基因表达载体。
[析]——解读信息
解读a：利用逆转录法可猎取目的基因，欲增加其数量可实行PCR扩增技术。
解读c、d：DNA聚合酶的作用是连接单个的脱氧核苷酸，而DNA连接酶的作用是连接相对应的DNA片段；构建基因表达载体是基因工程技术的核心步骤，否则将造成基因工程操作失败。
[答案]　A

解答基因工程基本操作程序题目的一般步骤
　　　 ——三辨、三找、一析、一理
(1)三辨：辨别限制酶的种类及识别序列和切割位点。在切割目的基因和载体时，一般用同一种限制酶切割，也可用不同的限制酶切割，但两种限制酶切割后产生的黏性末端中碱基要互补配对。
(2)三找：找出标记基因、目的基因及其插入位点。一般来说，质粒中至少有一个标记基因，如抗生素抗性基因。明确目的基因的插入位点是在标记基因内部还是在标记基因之外。
(3)一析：分析目的基因插入质粒后是否破坏了标记基因。假如质粒中有一个标记基因，插入后一般不破坏标记基因；假如质粒中有两个标记基因，则需看标记基因中是否有插入位点，假如某一标记基因中有插入位点，则目的基因插入质粒后该标记基因被破坏。
(4)一理：理清推断目的基因是否导入受体细胞的方法。一般用含有某种抗生素的培育基培育受体菌，假如有两种抗生素抗性基因，还需推断用哪一种抗生素来检测。
　农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下面是农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题：

(1)一般状况下农杆菌不能感染的植物是________，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现____________________________________。具体原理是农杆菌的Ti质粒中存在T－DNA片段，它具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的________上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到________(部位)内部即可。
(2)依据T－DNA这一转移特点，猜想该DNA片段上可能含有把握____________________(酶)合成的基因。
(3)图中c过程中，能促进农杆菌移向植物细胞的物质是________类化合物。
(4)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外，还可实行的方法是______________________。(至少写出两种)
[解析]　(1)一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物，利用其感染性，可实现将目的基因导入植物细胞。这里需要特殊明确的是真正可转移到受体细胞并整合到受体细胞的染色体上的是农杆菌质粒上的T－DNA片段，因此目的基因必需插入到该部位才能导入成功。(2)依据T－DNA这一转移特点，可以推想出DNA片段上能把握合成DNA连接酶、限制酶才能实现与双子叶植物细胞染色体DNA的整合。(3)植物细胞受伤后可产生酚类化合物，促进农杆菌向植物细胞转移。(4)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法。
[答案]　(1)单子叶植物　将目的基因导入到植物细胞　染色体DNA　T－DNA片段　(2)DNA连接酶、限制酶　(3)酚　(4)基因枪法、花粉管通道法
——————————————[课堂归纳]——————————————————

[网络构建]

填充：①利用PCR扩增　　　　　 ②从基因文库中猎取
③基因表达载体的构建　 ④农杆菌转化法
⑤目的基因的检测与鉴定　 ⑥DNA分子杂交
⑦抗原—抗体杂交
[关键语句]
1．猎取目的基因的常用方法有：从基因文库中猎取目的基因和利用PCR技术扩增目的基因。
2．基因表达载体的构建是实施基因工程的其次步，也是基因工程的核心。
3．一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必需有启动子、终止子以及标记基因等。
4．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。
5．培育转基因动物时，受体细胞一般是受精卵，目的基因的导入方法常用显微注射技术。
6．检测目的基因是否导入和转录，常用分子杂交技术；检测是否翻译，常用抗原—抗体杂交技术。

1．有关目的基因猎取的理解，不正确的是(　　)
A．目的基因可以从自然界中分别，也可以人工合成
B．目的基因主要指编码蛋白质的结构基因
C．基因文库就是基因组文库
D．cDNA文库只含有某种生物的一部分基因
解析：选C　基因文库又分为基因组文库和部分基因文库。cDNA文库是部分基因文库。
2．哪些是基因表达载体的必需组成部分(　　)
①启动子　　　②终止密码子　　　③标记基因
④目的基因　　⑤终止子
A．①②③④　　　　　　B．①③④⑤
C．①②④⑤ D．①②③⑤
解析：选B　启动子位于基因表达载体的首端，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质；终止子相当于一盏红色信号灯，使转录在所需要的地方停止下来；标记基因是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来；目的基因是基因表达载体上必需具有的结构。
3．(重庆高考)如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是(　　)

A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
解析：选D　构建载体需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，A错误；③侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T－DNA整合到④的染色体上，B错误；染色体上含有目的基因，但目的基因也可能不能转录或者不能翻译，或者表达的蛋白质不具有生物活性，C错误；植株表现出抗虫性状，说明含有目的基因，属于基因重组，为可遗传变异，D正确
4．PCR技术扩增DNA，需要的条件是(　　)
①目的基因　 　　②引物　　③四种脱氧核苷酸
④DNA聚合酶等　⑤mRNA　⑥核糖体
A．①②③④ B．②③④⑤
C．①③④⑤ D．①②③⑥
解析：选A　PCR技术扩增DNA与体内DNA复制一样，需要模板、引物、原料、酶等条件。
5．为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用倍受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

(1)获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制酶作用于图中的__________处，DNA连接酶作用于________处。(选填“a”或“b”)
(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和________法。
(3)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______________作探针进行分子杂交检测，又要用________________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
解析：基因工程的工具酶——限制酶和DNA连接酶的作用是断开或连接两核苷酸之间的磷酸二酯键。将目的基因导入植物受体细胞常用的方法是农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。目的基因的检测与鉴定，常利用DNA分子杂交技术等作分子水平的检测，有时还需进行个体生物学水平的鉴定。
答案：(1)a　a　(2)基因枪(花粉管通道)
(3)目的基因　肯定浓度盐水浇灌(移栽到盐碱地)

(时间：25分钟；满分：50分)
一、选择题(每小题2分，共20分)
1．下列不属于猎取目的基因方法的是(　　)
A．利用DNA连接酶复制目的基因
B．利用DNA聚合酶复制目的基因
C．从基因文库中猎取目的基因
D．利用PCR技术扩增目的基因
解析：选A　对目的基因(DNA片段)进行复制利用的是DNA聚合酶而不是DNA连接酶，DNA连接酶是将DNA片段连接时所使用的酶，DNA聚合酶是将单个脱氧核苷酸连接成一条链所使用的酶。
2．在基因工程的操作过程中，获得重组质粒不需要(　　)
①DNA连接酶　②同一种限制酶　③RNA聚合酶
④具有标记基因的质粒　⑤目的基因　⑥四种脱氧核苷酸
A．③⑥ B．②④
C．①⑤ D．①②④
解析：选A　重组DNA分子包括两部分：载体DNA和目的基因DNA。同一种限制酶切割载体DNA和目的基因DNA，DNA连接酶将两者连接，而载体上往往带有标记基因。RNA聚合酶用于RNA的形成，四种脱氧核苷酸则用于DNA的形成。
3．下列关于目的基因导入受体细胞的描述，不正确的是(　　)
A．基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效
B．显微注射技术是转基因动物中接受最多的方法
C．大肠杆菌最常用的转化方法是：使细胞的生理状态发生转变
D．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法
解析：选A　目的基因导入植物体细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济有效，此外还有基因枪法和花粉管通道法；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用Ca2＋处理细胞，使细胞的生理状态发生转变，完成转化过程。
4．下列技术依据DNA分子杂交原理的是(　　)
①观看DNA在细胞中的分布
②检测目的基因是否导入细胞
③检测目的基因是否完全转录并翻译
④检测目的基因是否进行转录
A．②③ B．①③
C．②④ D．①④
解析：选C　观看DNA在细胞中的分布的基本方法是利用甲基绿对细胞中的DNA分子进行染色，再利用显微镜进行观看。目的基因是否导入以及是否转录出相应的RNA，一般是利用放射性同位素作标记(标记目的基因)，是利用DNA分子杂交原理来实现的。最终检测目的基因是否翻译出蛋白质，其方法很多，一般是利用抗原—抗体杂交的原理来实现。
5．如图为表达载体的模式图，若结构X是表达载体所必需的，则X最可能是(　　)

A．氨苄青霉素抗性基因
B．启动子
C．限制酶
D．DNA连接酶
解析：选B　由X的位置可以推断其为启动子。启动子是表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，但不是必需的标记基因。限制酶和DNA连接酶都不是表达载体所需要的。
6．基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl Ⅱ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析错误的是(　　)

A．构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
B．构建重组DNA时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
C．图乙中的P1噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团
D．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA
解析：选D　从图甲看出，用EcoRⅠ切割目的基因后两端各有一切口，与图乙中EcoRⅠ切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA。
7．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是(　　)
A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因
B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA
C．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列
D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白
解析：选D　目的基因的表达是指在受体细胞中产生了目的基因所把握合成的蛋白质。在受体细胞中检测到目的基因或其转录产物RNA，并不能表明目的基因已经成功表达。
8．(江苏高考)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是(多选)(　　)
A．切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列
B．PCR反应中温度的周期性转变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
C．载体质粒通常接受抗生素合成基因作为筛选标记基因
D．抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
解析：选ABC　限制性核酸内切酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，但也有识别序列由4、5或8个核苷酸组成的，A错误；PCR中耐高温的DNA聚合酶只是在延长阶段发挥催化作用，B项错误；载体质粒上抗生素抗性基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C错误；目的基因导入了受体细胞不肯定就都能正常表达，D正确。
9．用某人的胰岛素基因制成的DNA探针，能与之形成杂交分子的是(　　)
①该人胰岛A细胞中的DNA　②该人胰岛B细胞中的mRNA　③该人胰岛A细胞中的mRNA　④该人肝细胞中的DNA
A．①③④ B．①②③
C．①②④ D．②
解析：选C　人的胰岛素基因存在于人的全部体细胞中，因此该人胰岛A细胞和肝细胞中均含有胰岛素基因，可与用胰岛素基因制成的DNA探针形成杂交分子。该人胰岛B细胞中的mRNA有一部分是由胰岛素基因转录形成的，也能与用胰岛素基因制成的DNA探针形成杂交分子。
10．某争辩所的争辩人员将生长激素基因通过质粒导入大肠杆菌细胞，使其表达，产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因要插入到基因B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。下列叙述正确的是(　　)
A．导入大肠杆菌的质粒肯定为重组质粒
B．RNA聚合酶是构建该重组质粒必需的工具酶
C．可用含氨苄青霉素的培育基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
D．在含氨苄青霉素的培育基中不能生长，但在含链霉素培育基中能生长的可能是符合生产要求的大肠杆菌
解析：选D　基因操作过程中，用同一种限制酶分别切割生长激素基因所在的DNA分子和质粒后，会产生相同的黏性末端，黏性末端连接时，目的基因和目的基因、目的基因和质粒、质粒和质粒都可能连接，因此，导入大肠杆菌的质粒不肯定为重组质粒。构建该重组质粒必需的工具酶是限制酶和DNA连接酶。目的基因插入到基因B中后形成的重组质粒的抗氨苄青霉素基因被破坏，故导入了重组质粒的大肠杆菌对氨苄青霉素不具有抗性，对链霉素仍具有抗性。
二、非选择题(共30分)
11．(10分)农业科技工作者在烟草中找到了一种抗病基因，现拟接受基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题：
(1)为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是________。
(2)要使载体与该抗病基因连接，首先应使用________进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是________(填序号)。
A. B.
C. D.
(3)切割完成后，用________酶将载体与该抗病基因连接起来，连接后得到的DNA分子称为________。
(4)再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去________棉花细胞，利用植物细胞具有的______性进行组织培育，从培育出的植株中________出抗病的棉花。
(5)该抗病基因在棉花细胞中表达的产物是(　　)
A．淀粉　　B．脂类　　C．蛋白质　　D．核酸
(6)转基因棉花获得的________是由该表达产物来体现的。
答案：(1)Ti质粒　(2)限制酶　A　(3)DNA连接　重组DNA　(4)感染　全能　筛选　(5)C　(6)抗病性状
12．(12分)科学家将动物体内能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功。请据图回答问题：

(1)该基因工程操作是实行________的方法猎取目的基因(即________基因)的。
(2)图中①DNA以________________为模板，________形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的目的基因。
(3)②代表________，在它的作用下将质粒(________DNA)切出黏性末端。
(4)图中③代表____________，它往往含有________基因，以便对目的基因进行检测。
(5)图中④表示______________________，为使此过程顺当进行，一般需将大肠杆菌用________处理，以增大其细胞壁的________。
(6)图中⑤表示________随大肠杆菌的繁殖而进行增殖，此基因在大肠杆菌内表达的标志是__________________________________。
答案：(1)人工合成　胰岛素　(2)胰岛素信使 RNA　反转录　(3)限制酶 　环状　(4)重组DNA分子 　标记　(5)将目的基因导入受体细胞 　Ca2＋　通透性
(6)目的基因　大肠杆菌能产生胰岛素
13．(8分)科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入一般棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示。依据题意，回答下列问题：

(1)基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是：______________、______________、________________、______________。
(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T－DNA，把目的基因插入Ti质粒的T－DNA中是利用T－DNA______________________________________________的特点。
(3)Bt毒蛋白基因转入一般棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为________。
(4)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是________________。
(5)目的基因能否在棉株体内稳定存在和表达其遗传特性的关键是_________________，
这需要通过检测才能知道，检测常接受的方法是__________________________________
______________。
解析：农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法，利用它能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，以及其Ti质粒上的T－DNA能转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上的特点，可以把目的基因插入其Ti质粒的T－DNA中，借助其作用使目的基因成功导入受体细胞。
答案：(1)目的基因的猎取　基因表达载体的构建　将目的基因导入受体细胞　目的基因的检测与鉴定
(2)可转移至受体细胞并整合到受体细胞的染色体DNA上　(3)转化　(4)农杆菌转化法　(5)目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上　DNA分子杂交技术