液相色谱仪操作规程教学资料.doc

液相色谱仪操作规程

精品资料
高效液相色谱系统操作规程
1. 目的
规范高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围
本规程适用于高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责
质检室仪器分析员负责高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成
本系统由多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、自动进样器、紫外检测器、荧光检测器、色谱工作站/电脑等组成。
5. 程序
5.1. 准备
5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作
5.2.1. 开机
5.2.1.1. 接通电源，依次液相色谱主机，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2. 打开工作站在线软件，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
5.2.2. 更换溶剂，在工作站上，脱气运行。
5.3. 平衡系统（分两种情况进行）
5.3.1. 等度模式
5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。
5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。
5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5~10%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡。
5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少5~6倍柱体积的流动相通过系统。
5.3.1.5.观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移<10-3Au/min，噪声为10-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
5.3.2. 梯度模式
5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。
5.3.2.2. 在进样前运行1~2次空白梯度。
5.4. 进样，运行自动进样，直至完成。
5.5. 数据处理，运行离线工作站，记录相关数据。
5.6. 清洗系统和关机
5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。
5.6.3.1. C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。
5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到0，再关闭主机，断开电源。
5.6.6. 填写使用记录
6简单维护与故障排除
一、泵的故障及排除方法
1、泵压力变化较大或没有流动相流出，又无压力指示
（1）原因是泵内有大量气体。可打开排放阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽；也可以用一个50ml 针筒在泵出口处帮助抽出气体。
（2）原因是高压密封环变形，产生漏液。必须更换密封环；平时注意不要超出规定的最高压力。
2、泵流量或压力不稳
（1）原因是砂滤棒内有气泡或被盐的微晶粒或溢生的微生物部分堵塞。可卸下砂滤棒浸入10%硝酸内超 声除去微生物或盐溶解，或浸入流动相内超声除气泡。再用蒸馏水立即清洗。
（2）原因是系统内有气泡。可加大流量排出气泡。
（3）原因是单向阀有异物。可卸下单向阀，放入烧杯中，加10%稀硝酸，用超声波清洗20分钟后，再用 干净蒸馏水清洗。
3、泵压力过高
原因是管路被堵塞，需要卸下管道清除和清洗；压力过低的原因是管路滴漏，可扳紧各接口和更换损坏 的管道。
4、键开关按下，泵不运行，只有嗡嗡电流声此故障原因是电机缺相，电机线圈被烧坏一组或活塞被生锈卡住，应视情况给予排除。
二、紫外检测器的故障及排除方法
1、系统内有气泡
（1）如果气泡连续不断地通过流动池，将使噪声增大。必须对流动相进行充分除气。
检查系统各条导管是否漏气。如果导管损坏，必须更换并固紧各接口，加大系统流量驱除气泡。有条件 的药厂可配备一部脱气机。
（2）如果气泡流在检测器的流动池内，也可使噪音增大。
用手指压紧流动池出口，使池内增压，再快速放出流动相。反复操作数次，但注意不要使压力增加太大 ，以免流动池破裂或色谱柱冲坏。
2、流动相被污染
当流动池被污染时，可能产生噪音或基线漂移。可用水或甲醇等溶剂冲洗检测池（要注意溶剂的互溶性 ）。如果污染严重，就需要依次使用1mol/L硝酸、水和新鲜溶剂冲洗，或取出池体清洗，更换窗口。
3、光源灯出现故障
当氘灯使用到极限或者不能正常工作时，可能产生严重噪音，基线漂移，出现平头峰或齿形等异常峰， 甚至基线不能回零。这时必须更换氘灯（一般氘灯寿命1000～2000小时）。
4、倒峰
（1）倒峰的出现，可能是检测器的极性接反。更正后即可将其转复为正峰。
（2）如果流动相中含有紫外吸收的杂质时，无吸收的组分就会产生倒峰。对此，改为高纯度的溶剂为流 动相。
（3）在死时间附近的尖锐峰，往往是由进样时的压力变化或者由于样品溶剂与流动相不同所引起的。
三、本规程自2008年12月15日起发布实施。

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