DNA重组技术的基本工具达标训练2.doc
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4、列。(2)切割特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。4作用结果:产生黏性末端或平末端。三、DNA连接酶“分子缝合针”1作用恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,拼接成新的DNA分子。2种类 种类比较项目Ecoli DNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体特点只能“缝合”具有互补的黏性末端的双链DNA片段既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端四、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”1种类(1)质粒:是一种很小的双链环状DNA分子。(2)其他载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒等。2特点(1)能够进行自我复制。(2)有一个至多个限制酶切割位点
5、,供外源基因插入。(3)具有特殊的标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。(4)对受体细胞无害。3作用结果将外源基因送入受体细胞。五、重组DNA分子的模拟操作1材料用具:剪刀代表EcoR ,透明胶条代表DNA连接酶。2.切割要点(1)先分别从两块硬纸板上的一条DNA链上找出GAATTC序列,并选GA之间作切口进行“切割”。(2)然后再从另一条链上互补的碱基之间寻找EcoR 相应的切口剪开。一、限制性核酸内切酶(限制酶)阅读教材P45,分析图12、13,探究下列问题:1限制酶切割DNA分子时,其切割部位在哪里?具有怎样的作用特点?提示:(1)切割部位是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。(2)作用特点:具有
6、专一性。具体表现在两个方面:识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列;切割特定序列中的特定位点。可用于DNA的切割,获取目的基因和切割载体。2利用限制酶切割得到的是黏性末端或平末端,二者有什么区别?提示:(1)黏性末端:是限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成的,如图所示。(2)平末端:是限制酶在识别序列的中心轴线处切开形成的,如图所示。具有黏性末端的DNA片段能够通过互补碱基间的配对重新结合,而具有平末端的DNA片段不容易结合。二、DNA连接酶阅读教材P5并观察分析图14,讨论下列问题:1DNA连接酶的作用目的是什么?作用于哪种化学键?提示:(1)作用目的:将切下的黏性末端或
7、平末端重新拼接、缝合,形成新的DNA分子。(2)作用的化学键:磷酸二酯键。2根据图示分析:(1)图中a酶、b酶分别是哪种酶?提示:a是限制酶(或限制性核酸内切酶);b是DNA连接酶。(2)两种酶在基因工程中有什么作用及应用。提示:作用应用限制性核酸内切酶使特定部位的磷酸二酯键断裂用于提取目的基因和切割载体DNA连接酶在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键用于目的基因和载体的连接三、载体阅读教材P6,观察分析图15,探讨下列问题:1具备什么条件的物质才能充当基因工程的载体?提示:载体必须具备的条件:(1)能在受体细胞内稳定保存并大量复制。(2)有多个限制酶切割位点,以便与外源基因连接。(3)具有某些
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