环境化学物的一般毒及其评价市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx

第四章 环境化学物普通毒性及其评价 第1页一、试验动物选择一、试验动物选择试试验验动动物物是是指指经经人人工工培培育育，对对其其携携带带微微生生物物实实施施控控制制，遗遗传传背背景景明明确确，起起源源清清楚楚，可可用用于于科学研究动物。科学研究动物。第一节第一节化学物毒性评价试验基础化学物毒性评价试验基础第2页 以选择哺乳动物为主。可采取以选择哺乳动物为主。可采取23种，啮齿类种，啮齿类和非啮齿类。惯用大鼠和非啮齿类。惯用大鼠(rat(rat）、小鼠（）、小鼠（mousemouse）、）、豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。Wistar Wistar 大鼠大鼠豚鼠豚鼠第3页对化合物毒性反应及代谢过程与人相同对化合物毒性反应及代谢过程与人相同自然寿命不太长自然寿命不太长易于喂养和试验操作易于喂养和试验操作经济并易于取得经济并易于取得（一）物种选择（一）物种选择 种类选择依据：种类选择依据：第4页（二）品系选择（二）品系选择 品品系系指指计计划划交交配配方方法法取取得得起起源源于于共共同同祖祖先先一一群群动动物物。同同一一品品系系动动物物含含有有共共同同遗遗传传起起源源、相相同同外外貌特征、独特生物学特征及稳定遗传性能。貌特征、独特生物学特征及稳定遗传性能。1 1、近交系动物、近交系动物指采取连续指采取连续20代以上兄妹交配或亲子交配而培育代以上兄妹交配或亲子交配而培育纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达98.6-99.8%。第5页 对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发病率病率6，化学致癌物质不能诱发乳腺癌，化学致癌物质不能诱发乳腺癌和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。可用于营养与肝癌发生率关系研究，对可用于营养与肝癌发生率关系研究，对鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌C5C5有抵抗力，对酒精过敏。有抵抗力，对酒精过敏。也可作为许多瘤株宿主。也可作为许多瘤株宿主。乳腺癌自发率低，肺癌发病率为乳腺癌自发率低，肺癌发病率为2626，网状细胞瘤网状细胞瘤8 8，血管瘤，血管瘤6 6，淋巴肉瘤，淋巴肉瘤4545，乳腺癌，乳腺癌3 3，对放射线极为敏感。，对放射线极为敏感。第6页特点：特点：a.试验结果比较准确，能够防止遗传组成不一样试验结果比较准确，能够防止遗传组成不一样或个体差异太大等所引发误差。或个体差异太大等所引发误差。b.试验结果平均性较一致。每组仅用较少数动物，试验结果平均性较一致。每组仅用较少数动物，即能看出显著性来。即能看出显著性来。c.试验结果重复性较大。试验结果重复性较大。e.易于取得预期结果。易于取得预期结果。f.近交衰退。近交衰退。第7页2 2、突变系动物、突变系动物 在在生生长长繁繁殖殖过过程程中中，经经过过自自然然突突变变或或人人工工定定向向突突变变方方法法，使使其其某某基基因因发发生生突突变变并并丧丧失失原原有有正正常常功功效效。这这种种突突变变基基因因能能够够世世代代相相传传并并保保持持遗遗传传基基因因特特征品系动物，称为突变系动物。征品系动物，称为突变系动物。无胸腺裸鼠无胸腺裸鼠第8页3 3、杂交群动物、杂交群动物指两个不一样近交系之间有目标地进行交配所产指两个不一样近交系之间有目标地进行交配所产生第一代动物。生第一代动物。特点：特点：a.a.含有含有纯纯系系动动物基本相同物基本相同遗传遗传均均质质性性。个体间遗传。个体间遗传变异很小。变异很小。b.b.表现双亲显性性状表现双亲显性性状 c.c.对对各种各种试验结试验结果重复性好果重复性好d.d.含有杂种优势含有杂种优势 e e.国国际际上分布广上分布广第9页4 4、封闭群动物、封闭群动物指在指在5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系动物在固定场所保留繁殖动物群。个体间品系动物在固定场所保留繁殖动物群。个体间含有一定程度遗传学差异。封闭群动物个体间含有一定程度遗传学差异。封闭群动物个体间差异大小，取决于祖代起源差异大小，取决于祖代起源。第10页（三）微生物控制选择（三）微生物控制选择1 1、无菌动物无菌动物germfreeanimal,GF 指指体体内内外外均均无无任任何何微微生生物物和和寄寄生生虫虫动动物物。经经人人工剖腹产净化培育而来。工剖腹产净化培育而来。2 2、悉生动物、悉生动物 gnotobioticanimal,GN 指指体体内内带带有有已已知知微微生生物物动动物物。是是经经人人工工有有计计划划地将已知菌投入动物体内。地将已知菌投入动物体内。第11页第12页3、无无特特定定病病原原体体动动物物specificpathogenanimal,SPF指指体体内内无无特特定定微微生生物物和和寄寄生生虫虫动动物物。即即无无传传染染病动物，允许携带非特定微生物。病动物，允许携带非特定微生物。SPF动物群建立，其原种必须起源于无菌动物或动物群建立，其原种必须起源于无菌动物或悉生动物才能确保。悉生动物才能确保。4 4、清洁动物、清洁动物 Cleananimal,CL 也也称称最最低低程程度度疾疾病病动动物物，动动物物体体内内外外不不携携带带人人畜共患疾病病原体或动物传染病病原体。畜共患疾病病原体或动物传染病病原体。第13页（四）个体选择（四）个体选择1、年纪、年纪取决于试验类型。取决于试验类型。急性试验急性试验成年动物成年动物亚慢性、慢性试验亚慢性、慢性试验较年幼或初断乳动物。较年幼或初断乳动物。在在实实际际工工作作中中常常以以动动物物体体重重粗粗略略判判断断动动物物年纪。各组动物年纪应尽可能保持一致。年纪。各组动物年纪应尽可能保持一致。第14页2、性别、性别不一样性别试验动物对化学物毒性敏感程度有不一样性别试验动物对化学物毒性敏感程度有时会不一样。时会不一样。普通选取雌雄两性普通选取雌雄两性。3、生理状态、生理状态普通选取普通选取未产未孕未产未孕雌性动物。雌雄分养。雌性动物。雌雄分养。4、健康情况、健康情况应选取健康动物。普通试验前检疫观察应选取健康动物。普通试验前检疫观察57天天第15页二、惯用染毒方法二、惯用染毒方法（一）经口染毒（一）经口染毒1 1、灌胃、灌胃 是是将将液液态态受受试试化化合合物物或或固固态态、气气态态化化合合物物溶溶于于某某种种溶溶剂剂中中，配配制制成成一一定定浓浓度度，装装入入注注射射器器等等定定量容器，经过导管注入胃内。量容器，经过导管注入胃内。优点优点：剂量准确：剂量准确缺点缺点：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人接触方式差异很大。接触方式差异很大。第16页2 2、吞咽胶囊、吞咽胶囊 将将一一定定剂剂量量受受试试化化合合物物装装入入药药用用胶胶囊囊内内，强强制制放放到到动动物物后后咽咽部部迫迫使使动动物物咽咽下下。家家兔兔及及猫、狗等大动物可用此法。猫、狗等大动物可用此法。优优点点：剂剂量量准准确确，尤尤其其适适合合用用于于易易挥挥发发、易水解和有异味化合物。易水解和有异味化合物。第17页3 3、喂饲、喂饲 将将化化合合物物拌拌入入饲饲料料和和水水中中，需需计计算算每每日日进进食食量量和饮水量，折算摄入剂量。和饮水量，折算摄入剂量。优点优点：符合人接触化合物方式：符合人接触化合物方式 缺缺点点：可可能能拒拒食食；挥挥发发性性化化合合物物可可使使摄摄入入量量下下降降，且且有有经经过过呼呼吸吸道道吸吸入入可可能能；化化合合物物易易水水解解或或与食物中化学成份起反应。与食物中化学成份起反应。第18页（二）经呼吸道染毒（二）经呼吸道染毒1 1、静式吸入、静式吸入 在在固固定定体体积积密密闭闭容容器器中中，加加入入定定量量易易挥挥发发液液态态化化合合物物或或气气态态化化合合物物。将将动动物物置置于于其其中中，普普通通2h2h。尤尤其其是是适适合合用用于于小小动动物物接接触触易易挥挥发发液液态态化化合合物物急急性性毒毒性研究。性研究。优点优点：设备简单；操作方便；消耗化合物少：设备简单；操作方便；消耗化合物少缺点缺点：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以恒定。度难以恒定。第19页表表5-1试验动物最低需气量及不一样体积染毒柜应放置试验动物最低需气量及不一样体积染毒柜应放置动物数关系动物数关系动物种动物种属属呼吸通气呼吸通气量量(L/小时小时)最低需气最低需气量量(L/小时小时)不一样容积染毒柜放置动物数不一样容积染毒柜放置动物数(只只)25L50L100L300L小小鼠鼠大大鼠鼠1.4510.182.4530.535610121512364056浓度计算：浓度计算：C=a.d/L10001000（mg/m3）a加入化合物量（加入化合物量（ml），），d比重，比重，L容积（容积（L）第20页2 2、动式吸入、动式吸入 染毒柜染毒柜空气流动空气流动 面面罩罩吸吸入入防防止止化化合合物物经皮吸入经皮吸入 优点：剂量准确优点：剂量准确 缺缺点点：装装置置复复杂杂；消消耗耗大大；可能造成污染可能造成污染（三）经皮肤染毒（三）经皮肤染毒 用用于于研研究究化化合合物物经经皮皮肤肤吸吸收收毒毒性性作作用用及及化化合合物物对接触皮肤局部作用（皮肤刺激和致敏）对接触皮肤局部作用（皮肤刺激和致敏）第21页第二节第二节急性毒性及其评价方法急性毒性及其评价方法第22页oo一、急性毒性概念oo 急性毒性（acute toxicity）是指机体(人或试验动物)一次(或二十四小时内屡次)接触外来化合物之后所引发中毒效应。观察期可在17天。oo 试验动物接触化合物方式或路径不一样，“一次”含义也有所不一样。凡经口接触和各种方式注射接触，“一次”是指在瞬间将受试化合物输入试验动物体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次”是指在一个特定期间内试验动物连续地接触受试化合物过程 第23页试验目标试验目标1.求求出出受受试试化化合合物物对对一一个个或或几几个个试试验验动动物物致致死死剂剂量量(通通常常以以LD50为为主主要要参参数数)，以以初初步步预预计计该该化化合合物物对对人类毒害危险性。人类毒害危险性。2.说说明明受受试试化化合合物物急急性性毒毒性性剂剂量量反反应应关关系系与与中中毒毒特征。特征。3.研研究究化化合合物物在在机机体体内内生生物物转转运运和和生生物物转转化化过过程程及及其动力学改变。也可用于研究抢救治疗办法其动力学改变。也可用于研究抢救治疗办法4.为亚急性、慢性试验设计提供依据为亚急性、慢性试验设计提供依据第24页二、急性毒性评价方法二、急性毒性评价方法（一）经典急性致死性毒性试验（一）经典急性致死性毒性试验1 1、试验动物、试验动物 选选取取成成年年健健康康动动物物，惯惯用用大大鼠鼠和和小小鼠鼠。各各剂剂量量组组雌雌：雄雄1 1：1 1，出出生生2 23 3个个月月。数数量量10102020只只最最正正确确。大大动动物物每每组组6 6只只。试试验验前前最最少少观观察察一周，选取其中健康动物，随机分组。一周，选取其中健康动物，随机分组。第25页2、染毒剂量设计、染毒剂量设计（1）查查阅阅文文件件：分分析析受受试试化化合合物物化化学学结结构构和和其其理理化化性性质质，依依此此查查阅阅文文件件，找找出出与与受受试试化化合合物物化化学学结结构构与与理理化化性性质质近近似似化化合合物物毒毒性性资资料料，并并以以其其LD50(LC50)值作为受试化合物预期毒性中值。值作为受试化合物预期毒性中值。（2）试试验验：以以文文件件LD50为为中中值值，取取倍倍差差，设设34个梯度，找出大致个梯度，找出大致LD10-90范围。范围。第26页（3）正式试验）正式试验：I（logLD90logLD10）/（n-1）组距，即相邻）组距，即相邻两个剂量组对数差或相邻组比值对数值。普通设两个剂量组对数差或相邻组比值对数值。普通设57个剂量组。个剂量组。限量试验：限量试验：毒性较小化学物若无法求得毒性较小化学物若无法求得LD50，则，则进行限量试验，单次染毒剂量进行限量试验，单次染毒剂量5g/kg（体重），食（体重），食品毒理学试验品毒理学试验15g/kg（体重）。（体重）。第27页3、观察 一般要求计算两周内总死亡数。对于一些速死性化合物求其LD50(LC50)也可仅计算二十四小时死亡率。应注明是多少时间LD50值，方便于在进行毒性比较时有共同基础。观察内容：（1）死亡情况（2）动物体重（3）中毒反应症状（4）病理学检验第28页4、LD50计算计算LD50是经统计学计算得到毒性参数，并可汇报是经统计学计算得到毒性参数，并可汇报其其95可信限。可信限。LD50(LC50)值是一个统计量，较少值是一个统计量，较少受试验动物个体易感性差异影响，较为准确，所受试验动物个体易感性差异影响，较为准确，所以是最主要急性毒性参数，也用来进行急性毒性以是最主要急性毒性参数，也用来进行急性毒性分级。分级。第29页直接回归法直接回归法 将剂量对数值与死亡将剂量对数值与死亡率率(概率单位概率单位)关系，进关系，进行直线回归，用最小二行直线回归，用最小二乘法求出乘法求出a、b值。代入值。代入直线方程：直线方程：ya十十bX。式中，式中，X为剂量对数值，为剂量对数值，y为死亡率概率单位。为死亡率概率单位。利用此式即可求得受试利用此式即可求得受试化学物化学物LD50及其及其95可可信区间。信区间。第30页%01234567890.2.672.953.123.253.363.453.523.593.66103.723.773.823.873.923.964.014.054.084.12204.164.194.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.564.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.252.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615.645.675.715.745.775.81805.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416.486.556.646.756.887.057.33百分率百分率-概率单位换算表概率单位换算表第31页（二）急性毒性试验其它方法（二）急性毒性试验其它方法经典急性毒性试验和经典急性毒性试验和LD50缺点：缺点：消耗动物量大消耗动物量大取得信息有限取得信息有限测得测得LD50值实际上仅是近似值值实际上仅是近似值五种化合物五种化合物LDLD5050值试验室间变异值试验室间变异化合物化合物 范围范围(mg/kg)(mg/kg)比值比值(最大值最小值最大值最小值)五氯酚五氯酚 74 74620 8.38 620 8.38 水杨酸钠水杨酸钠 930 9302328 2.502328 2.50苯胺苯胺 479 4791169 2.441169 2.44乙酰苯胺乙酰苯胺 723 7233060 4.233060 4.23氯化镉氯化镉 105 105482 4.59482 4.59第32页单次口服固定次口服固定剂量量试验法法结果果评价价剂量剂量(mg/kg)试试验验结结果果存活数存活数mg/kg用用mg/kg试验试验.0用用500mg/kg试验试验该化合物无严重急性中毒危险性该化合物无严重急性中毒危险性1、固定剂量法、固定剂量法第33页2、急性毒性分级法、急性毒性分级法第34页3.上、下移动法上、下移动法(updownmethod)或阶梯法或阶梯法 第二个动物接收化学物剂量由第一只动物染第二个动物接收化学物剂量由第一只动物染毒后反应决定，假如动物死亡，则下一个剂量降毒后反应决定，假如动物死亡，则下一个剂量降低；假如动物存活则下一个剂量增高，不过试验低；假如动物存活则下一个剂量增高，不过试验需要选择一个比较适当剂量范围，使得大部分动需要选择一个比较适当剂量范围，使得大部分动物所接收化学物剂量都会在真正平均致死剂量左物所接收化学物剂量都会在真正平均致死剂量左右。右。第35页三、急性毒性分级三、急性毒性分级当前国际上对外源化学物急性毒性分级标准不统一。当前国际上对外源化学物急性毒性分级标准不统一。外源化学物急性毒性分级外源化学物急性毒性分级(WHO)(WHO)毒性分毒性分级级大鼠一次经大鼠一次经口口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)6 6只大鼠吸入只大鼠吸入4 4小时小时死亡死亡2 24 4只只浓度浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)对人可能致死剂量对人可能致死剂量单位体重单位体重（g/kg g/kg）总重总重(g/60k(g/60kg)g)剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微毒微毒1 11 150505005005000050000101010101001001000100010000100005 55 54444350350218021800.050.050.050.050.50.55 515150.10.13 33030252510001000第36页我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法19941994急性毒性分级急性毒性分级 大鼠经口大鼠经口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)大致相当于体重为大致相当于体重为 70kg70kg人致死剂量人致死剂量6 6级级(极毒极毒)1 1 稍尝，稍尝，7 7滴滴5 5级级(剧毒剧毒)1 150 750 7滴滴1 1茶匙茶匙4 4级级(中等毒中等毒)5151500 1500 1茶匙茶匙3535克克3 3级级(低毒低毒)5015015000 355000 35350350克克2 2级级(实际无毒实际无毒)5001500115000 35015000 35010501050克克1 1级级(无毒无毒)15000 15000 10501050克克第37页 课后作业课后作业oo为何用为何用LD50作为比较化合物急性毒性指作为比较化合物急性毒性指标？有何优缺点？怎样克服？标？有何优缺点？怎样克服？第38页第三节第三节亚慢性、慢性毒性及其评亚慢性、慢性毒性及其评价方法价方法第39页一、亚慢性和慢性毒性试验概念一、亚慢性和慢性毒性试验概念亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronictoxicity)是指试验动物是指试验动物连续连续(通常通常13个月个月)重复染毒外源化学物所引发重复染毒外源化学物所引发毒性效应；毒性效应；慢性毒性慢性毒性(chronictoxiciy)是指试验动物长久是指试验动物长久染毒外源化学物所引发毒性效应。普通是连续染染毒外源化学物所引发毒性效应。普通是连续染毒毒6个月至两年，甚至终生染毒。个月至两年，甚至终生染毒。第40页二、亚慢性和慢性毒性试验目标二、亚慢性和慢性毒性试验目标1.确定受试物亚慢性和慢性毒性确定受试物亚慢性和慢性毒性效应谱效应谱,并发觉在急性及并发觉在急性及亚急性毒性试验中未发觉毒作用；亚急性毒性试验中未发觉毒作用；2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用研究受试物亚慢性和慢性毒作用靶器官靶器官；3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量-反应反应(效应效应)关系，关系，确定其观察到确定其观察到有害作用最低剂量有害作用最低剂量(LOAEL)和和未观察到有害作未观察到有害作用剂量用剂量(NOAEL)，提出此受试物安全限量参考值；，提出此受试物安全限量参考值；4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害研究受试物亚慢性和慢性毒性损害可逆性可逆性；5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验剂量设计及观察指标选亚慢性毒性试验为慢性毒性试验剂量设计及观察指标选择提供依据；择提供依据；6.确定不一样动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应差异，确定不一样动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。为将毒性研究结果外推到人提供依据。第41页三、亚慢性毒性和慢性毒性评价方法三、亚慢性毒性和慢性毒性评价方法（一）试验动物（一）试验动物普普通通要要求求两两种种试试验验动动物物，一一个个为为啮啮齿齿类类，另另一一个个为为非非啮啮齿齿类类。试试验验动动物物最最好好为为纯纯系系甚甚至至同同窝窝动动物物均均匀匀分分布布于于各各剂剂量量组组。雌雌雄雄各各半半。亚亚慢慢性性试试验验每每组组20只只以以上大鼠，慢性试验每组上大鼠，慢性试验每组40100只。只。亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验动动物物体体重重(年年纪纪)应应较较小小，如如小小鼠鼠应应为为15g左右，大鼠左右，大鼠100g左右。左右。慢慢性性毒毒性性试试验验动动物物年年纪纪应应更更小小，大大鼠鼠和和小小鼠鼠应应为为初初断奶者断奶者。第42页（二）染毒路径（二）染毒路径尽尽可可能能模模拟拟人人类类接接触触方方式式；应应与与预预期期进进行行慢慢性毒理试验接触路径相一致。性毒理试验接触路径相一致。染染毒毒时时间间每每日日应应定定时时，以以维维持持动动物物血血液液中中浓浓度稳定。度稳定。惯惯用用染染毒毒路路径径是是经经胃胃肠肠道道、经经呼呼吸吸道道和和皮皮肤肤染毒。染毒。第43页（三）染毒期限（三）染毒期限工工业业接接触触毒毒物物：亚亚慢慢性性毒毒性性13个个月月，慢慢性性毒性毒性6个月个月环环境境毒毒物物：亚亚慢慢性性毒毒性性36个个月月，慢慢性性毒毒性性12个月以上个月以上假假如如慢慢性性毒毒性性试试验验与与致致癌癌试试验验结结合合，染染毒毒期期限限最好是靠近或等于终生染毒。最好是靠近或等于终生染毒。第44页动物研究期限相当于寿命期动物研究期限相当于寿命期()和人染毒时间和人染毒时间物物种种研究期限研究期限(月月)相当于寿命期相当于寿命期()研究期限研究期限(月月)相当于人相当于人(月月)13612241361224大大鼠鼠4.112.025.0499934101202404808兔兔1.44.59.018.36123672145289狗狗0.822.54.99.8206.5204081162猪猪0.822.54.99.8206.5204081162猴猴0.551.63.36.6134.5132761107第45页（四）剂量分组（四）剂量分组最少最少3个剂量组和个剂量组和1个对照组。个对照组。高高剂剂量量组组：出出现现较较显显著著毒毒性性效效应应，死死亡亡率率小小于于10或无死亡或无死亡中中剂剂量量组组：轻轻微微毒毒性性，即即观观察察到到最最低低有有害害作作用剂量（用剂量（LOAEL）低低剂剂量量组组：不不出出现现中中毒毒反反应应，即即未未观观察察到到有有害作用剂量（害作用剂量（NOAEL）第46页亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验：可可参参考考两两个个数数值值，一一是是以以急急性性毒毒性性阈阈剂剂量量为为亚亚慢慢性性试试验验最最高高剂剂量量；一一是是以以此此化化合合物物LD501/20 1/5为为最高剂量。最高剂量。慢性毒性试验：慢性毒性试验：剂量选择可参考三组数据。剂量选择可参考三组数据。1、亚亚慢慢性性NOAEL或或其其1/5 1/2剂剂量量为为慢慢性性毒毒性性试试验验最最高高剂剂量量，以以这这一一阈阈剂剂量量1/50 1/10为为慢慢性性毒毒性性试试验验预预计计阈阈剂剂量量组组，并并以其以其1/100为预计慢性无作用剂量组为预计慢性无作用剂量组2、亚慢性试验亚慢性试验LOAEL1/2、1/4、1/8分三组分三组3、急急性性毒毒性性LD50剂剂量量为为出出发发点点，即即以以LD501/10剂剂量量为为慢慢性性试试验验最最高高剂剂量量。以以LD501/100为为预预计计慢慢性性阈阈剂剂量量，以以LD501/1000为预计无作用剂量组。为预计无作用剂量组。第47页（五）观察指标（五）观察指标1、中中毒毒症症状状：每每日日观观察察动动物物有有没没有有中中毒毒症症状状和和程程度，外观和行为有没有异常度，外观和行为有没有异常2、体重、体重：每七天称重一次：每七天称重一次3、食食物物利利用用率率：统统计计每每日日饲饲料料消消耗耗量量，计计算算食食物物利用率（每摄入利用率（每摄入100g饲料所增加体重克数）。饲料所增加体重克数）。4、试验室检验、试验室检验（1）血液学检验）血液学检验（2）尿液检验）尿液检验（3）血液生化检验）血液生化检验第48页5、病理及病理组织学检验、病理及病理组织学检验凡凡是是在在试试验验过过程程中中死死亡亡动动物物均均应应及及时时解解剖剖检检验验，试试验验结结束束后后全全部部动动物物都都要要杀杀死死检检验验。慢慢性性毒毒性性试试验验在在试试验中期进行一次检验。验中期进行一次检验。（1）系统解剖系统解剖：包含肉眼观察：包含肉眼观察动物固定在解剖板上，解剖颈部(颌下腺、腮腺、局部淋巴结等)取一侧乳腺及腹部皮肤；开腹并扩展切口(胰、脾、生殖器官、肾、肾上腺、直肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、肠系膜淋巴结、肝脏等)开胸(舌、喉、气管、甲状腺、甲状旁腺、食管、心、肺、胸腺)剥离左后肢(肌肉、坐骨神经、股骨)；头皮、耳；开颅(颅神经、脑组织、垂体)；暴露脊髓(取出脊髓)第49页（2）脏器系数）脏器系数：也称脏体比值，是指某个脏器湿：也称脏体比值，是指某个脏器湿重与单位体重比值，通常以重与单位体重比值，通常以100g或或1g体重计。体重计。此指此指标意义是试验动物在不一样年纪期，其各脏器与体标意义是试验动物在不一样年纪期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和经济指标。是一个灵敏、有效和经济指标。（3）组织病理学检验）组织病理学检验：系统解剖时发觉异常组织：系统解剖时发觉异常组织要进行详细组织病理学检验，必要时还需进行组织要进行详细组织病理学检验，必要时还需进行组织化学或电镜检验。化学或电镜检验。第50页6、特异性指标、特异性指标（六）结果分析（六）结果分析对对污污染染组组和和对对照照组组数数据据依依据据统统计计学学方方法法处处理理，看看是是否否有有显显著著差差异异、剂剂量量效效应应关关系系和和时时间间效效应关系。以及各项指标之间相关性。应关系。以及各项指标之间相关性。第51页第四节第四节皮肤局部毒作用皮肤局部毒作用及其评价方法及其评价方法第52页一、皮肤局部毒性一、皮肤局部毒性（1）皮皮肤肤原原发发性性刺刺激激：接接触触某某种种化化学学物物后后产产生生局局部可逆性炎症，包含水肿和红斑。部可逆性炎症，包含水肿和红斑。（2）皮皮肤肤变变态态反反应应：皮皮肤肤对对化化学学物物产产生生免免疫疫源源性性反反应应，主主要要表表现现时时红红斑斑和和水水肿肿。可可发发生生于于接接触触部部位以外皮肤。位以外皮肤。（3）光光刺刺激激反反应应和和光光变变态态反反应应：化化学学物物单单独独与与皮皮肤肤接接触触无无作作用用，经经特特定定波波长长光光照照后后引引发发有有害害作作用用（4）皮肤癌）皮肤癌（5）皮肤色素异常）皮肤色素异常（6）对对皮皮肤肤附附件件损损害害：如如毛毛发发脱脱落落、痤痤疮疮、汗汗腺腺损害等。损害等。第53页二、皮肤局部作用评价方法二、皮肤局部作用评价方法（一）皮肤刺激试验（一）皮肤刺激试验Draize试试验验主主要要以以兔兔皮皮肤肤、有有时时也也用用大大白白鼠鼠或或豚豚鼠鼠皮皮肤肤做做试试验验，以以各各种种浓浓度度化化学学物物对对皮皮肤肤涂涂敷后观察红斑和水肿程度综合给分。敷后观察红斑和水肿程度综合给分。第54页（二）皮肤变态反应试验（二）皮肤变态反应试验试试验验动动物物为为白白色色豚豚鼠鼠，体体重重200-300g，雌雌雄雄各各半半。分分试试验验组组、阴阴性性对对照照组组和和阳阳性性对对照照组组，每组每组16只。只。试验组试验组：受试物诱导和激发处理：受试物诱导和激发处理阳性对照组阳性对照组：阳性致敏物诱导和激发处理：阳性致敏物诱导和激发处理阴性对照组阴性对照组：受试物激发处理：受试物激发处理第55页操作：局部封闭涂皮法操作：局部封闭涂皮法1、诱诱导导处处理理：试试验验前前24h背背部部左左侧侧去去毛毛诱诱导导浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布玻玻璃璃纸纸覆覆盖盖，无无刺刺激激胶胶布布固定，连续固定，连续6h第第7、14d一样方法重复一次一样方法重复一次2、激激发发处处理理：最最终终一一次次诱诱导导后后14d，激激发发浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布右右侧侧脱脱毛毛区区，固固定定6h后后洗洗去去，24、48h后观察皮肤反应，评分后观察皮肤反应，评分第56页