生物制品分析概论市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx
《生物制品分析概论市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《生物制品分析概论市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx(64页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、生物制品分析概论生物制品分析概论第二军医大学药学院第二军医大学药学院第1页本章内容本章内容背景概述背景概述判别试验判别试验杂质检验杂质检验含量(效价)测定含量(效价)测定第2页第一节第一节 背景概述背景概述生物药品(生物药品(Biopharmaceutics或或Biopharmaceuticals)是利用生物体、生物组织或组成生物体各种成份,)是利用生物体、生物组织或组成生物体各种成份,综合利用综合利用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学理化学和药学原理与方法制得一大类药品。原理与方法制得一大类药品。广义生物药品应包含从动物、植物和微生物等生
2、物体广义生物药品应包含从动物、植物和微生物等生物体中直接制取各种天然生物活性物质以及人工合成或半中直接制取各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成天然物质类似物。合成天然物质类似物。一、生物药品与生物制品一、生物药品与生物制品第3页生物药品发展生物药品发展第一代生物药品:利用第一代生物药品:利用生物材料加工制成生物材料加工制成含有一些天含有一些天然活性物质与混合成份粗提物制剂然活性物质与混合成份粗提物制剂 甲状腺粉及其片剂、鱼肝油与鱼肝油酸钠注射液、胰酶及甲状腺粉及其片剂、鱼肝油与鱼肝油酸钠注射液、胰酶及其肠溶片、肠溶胶囊等其肠溶片、肠溶胶囊等第二代生物药品:依据生物化学和免疫学原理,第二代生
3、物药品:依据生物化学和免疫学原理,应用应用近代生化分离纯化技术近代生化分离纯化技术从生物体制取含有针对性治疗从生物体制取含有针对性治疗作用特异生化成份作用特异生化成份尿激酶、肝素钠、抑肽酶、胰岛素、人血白蛋白、人免疫尿激酶、肝素钠、抑肽酶、胰岛素、人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子球蛋白、人凝血因子、人纤维蛋白原、人纤维蛋白原第4页生物药品发展生物药品发展第三代生物药品:应用第三代生物药品:应用生物工程技术生产生物工程技术生产天然生理活天然生理活性物质,以及经过性物质,以及经过蛋白质工程原理设计制造蛋白质工程原理设计制造含有比天含有比天然物质更高活性类似物,或与天然物质结构不一样全然物质更高
4、活性类似物,或与天然物质结构不一样全新药理活性成份。新药理活性成份。重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素 1b、重组、重组人白细胞介素人白细胞介素-2、重组人红细胞生成素(、重组人红细胞生成素(EPO)等)等生化药品生化药品生物合成药品生物合成药品生物制品生物制品生物药品分类生物药品分类第5页生物药品分类生物药品分类生化药品生化药品:普通系指从动物、植物及微生物提取,也普通系指从动物、植物及微生物提取,也可用生物可用生物-化学半合成或用当代生物技术制得化学半合成或用当代生物技术制得生命基生命基本物质及其衍生物、降解物以及大分子结构修饰物等本物质及
5、其衍生物、降解物以及大分子结构修饰物等,如如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、辅酶、多糖、脂质、氨基酸、多肽、蛋白质、酶、辅酶、多糖、脂质、核苷酸类核苷酸类等。等。生物合成药品生物合成药品:由由微生物代谢微生物代谢所产生药品和必须利用所产生药品和必须利用微生物及其酶转化反应微生物及其酶转化反应共同完成半合成药品,如山梨共同完成半合成药品,如山梨醇、木糖醇、甘露醇、枸橼酸、醇、木糖醇、甘露醇、枸橼酸、氨基酸、维生素、生氨基酸、维生素、生物碱、甾体激素、抗生素物碱、甾体激素、抗生素和一些核苷酸、酶与辅酶类和一些核苷酸、酶与辅酶类药品等。药品等。第6页生物药品分类生物药品分类生物制品生物制品:以以微生物、细
6、胞、动物或人源组织和体液微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原等为原料,应用传统技术或当代生物技术制成,用于人料,应用传统技术或当代生物技术制成,用于人类疾病预防、治疗和诊疗。类疾病预防、治疗和诊疗。生长激素释放抑制激素生产:生长激素释放抑制激素生产:10万只羊下丘脑万只羊下丘脑1mg10L大肠杆菌工程菌株发酵液大肠杆菌工程菌株发酵液核酸疫苗制备技术路线:核酸疫苗制备技术路线:目标抗原基因选择与分离目标抗原基因选择与分离与载体与载体DNA连接连接转入宿主转入宿主扩增质粒扩增质粒重组质粒提取重组质粒提取、纯化与后处理、纯化与后处理第7页二、生物制品种类与特点二、生物制品种类与特点疫苗类药品疫苗
7、类药品细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗和类细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗和类毒素毒素抗毒素及抗血清类药品抗毒素及抗血清类药品破伤风抗毒素等破伤风抗毒素等血液制品血液制品人血白蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原人血白蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原生物技术制品生物技术制品 重组人表皮生长因子凝胶(酵母)、重重组人表皮生长因子凝胶(酵母)、重组人组人p53腺病毒、基因工程乙肝疫苗、单克隆抗体等腺病毒、基因工程乙肝疫苗、单克隆抗体等微生态活菌制品微生态活菌制品如双歧杆菌活菌胶囊、地衣芽孢杆菌如双歧杆菌活菌胶囊、地衣芽孢杆菌活菌颗粒、酪酸梭菌活菌片等活菌颗粒、酪酸梭菌活菌片等诊疗制品诊疗制品体外诊疗制
8、品(体外诊疗制品(HBsAg酶联免疫诊疗试剂盒)酶联免疫诊疗试剂盒)、体内诊疗试剂、体内诊疗试剂第8页二、生物制品种类与特点二、生物制品种类与特点分子量不定值分子量不定值不一样相对分子质量产生不一样活不一样相对分子质量产生不一样活性性生化法结构确证生化法结构确证定时监测制品肽图定时监测制品肽图需检验生物活性需检验生物活性生物检定法证实活性生物检定法证实活性安全性检验安全性检验宿主蛋白残留量,提取溶剂残留量宿主蛋白残留量,提取溶剂残留量效价测定效价测定酶活力测定酶活力测定第9页三、生物制品全程质量控制三、生物制品全程质量控制注射用重组链激酶产品全程质量控制过程注射用重组链激酶产品全程质量控制过程
9、操作操作过过程程详细项目法定法定标标准准1 1 基本要求基本要求生生产产和和检检定用定用设设施、原料及施、原料及辅辅料、料、水、器具、水、器具、动动物等物等符合“凡例”相关要求2 2 制造制造2.1 2.1 工程菌菌种工程菌菌种名称与起源带有链激酶基因重组质粒转化大肠杆菌菌株种子批建立、菌种检定应符合要求2.2 2.2 原液原液种子液制种子液制备备、发发酵用培养基酵用培养基应符合要求种子液接种及种子液接种及发发酵培养酵培养按工按工艺艺操作操作发发酵液酵液处处理、初步理、初步纯纯化、高度化、高度纯纯化化按工艺操作,纯度符合要求原液原液检检定定按按3.13.1项进项进行行2.3 2.3 半成品半成
10、品配制与除菌、半成品配制与除菌、半成品检检定定工艺按要求操作,检定按3.2项进行2.4 2.4 成品成品分批、分装与分批、分装与冻冻干、干、规规格、包装格、包装应符合要求第10页3 3 检检定定3.1 3.1 原液原液检检定定生物学活性、蛋白生物学活性、蛋白质质含量、比活性含量、比活性依法测定,应符合要求纯纯度度电电泳法、泳法、HPLCHPLC测测定,定,纯纯度不度不低于低于95.095.0分子量分子量还还原型原型SDS-PAGESDS-PAGE法法测测定,定,为为47.047.0 4.70kD4.70kD外源性外源性DNADNA、宿主菌蛋白残留量以及、宿主菌蛋白残留量以及残留抗生素残留抗生素
11、依法测定,应符合要求细细菌内毒素菌内毒素依法测定,应符合要求等等电电点点主区主区带应为带应为4.64.6 5.65.6紫外光紫外光谱扫谱扫描描最大吸收波最大吸收波长应为长应为277277 3nm3nm肽图肽图依法依法测测定,定,应应与与对对照品照品图图形形一致一致N-N-末端氨基酸序列末端氨基酸序列Val-Lys-Pro-Val-Gln-Ala-Val-Lys-Pro-Val-Gln-Ala-Ile-Ala-Gly-Ser-Glu-Trp-Ile-Ala-Gly-Ser-Glu-Trp-Leu-Leu-AspLeu-Leu-Asp3.2 3.2 半成品半成品检检定定细菌内毒素、无菌检验依法测定
12、,应符合要求3.3 3.3 成品成品检检定定判别试验、物理检验、化学检定依法测定,应符合要求生物学活性生物学活性应为标示量80150无菌、细菌内毒素、异常毒性检验依法测定,应符合要求第11页对生物制品质量控制重点对生物制品质量控制重点有效成份同一性、结构确证;有效成份同一性、结构确证;有效成份均一性、纯度检验;有效成份均一性、纯度检验;有害物质及残余杂质(特殊杂质)等控制;有害物质及残余杂质(特殊杂质)等控制;高效、灵敏生物活性及比活性等试验方法。高效、灵敏生物活性及比活性等试验方法。为了正确反应生物制品性质与特征,生物制品质量为了正确反应生物制品性质与特征,生物制品质量控制基本方法普通应包含
13、判别试验、杂质检验、安控制基本方法普通应包含判别试验、杂质检验、安全性检验和含量(生物学活性或效价)测定。全性检验和含量(生物学活性或效价)测定。第12页第二节第二节 判别试验判别试验依据生物制品化学结构、理化性质和生物学特点,利依据生物制品化学结构、理化性质和生物学特点,利用用化学法、物理法及生物学方法化学法、物理法及生物学方法进行一些进行一些特殊反应特殊反应,或测定一些或测定一些专属理化常数专属理化常数如紫外吸收系数、等电点、如紫外吸收系数、等电点、电泳迁移率、色谱保留时间和肽图等,来判断与确证电泳迁移率、色谱保留时间和肽图等,来判断与确证产品真伪。产品真伪。需要标准品或对照品在同一条件下
14、进行对照试验。需要标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。生物制品判别不是由一项试验就能完成,而是依据其生物制品判别不是由一项试验就能完成,而是依据其特异分子结构和特异分子结构和(或或)其它特征其它特征(包含理化性质和生物包含理化性质和生物学活性等学活性等)设计一组试验来全方面评价一个药品设计一组试验来全方面评价一个药品。第13页一、理化判别法一、理化判别法化学法:化学法:通常利用药品与某试剂在一定条件下反应,通常利用药品与某试剂在一定条件下反应,生成有颜色产物或沉淀进行判别。生成有颜色产物或沉淀进行判别。蛋白质类生物制品蛋白质类生物制品蛋白质变性反应蛋白质变性反应胰蛋白酶胰蛋白酶+对甲苯磺酰
15、对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐精氨酸甲酯盐酸盐紫色紫色胃蛋白酶胃蛋白酶+鞣酸、没食子酸或多数重金属盐溶液鞣酸、没食子酸或多数重金属盐溶液沉淀沉淀紫外分光光度法:紫外分光光度法:蛋白质类生物制品紫外吸收光谱是因为芳香族氨基酸侧链,蛋白质类生物制品紫外吸收光谱是因为芳香族氨基酸侧链,主要是酪氨酸、色氨酸,其次是苯丙氨酸光吸收结果。主要是酪氨酸、色氨酸,其次是苯丙氨酸光吸收结果。对于一个蛋白或多肽分子来说,它最大吸收波长是固定,不对于一个蛋白或多肽分子来说,它最大吸收波长是固定,不一样批次产品紫外光谱图也应该是一致。一样批次产品紫外光谱图也应该是一致。第14页一、理化判别法一、理化判别法高效液相色
16、谱法:高效液相色谱法:基于生物制品供试品溶液和对照品溶液色谱图中基于生物制品供试品溶液和对照品溶液色谱图中主峰主峰保留时间和肽图一致性保留时间和肽图一致性,可用于目标产品判别。可用于目标产品判别。重组人粒细胞集落刺激因子重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经胰蛋白酶裂解后经胰蛋白酶裂解后RP-HPLC(左)和(左)和CZE(右)肽图经典谱图(右)肽图经典谱图 第15页一、理化判别法一、理化判别法示例:示例:胰岛素判别胰岛素判别 (1)在含量测定项下统计色谱图中,供试品溶)在含量测定项下统计色谱图中,供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液主峰保留时间一液主峰保留时间应与对照品溶液主峰保留时间
17、一致。致。(2)取本品适量,用)取本品适量,用0.1三氟醋酸溶液制成每三氟醋酸溶液制成每lml中含中含10mg溶液,取溶液,取20l,加,加0.2mol/L三羟甲三羟甲基氨基甲烷基氨基甲烷-盐酸缓冲液盐酸缓冲液(pH7.3)20l、0.1V8酶溶液酶溶液20l与水与水140l,混匀,置,混匀,置37水浴水浴2小时小时后,加磷酸后,加磷酸3l,作为供试品溶液;另取胰岛素对,作为供试品溶液;另取胰岛素对照品适量,同法制备,作为对照品溶液。照品适量,同法制备,作为对照品溶液。第16页一、理化判别法一、理化判别法照含量测定项下色谱条件,照含量测定项下色谱条件,以以0.2mol/L硫酸盐缓冲液硫酸盐缓冲
18、液(pH2.3)-乙腈乙腈(90:10)为为流动相流动相A,乙腈,乙腈-水水(50:50)为流动相为流动相B,按右,按右表进行梯度洗脱。取对照表进行梯度洗脱。取对照品溶液和供试品溶液各品溶液和供试品溶液各25l,分别注入液相色谱,分别注入液相色谱仪,统计色谱图,供试品仪,统计色谱图,供试品溶液肽图谱应与对照品溶溶液肽图谱应与对照品溶液肽图谱一致。液肽图谱一致。时间时间(分钟)(分钟)流动相流动相A(%)流动相流动相B(%)0 90 10 60 55 45 70 55 45第17页二、生化判别法二、生化判别法酶法:酶法:利用酶对底物特异性催化活力,能够作为酶类利用酶对底物特异性催化活力,能够作为
19、酶类生物制品简便、快速、灵敏判别方法。生物制品简便、快速、灵敏判别方法。尿激酶判别尿激酶判别:尿激酶尿激酶 用巴比妥用巴比妥-氯化钠缓冲液氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解溶解 成成1ml(含含20单单位位)+牛纤维蛋白原牛纤维蛋白原溶液溶液0.3ml 再依次加入再依次加入牛纤维蛋白牛纤维蛋白溶酶原溶酶原溶液溶液0.2ml,牛凝血酶牛凝血酶溶液溶液0.2ml,快速摇匀,快速摇匀,马上置马上置37 0.5恒温水浴恒温水浴中保温,记时,反应系中保温,记时,反应系统应在统应在30s 45s内凝结,且凝块在内凝结,且凝块在15min内重新溶解。内重新溶解。以以0.9氯化钠溶液作空白,同法操作,凝块在氯化钠
20、溶液作空白,同法操作,凝块在2h内不溶。内不溶。第18页二、生化判别法二、生化判别法电泳法:应用电泳技术如等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等,取得目标产品一致性、同一性电泳图谱和数据,可用于蛋白质类生物制品判别。等电聚焦电泳用于检测蛋白质类生物制品等电点,比如中国药典三部收载重组人干扰素1b、2a、2b和等电点,依法测定,主区带应分别为4.06.5、5.56.8、4.06.7和8.19.1。第19页二、生化判别法二、生化判别法示例:示例:重组人生长激素判别重组人生长激素判别 取本品,加水溶解制成每取本品,加水溶解制成每1ml中含中含1mg溶液,取溶液,取此溶液此溶液90l,
21、加两性电解质,加两性电解质10l和甲基红试液和甲基红试液2l,混匀,作为供试品溶液;另取重组人生长激,混匀,作为供试品溶液;另取重组人生长激素对照品,同法制备,作为对照品溶液。取对照素对照品,同法制备,作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各品溶液和供试品溶液各10l,加至上样孔,照等,加至上样孔,照等电聚焦电泳法(附录电聚焦电泳法(附录 F第六法)试验,供试品第六法)试验,供试品溶液主带位置应与对照品溶液主带位置一致。溶液主带位置应与对照品溶液主带位置一致。第20页三、生物判别法三、生物判别法血清学法血清学法体外抗原抗体试验。抗原抗体反应含有体外抗原抗体试验。抗原抗体反应含有高度特异性,只
22、要一方已知,即可检测高度特异性,只要一方已知,即可检测出另一方。如出另一方。如凝集反应、沉淀反应、中凝集反应、沉淀反应、中和反应和补给结合反应,和反应和补给结合反应,以上四种类型以上四种类型反应即所谓经典血清学反应。反应即所谓经典血清学反应。第21页三、生物判别法三、生物判别法示例:示例:人血白蛋白判别人血白蛋白判别 采取免疫双扩散技术,依法测定(附录 C),供试品仅与抗人血清产生沉淀线,与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血清不产生沉淀线。选择免疫电泳技术,依法测定(附录 D),供试品与正常人血清比较,主要沉淀线应为白蛋白。第22页三、生物判别法三、生物判别法生物学法生物学法利用生物体对生物制品特定生物
23、活性反利用生物体对生物制品特定生物活性反应为基础进行供试品判别即为生物学法。应为基础进行供试品判别即为生物学法。第23页三、生物判别法三、生物判别法示例:注射用重组人促红素(CHO细胞)人促红素含有刺激网织红细胞生成生物作用。给小鼠皮下注射供试品后,其血液中网织红细胞数量伴随人促红素注射量增加而升高。所以,中国药典三部收载注射用重组人促红素(CHO细胞),其原液检定依据人促红素独特生物学活性,即采取网织红细胞法。第24页第三节第三节 杂质检验杂质检验生物制品杂质检验可用来判定产品优劣。普通地,只生物制品杂质检验可用来判定产品优劣。普通地,只要在不影响临床疗效及人体健康标准下,药品质量标要在不影
24、响临床疗效及人体健康标准下,药品质量标准能够允许生产过程和贮藏过程中引入微量杂质存在。准能够允许生产过程和贮藏过程中引入微量杂质存在。生物制品来自生物体,生物活性特异性强,制造与纯生物制品来自生物体,生物活性特异性强,制造与纯化工艺复杂,分子结构经常不确定,有时产品成份并化工艺复杂,分子结构经常不确定,有时产品成份并非单一,非单一,极微量杂质可能产生显著效应,极微量杂质可能产生显著效应,所以,生物所以,生物制品杂质检验就显得尤为主要,包括项目也各有特点,制品杂质检验就显得尤为主要,包括项目也各有特点,主要包含普通杂质检验、特殊杂质检验和安全性检验。主要包含普通杂质检验、特殊杂质检验和安全性检验
25、。第25页一、特殊杂质检验一、特殊杂质检验特殊杂质是指药品在生产和贮藏过程中可能引入特有特殊杂质是指药品在生产和贮藏过程中可能引入特有杂质。杂质。特殊杂质检验意义是特殊杂质可能存在毒性会引发安特殊杂质检验意义是特殊杂质可能存在毒性会引发安全性问题;可能影响产品生物学活性和药理作用,或全性问题;可能影响产品生物学活性和药理作用,或使产品变质;也反应产品生产工艺稳定性。使产品变质;也反应产品生产工艺稳定性。生物污染物生物污染物微生物、外源性微生物、外源性DNA等等产品相关杂质产品相关杂质二聚体,多聚体,突变物等二聚体,多聚体,突变物等工艺添加剂工艺添加剂残余抗生素,甲醛,吐温残余抗生素,甲醛,吐温
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 生物制品 分析 概论 公开 一等奖 联赛 特等奖 课件
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【w****g】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【w****g】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。