基于SSR分子标记技术的长豇豆种子纯度快速鉴定技术图文百精.doc
《基于SSR分子标记技术的长豇豆种子纯度快速鉴定技术图文百精.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基于SSR分子标记技术的长豇豆种子纯度快速鉴定技术图文百精.doc(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、浙江农业学报 A cta A gricult urae Zhejiangens is 22(6:727730, 2010基于 SSR 分子标记技术的长豇豆种子纯度快速鉴定技术鲁忠富 , 徐 沛 , 汪宝根 , 刘永华 , 吴晓花 , 胡婷婷 , 李国景*(浙江省农业科学院 蔬菜研究所 , 浙江 杭州 310021收稿日期 :2010-06-17基金项目 :浙江省科技厅重大优先主题项目 (2008C120031 作者简介 :鲁忠富 (1963-, 男 , 浙江杭州人 , 农艺师 , 主要从事蔬 菜育种 和栽 培 技术 研究 工作。 E m ai:l l u zf zaas . org ; T e
2、:l 0571 86404223*通 讯 作 者 , 李 国 景 , E m a i :l Guoji ng _liyahoo . co m. cn; T el (摘 要 :当前生产上应用的长豇豆品种众多 , 且商业品种间的遗传相似性愈来愈高 , 种子质 量纠纷时 有发生。 本研究以 44份核 心长豇豆种质为试材 , 利用普通豇豆 DNA 序列 信息 , 通过 生物信息 学方法自主 设计开发适 用于长豇豆研究的 SS R 引物 , 从中筛选出 10对 诊断性引物 , 在此基础上 建立基于 SSR 分子 标记技 术的长豇 豆种子纯度快速检测方 法 , 可满足长豇豆种子产业化的需要。 关键词 :长
3、豇豆 ; SSR; 纯度鉴定 ; 遗传指纹图谱 中图分类号 :S 643 4 文献标识码 :A文章编号 :1004-1524(2010 06-0727-04A rapid and precise SSR based procedure for seed quality surveying of Vigna un guiculata ssp . sesqui p edalis (L . Verd .L U Zhong f u , XU Pe, i WANG Bao geng , LI U Yong hua , WU X iao hua , Hu T i n g ti n g , LI Guo j
4、i n g*(Instit ute of Vegetab les, Zhejiang A cade my of A gricult ural Sciences , H angzhou 310021, Chi naAbstrac t :Current applica tion of l a rge nu mber o f comm erc i a l asparagus bean culti va rs w it h v ery hi gh g enetic si m ilar i ty causedm ore andm o re d isputes on seed qua lity . In
5、t h is research , a set of SS R ma rkers for asparagus bean w ere de ve l oped based on a b i o i n f o r m ati cs based approach . T en o f t hese ma rkersw ere defi ned as diagnosti c m arkers by geno typ i ng a core co llecti on o f asparagus bean consisti ng of 44li nes . Based on t h is , a rap
6、 i d and prec i se SSR based proce dure f o r asparagus bean seed qua lity survey i ng w as estab lished , w hich wou l d m eet t he de m and o f rap i d l y deve l op i ng asparagus bean i ndustry .K ey word s :asparagus bean ; SS R; purity s urvey i ng ; genetic fi ngerpri nt长豇 豆 (Vi g na unguicul
7、ata ssp . sesqui p edalis (L . V er d. 嫩荚供食 , 是 我国重要的夏季豆类 蔬菜之一。我国从事长豇豆育种、 种子生产和经 营的科研院所、 企业众多。当前生产上应用的长 豇豆品种众多 , 年用种量大 , 商业品种间的遗传 相似性愈来愈高 , 同种异名、 同名异种现象日益 严重 , 种子质量纠纷时有发生。目前我国蔬菜品 种真伪与纯度鉴定大多依靠田间表现型鉴定 , 鉴定所需时间长 (一般需 5060d, 并受季节的限 制 , 而且作物的表现型易随环境条件的变化而变 化 , 特别是对于一些形态差异较小的品种间鉴定 难度更 大。因此 , 很 有必要 研究 开发 一
8、种 能早 期、 周年、 快速、 准确鉴定长豇豆品种真伪和纯度 的检测方法。DNA 分子标记技术在国内外已被用于鉴别 不同品种 之间在分子水平 上的差异1-3。由于在同一物种的各个品种间存 在有大量的多态性 标记 , 每一品种均存在有区别于其他品种的独特 标记 , 即一些特异性 DNA 片段 , 称为该品种的指 纹 , 各品种独 特的指纹 片段组合 构成该物 种的 DNA 指纹图谱。与传统的依据表型性状鉴定相 比 ,以在植株生长的 任何阶段进行 , 鉴定快速 , 并不 受基因表达和环境条件的影响等优点。SSR 分子标记技术利用 真核生物基 因组中 存在的大量微卫星重复序列设计引物 , 通过 PC
9、R 扩增串联的重复序列 , 并依据微卫星的重复次数 在同一物种不同基因型间 的差异揭示长度多态 性 4。 SSR 由于分布广、 稳定性和多态率高 , 操 作简单、 重复性好、 对 DNA 质量要求较低 等 , 被 誉为第二代分子标 记的明星。 SSR 分 子标记技 术克服了 RAPD 稳定性和 重复性差 , AFLP 技术 费用昂贵、 操作复杂、 对 DNA 的纯度和内切酶的 质量要 求很 高等缺 点。为此 , 本 研究 建立 基于 SSR 分子标记技术的种子纯度快速检测方法 , 现 将结果报道如下。1 材料与方法1. 1 材料供试材料由浙江省农业科学院蔬 菜研究所 提供 , 共 44份 ,
10、包括我国当前生 产上主栽品种、 代表不同地域分布和具有 植物学多态性的材料 37份 , 来自美国和非洲的材料 7份。 SSR 反应用 试剂 , T ris 、 硝酸银、 尿素等生化试剂购自北京鼎 国生物技术有限公司 , E co R , M se 内切酶购自 上海生物工程技术有限公司 , Taq 酶、 dNTP 等购 自 Pro m ega 公司。1. 2 方法1. 2 1 豇豆 DNA 数据库 的下载 、 序 列处 理和 SSR 引物设计从 CGKB 数 据 库 (http :/co w peageno m ics . m ed . v irg i n ia . edu /CGKB/下载豇豆
11、基因组序列 , 从 H ar vEST 数据库 (http :/harves.t ucr . edu /下 载长豇 豆 EST 序 列 ; 运 行 V ecScreen 程 序 (ht tp :/www. ncb. i n l m . n i h . gov 去除下载序列上包 含的载体和接头序列。运 行 CAP3程 序 (http :/genom e . cs . m tu . edu /sas. ht m l 对所得 序列进行序列拼 接以去除 重复 , 获得无冗余的 DNA 序列 ; 运行 H ornb ill 程 序 (h ttp :/hornbil. l cspp . latrobe .
12、 edu . au /cg i bin pub /ssrpri m er/index ssr . pl 鉴定 DNA 序列上所包 含的 SSR 位点并设计出 SSR 引物 100对 ; 交由上 1. 2 2 基因组 DNA 的提取将豇豆种子散播于装有基质 (蛭石 泥炭 =1 2 的育苗穴盘中 , 置于 2530! 下育苗 , 待第一 对真叶 平展时 , 取叶 片 0 1g , 加液 氮研磨 成粉 末 , 参照 M urry 和 Thos m pon 等 5的 C TAB 法提取 DNA 。1. 2 3 SSR 引物扩增和电泳检测PCR 分析反应体积为 12 5 L , 各组分为 10 buff
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基于 SSR 分子 标记 技术 长豇豆 种子 纯度 快速 鉴定 图文
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【w****g】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【w****g】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。