高致病性禽流感防治技术规范标准样本.doc
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1、附件一高致病性禽流感防治技术规范等14个动物疫病防治技术规范中国农业部二00七年四月目 录一、高致病性禽流感防治技术规范 1二、口蹄疫防治技术规范 64三、马传染性贫血防治技术规范117四、马鼻疽防治技术规范135五、布鲁氏菌病防治技术规范161六、牛结核病防治技术规范170七、猪伪狂犬病防治技术规范178八、猪瘟防治技术规范185九、新城疫防治技术规范214十、传染性法氏囊病防治技术规范228十一、马立克氏病防治技术规范237十二、绵羊痘防治技术规范247十三、炭疽防治技术规范254十四、J亚群禽白血病防治技术规范- 270一、高致病性禽流感防治技术规范高致病性禽流感(Highly Path
2、ogenic Avian Influenza, HPAI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引发以禽类为主烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必需汇报动物传染病,中国将其列为一类动物疫病。为预防、控制和扑灭高致病性禽流感,依据中国动物防疫法、重大动物疫情应急条例、国家突发重大动物疫情应急预案及相关法律法规制订本规范。1 适用范围本规范要求了高致病性禽流感疫情确定、疫情处理、疫情监测、免疫、检疫监督操作程序、技术标准及保障方法。本规范适适用于中国境内一切和高致病性禽流感防治活动相关单位和个人。2 诊疗2.1 流行病学特点2.1.1 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多个
3、禽类易感,多个野鸟也可感染发病。2.1.2 传染源关键为病禽(野鸟)和带毒禽(野鸟)。病毒可长久在污染粪便、水等环境中存活。2.1.3 病毒传输关键经过接触感染禽(野鸟)及其分泌物和排泄物、污染饲料、水、蛋托(箱)、垫草、种蛋、鸡胚和精液等媒介,经呼吸道、消化道感染,也可经过气源性媒介传输。2.2 临床症状2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡,潜伏期从几小时到数天,最长可达21天;2.2.2 脚鳞出血;2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部水肿;2.2.4 鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状,有时可见角膜炎症,甚至失明;2.2.5 产蛋忽然下降。2.3 病理改变2.3.1 消化道、呼吸道粘膜广泛
4、充血、出血;腺胃粘液增多,可见腺胃乳头出血,腺胃和肌胃之间交界处粘膜可见带状出血;2.3.2 心冠及腹部脂肪出血;2.3.3 输卵管中部可见乳白色分泌物或凝块;卵泡充血、出血、萎缩、破裂,有可见“卵黄性腹膜炎”;2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细胞管套、神经胶质灶、血管增生等病变;胰腺和心肌组织局灶性坏死。2.4 血清学指标2.4.1 未免疫禽H5或H7血凝抑制(HI)效价达成24及以上(附件1);2.4.2 禽流感琼脂免疫扩散试验(AGID)阳性(附件2)。2.5 病原学指标2.5.1 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,结果H5或H7亚型禽流感阳性(附件4);2.5.2 通用荧
5、光反转录-聚合酶链反应(荧光RT-PCR)检测阳性(附件6);2.5.3 神经氨酸酶抑制(NI)试验阳性(附件3);2.5.4 静脉内接种致病指数(IVPI)大于1.2或用0.2ml 1:10稀释无菌感染流感病毒鸡胚尿囊液,经静脉注射接种8只4-8周龄易感鸡,在接种后10天内,能致6-7只或8只鸡死亡,即死亡率75%;2.5.5 对血凝素基因裂解位点氨基酸序列测定结果和高致病性禽流感分离株基因序列相符(由国家参考试验室提供方法)。2.6 结果判定2.6.1 临床怀疑病例符合流行病学特点和临床指标2.2.1,且最少符合其它临床指标或病理指标之一;非免疫禽符合流行病学特点和临床指标2.2.1且符合
6、血清学指标之一。2.6.2 疑似病例临床怀疑病例且符合病原学指标2.5.1、2.5.2、2.5.3之一。2.6.3 确诊病例疑似病例且符合病原学指标2.5.4或2.5.5。3 疫情汇报3.1 任何单位和个人发觉禽类发病急、传输快速、死亡率高等异常情况,应立即向当地动物防疫监督机构汇报。3.2 当地动物防疫监督机构在接到疫情汇报或了解可疑疫情情况后,应立即派员到现场进行初步调查核实并采集样品,符合2.6.1要求,确定为临床怀疑疫情;3.3 确定为临床怀疑疫情,应在2个小时内将情况逐层报到省级动物防疫监督机构和同级兽医行政管理部门,并立即将样品送省级动物防疫监督机构进行疑似诊疗;3.4 省级动物防
7、疫监督机构确定为疑似疫情,必需派专员将病料送国家禽流感参考试验室做病毒分离和判定,进行最终确诊;经确定后,应立即上报同级人民政府和国务院兽医行政管理部门,国务院兽医行政管理部门应该在4个小时内向国务院汇报;3.5 国务院兽医行政管理部门依据最终确诊结果,确定高致病性禽流感疫情。4 疫情处理4.1 临床怀疑疫情处理对发病场(户)实施隔离、监控,严禁禽类、禽类产品及相关物品移动,并对其内、外环境实施严格消毒方法(附件8)。4.2 疑似疫情处理当确定为疑似疫情时,扑杀疑似禽群,对扑杀禽、病死禽及其产品进行无害化处理,对其内、外环境实施严格消毒方法,对污染物或可疑污染物进行无害化处理,对污染场所和设施
8、进行根本消毒,限制发病场(户)周围3公里家禽及其产品移动(见附件9、10)。4.3 确诊疫情处理疫情确诊后立即开启对应等级应急预案。4.3.1 划定疫点、疫区、受威胁区由所在地县级以上兽医行政管理部门划定疫点、疫区、受威胁区。疫点:指患病动物所在地点。通常是指患病禽类所在禽场(户)或其它相关屠宰、经营单位;如为农村散养,应将自然村划为疫点。疫区:由疫点边缘向外延伸3公里区域划为疫区。疫区划分时,应注意考虑当地喂养环境和天然屏障(如河流、山脉等)。受威胁区:由疫区边缘向外延伸5公里区域划为受威胁区。4.3.2 封锁由县级以上兽医主管部门报请同级人民政府决定对疫区实施封锁;人民政府在接到封锁汇报后
9、,应在二十四小时内公布封锁令,对疫区进行封锁:在疫区周围设置警示标志,在出入疫区交通路口设置动物检疫消毒站,对出入车辆和相关物品进行消毒。必需时,经省级人民政府同意,可设置临时监督检验站,实施对禽类监督检验任务。跨行政区域发生疫情,由共同上一级兽医主管部门报请同级人民政府对疫区公布封锁令,对疫区进行封锁。4.3.3 疫点内应采取方法4.3.3.1 扑杀全部禽只,销毁全部病死禽、被扑杀禽及其禽类产品;4.3.3.2 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理;4.3.3.3 对被污染物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行根本消毒。4.3.4 疫区内应采取方法4.3.4.1扑杀疫区内全部家
10、禽,并进行无害化处理,同时销毁对应禽类产品;4.3.4.2 严禁禽类进出疫区及禽类产品运出疫区;4.3.4.3 对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等按国家要求标准进行无害化处理;4.3.4.4 对全部和禽类接触过物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行根本消毒。4.3.5 受威胁区内应采取方法4.3.5.1 对全部易感禽类进行紧急强制免疫,建立完整免疫档案;4.3.5.2 对全部禽类实施疫情监测,掌握疫情动态。4.3.6 关闭疫点及周围13公里内全部家禽及其产品交易市场。4.3.7 流行病学调查、疫源分析和追踪调查追踪疫点内在发病期间及发病前21天内售出全部家禽及其产品,并销毁处理。根据高致病性
11、禽流感流行病学调查规范,对疫情进行溯源和扩散风险分析(附件11)。4.3.8 解除封锁4.3.8.1 解除封锁条件疫点、疫区内全部禽类及其产品按要求处理完成21天以上,监测未出现新传染源;在当地动物防疫监督机构监督指导下,完成相关场所和物品终末消毒;受威胁区按要求完成免疫。4.3.8.2 解除封锁程序经上一级动物防疫监督机构审验合格,由当地兽医主管部门向原公布封锁令人民政府申请公布解除封锁令,取消所采取疫情处理方法。4.3.8.3 疫区解除封锁后,要继续对该区域进行疫情监测,6个月后如未发觉新病例,即可宣告该次疫情被扑灭。疫情宣告扑灭后方可重新养禽。4.3.9 对处理疫情全过程必需做好完整详实
12、统计,并归档。5 疫情监测5.1 监测方法包含临床观察、试验室检测及流行病学调查。5.2 监测对象以易感禽类为主,必需时监测其它动物。5.3监测范围5.3.1 对养禽场户每十二个月要进行两次病原学抽样检测,散养禽不定时抽检,对于未经免疫禽类以血清学检测为主;5.3.2 对交易市场、禽类屠宰厂(场)、异地调入活禽和禽产品进行不定时病原学和血清学监测。5.3.3 对疫区和受威胁区监测5.3.3.1 对疫区、受威胁区易感动物天天进行临床观察,连续1个月,病死禽送省级动物防疫监督机构试验室进行诊疗,疑似样品送国家禽流感参考试验室进行病毒分离和判定。解除封锁前采样检测1次,解除封锁后纳入正常监测范围;5
13、.3.3.2 对疫区养猪场采集鼻腔拭子,疫区和受威胁区全部禽群采集气管拭子和泄殖腔拭子,在野生禽类活动或栖息地采集新鲜粪便或水样,每个采样点采集20份样品,用RT-PCR方法进行病原检测,发觉疑似感染样品,送国家禽流感参考试验室确诊。5.5 在监测过程中,国家要求试验室要对分离到毒株进行生物学和分子生物学特征分析和评价,亲密注意病毒变异动态,立即向国务院兽医行政管理部门汇报。5.6 各级动物防疫监督机构对监测结果及相关信息进行风险分析,做好预警预报。5.7监测结果处理监测结果逐层汇总上报至中国动物疫病预防控制中心。发觉病原学和非免疫血清学阳性禽,要根据国家动物疫情汇报管理措施相关要求立即汇报,
14、并将样品送国家禽流感参考试验室进行确诊,确诊阳性,按相关要求处理。6 免疫6.1 国家对高致病性禽流感实施强制免疫制度,免疫密度必需达成100%,抗体合格率达成70%以上。6.2 预防性免疫,按农业部制订免疫方案中要求程序进行。6.3 突发疫情时紧急免疫,按本规范相关条款进行。6.4 所用疫苗必需采取农业部同意使用产品,并由动物防疫监督机构统一组织、逐层供给。6.5 全部易感禽类喂养者必需按国家制订免疫程序做好免疫接种,当地动物防疫监督机构负责监督指导。6.6 定时对免疫禽群进行免疫水平监测,依据群体抗体水平立即加强免疫。7 检疫监督7.1产地检疫喂养者在禽群及禽类产品离开产地前,必需向当地动
15、物防疫监督机构报检,接到报检后,必需立即到户、到场实施检疫。检疫合格,出具检疫合格证实,并对运载工具进行消毒,出具消毒证实,对检疫不合格按相关要求处理。7.2屠宰检疫动物防疫监督机构检疫人员对屠宰禽只进行验证查物,合格后方可入厂(场)屠宰。宰后检疫合格方可出厂,不合格按相关要求处理。7.3引种检疫中国异地引入种禽、种蛋时,应该先到当地动物防疫监督机构办理检疫审批手续且检疫合格。引入种禽必需隔离喂养21天以上,并由动物防疫监督机构进行检测,合格后方可混群喂养。7.4监督管理7.4.1禽类和禽类产品凭检疫合格证运输、上市销售。动物防疫监督机构应加强流通步骤监督检验,严防疫情传输扩散。7.4.2生产
16、、经营禽类及其产品场所必需符合动物防疫条件,并取得动物防疫合格证。7.4.3各地依据防控高致病性禽流感需要设置公路动物防疫监督检验站,对禽类及其产品进行监督检验,对运输工具进行消毒。8 保障方法8.1 各级政府应加强机构队伍建设,确保各项防治技术落实到位。8.2 各级财政和发改部门应加强基础设施建设,确保免疫、监测、诊疗、扑杀、无害化处理、消毒等防治工作经费落实。8.3 各级兽医行政部门动物防疫监督机构应按本技术规范,加强应急物资贮备,立即演练和培训应急队伍。8.4 在高致病禽流感防控中,人员防护按高致病性禽流感人员防护技术规范实施(附件12)。附件1血凝抑制(HI)试验流感病毒颗粒表面血凝素
17、(HA)蛋白,含有识别并吸附于红细胞表面受体结构,HA试验由此得名。HA蛋白抗体和受体特异性结合能够干扰HA蛋白和红细胞受体结合从而出现抑制现象。该试验是现在WHO进行全球流感监测所普遍采取试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型判定,也可用来检测禽血清中是否有和抗原亚型一致感染或免疫抗体。HA-HI试验优点是现在WHO进行全球流感监测所普遍采取试验方法,可用来判定全部流感病毒分离株,可用来检测禽血清中感染或免疫抗体。它缺点是只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI象,各亚型间无显著交叉反应;除鸡血清以外,用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽血清时需要除去存在于血清中非特异凝集素,对于其它禽种,也能
18、够考虑选择在调查研究中禽种红细胞;需要在每次试验时进行抗原标准化;需要正确判读技能。1 阿氏(Alsevers)液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4保留备用。2 10%和1%鸡红细胞液制备2.1采血 用注射器吸收阿氏液约1mL,取最少2只SPF鸡(假如没有SPF鸡,可用常规试验证实体内无禽流感和新城疫抗体鸡),采血约24mL,和阿氏液混合,放入装10mL阿氏液离心管中混匀。2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中血液经15001800 r/min 离心8分钟,弃上清液,沉
19、淀物加入阿氏液,轻轻混合,再经15001800 r/min离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层白细胞薄膜,再反复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL,轻轻混合成红细胞悬液,4保留备用,不超出5天。2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保留不超出5天红细胞,在锥形刻度离心管中离心15001800 r/min 8分钟,弃去上清液,正确观察刻度离心管中红细胞体积(mL),加入9倍体积(mL)生理盐水,用吸管反复吹吸使生理盐水和红细胞混合均匀。2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀10%鸡红细胞悬液1 mL,加入9 mL生理盐水,混合均匀即可。3 抗原血凝效价测定(HA试验,微量法)3.1 在微量反
20、应板1孔12孔均加入0.025mL PBS,换滴头。3.2吸收0.025mL病毒悬液(如感染性鸡胚尿囊液)加入第l孔,混匀。3.3从第1孔吸收0.025mL病毒液加入第2孔,混匀后吸收0.025mL加入第3孔,如此进行对倍稀释至第11孔,从第11孔吸收0.025mL弃之,换滴头。3.4每孔再加入0.025mL PBS。3.5每孔均加入0.025mL 体积分数为1%鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充足摇匀后加入)见附录B。3.6振荡混匀,在室温(2025)下静置40min后观察结果(假如环境温度太高,可置4环境下反应1小时)。对照孔红细胞将呈显著钮扣状沉到孔底。3.7结果判定 将板倾斜,观察血凝板,
21、判读结果(见下表)。表1:血凝试验结果判读标准类别孔 底 所 见结果12345红细胞全部凝集,均匀铺于孔底,即100%红细胞凝集红细胞凝集基础同上,但孔底有大圈红细胞于孔底形成中等大圈,四面有小凝块红细胞于孔底形成小圆点,四面有少许凝集块红细胞于孔底呈小圆点,边缘光滑整齐,即红细胞完全不凝集+-能使红细胞完全凝集(100%凝集,+)抗原最高稀释度为该抗原血凝效价,此效价为1个血凝单位(HAU)。注意对照孔应展现完全不凝集(-),不然此次检验无效。4 血凝抑制(HI)试验(微量法)4.1 依据3试验结果配制4HAU病毒抗原。以完全血凝病毒最高稀释倍数作为终点,终点稀释倍数除以4即为含4HAU抗原
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