远隔缺血预处理分离液对人肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用.pdf
《远隔缺血预处理分离液对人肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《远隔缺血预处理分离液对人肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、基金项目:国家自然科学基金()通讯作者:裴汉军【技术与方法】远隔缺血预处理分离液对人肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用戴文俊,裴汉军(内蒙古科技大学包头医学院,内蒙古 包头 )摘要 目的:研究远隔缺血预处理()分离液对人肾小管上皮细胞()缺氧 复氧()损伤的影响及机制。方法:将 细胞分为时间对照组、处理组、自噬干预组。时间对照组细胞在正常条件下培养,组细胞使用 分离液预处理,自噬干预组细胞在 处理基础上,加入自噬抑制剂 甲基腺嘌呤(,),后三组细胞使用三气培养箱进行 构建损伤模型。模型成功后使用光学显微镜观察各组细胞状态,应用 观察 蛋白、蛋白的表达水平。结果:镜下示 分离液可明显减轻 对 细
2、胞的损伤,加入自噬抑制剂,分离液对 细胞 损伤的保护作用被阻断。结果显示,分离液可使 细胞线粒体中的自噬特异性蛋白 、表达水平增高。结果显示,与 组比,组 及 的 表达量明显升高;加入自噬抑制剂,细胞线粒体中的自噬特异性蛋白 、表达降低,及 的 表达量同时也明显降低。结论:分离液对 细胞 后损伤具有保护作用,作用机制可能与线粒体自噬相关。关键词 远隔缺血预处理分离液;人肾小管上皮细胞;缺氧 复氧;线粒体自噬 :,(,):()()():,(),:年第 卷第 期 ,;,:,;急性肾损伤(,)表现为短时间内肾功能迅速下降,通常以血肌酐绝对水平上升 ,或超过基线值的 倍为标准,是临床上发病率和死亡率都
3、很高的常见危重症,且随着病程的进展,可逐渐发展为慢性肾脏病 ,严重影响患者愈后。远隔缺血预处理(,)是指通过多次规律性、短暂性地对远离靶器官的肢体远端进行缺血处理,由此来使靶器官更加耐受缺血再灌注等所带来的损伤,从而发挥多种器官保护作用 。因其操作方便、对患者伤害小而在临床中广泛应用。但是,有关 防治 的机制目前尚未完全阐明。目前认为,发病机制复杂,涉及多种病理过程,如活性氧(,)的释放、趋化分子和多种细胞因子参与的炎症反应等 。这些病理过程诱导肾小管上皮细胞等出现损伤、肿胀和功能障碍,进一步加重了细胞的缺血缺氧,最终出现细胞凋亡和死亡,导致 的发生。如今,的发病率居高不下,心脏介入术后 发病
4、率可高达 ,而在危重症病房中,其发生率更是高达 ,现 已成为影响人类健康的重大威胁。如何避免急性肾损伤的发生和减少其损伤程度,一直是众人研究的焦点。近年来有研究发现,的大多数病理过程与线粒体功能障碍相关 ,因此线粒体自噬作为能够选择性清除受损的线粒体从而保护健康线粒体功能的特殊类型自噬 ,可能成为新的治疗思路。本研究通过体外细胞实验来探讨 对 的保护作用及对自噬的调节作用。材料与方法 材料()细胞:人肾小管上皮细胞()()。()试剂:细胞专用培养基();胰蛋白酶 (美国 公司,);蛋白定量试剂盒(上 海 赛 默 飞 世 尔 科 技 有 限 公 司,);蛋白抗体(上海优宁维生物科技股份有限公司,
5、)、蛋白抗体(美国 公司,);(中国碧云天生物科技有限公司,)。()仪器:电泳仪,美国 公司,。实验方法 细胞培养将 细胞置于 专用培养基(含 、青霉素和链霉素)中,在恒温饱和湿度培养箱中培养,培养箱条件设置为,和 空气。鼠血浆分离液的提取及保存采用腹腔注射戊巴比妥钠()的方法给予大鼠麻醉,待麻醉成功后,使用充气袖带对大鼠后肢根部进行阻断血流。对充气袖带进行持续充气,至大鼠后肢的皮肤出现发绀,表示股动脉已经被阻断,阻断 后释放袖带压力,复灌注 后,再次重复以上动作,如此个循环,后经心脏取血,置入真空肝素化采血管中,使用 离心机 离心 提取血浆,分装入肝素化 管中 冻存,使用时使用 离心机 离心
6、 ,取上清液按 培养基稀释。年第 卷第 期 模型建立采用物理性 模式建立细胞损伤模型。将长势良好的模型组细胞置于三气培养箱中培养 ,培养箱条件设置为,、,随后打开箱门,将培养箱条件设置为,和 空气,关闭箱门复氧培养。实验分组实验分为时间对照组、组、处理组、自噬干预组。()时间对照组(,):取对数生长期 细胞,用 专用培养基(含 、青霉素和链霉素),在恒温饱和湿度培养箱中培养 ,培养箱条件设置为,和 空气;()缺氧 复氧组(,):取对数生长期 细胞,使用 专用培养基,在三气培养箱中恒温饱和湿度培养 ,培养箱条件设置为 ,、,随后打开箱门,将培养箱条件设置为,和 空气,关闭箱门复氧培养;()远隔缺
7、血预处理组(,):取对数生长期 细胞,将 分离液稀释后预处理 细胞,后余同 组;()自噬干预组():取对数生长期 细胞,在 处理的基础上,加入 (工作浓度,)培养 细胞,后余同 组。用光学显微镜观察各组 细胞将造模成功的各组细胞置于倒置显微镜下,使用 倍镜头观察细胞,以了解各组 细胞造模后的状态。法检测 、蛋白表达水平取 细胞,提取线粒体蛋白,应用 法测蛋白浓度,采用 检测 细胞线粒体中自噬特异性蛋白 和 的表达水平。分析各组细胞 、的 表达取 细胞,提取总 ,逆转录生成 ,设计引物并由上海生物工程公司合成(见表 ),以 为参照基因,采用 法分析各组细胞 、的 表达水平。表 引物成分表引物引物
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 远隔 缺血 预处理 分离 肾小管 上皮细胞 缺氧 损伤 保护 作用
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,个别因单元格分列造成显示页码不一将协商解决,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。