江苏地区2种入侵性斑潜蝇的发生分布及耐药性.pdf
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1、生命科学版),2023,45(1):12 3-132.引文格式:王禹程,常亚文,袁嘉雯,等。江苏地区2 种人侵性斑潜蝇的发生分布及耐药性J.扬州大学学报(农业与Jan.2024Journal of Yangzhou University(Agricultural and Life Science Edition)2024年1月Vol.45 No.1扬州大学学报(农业)生命科学版)第45卷第1期DOI:10.16872/ki.1671-4652.2024.01.016江苏地区2 种入侵性斑潜蝇的发生分布及耐药性王禹程,常亚文,袁嘉雯,田洁,龚伟荣4,杜予州1.5*(1.扬州大学植物保护学院暨应用
2、昆虫研究所,江苏扬州2 2 50 0 9;2.贵州省烟草公司安顺市公司,贵州安顺56 10 0 0;3.扬州市广陵区农业技术推广服务中心,江苏扬州2 2 50 0 9;4.江苏省植物保护植物检疫站,南京2 10 0 36;5.扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,江苏扬州2 2 50 0 9)摘要:三叶斑潜蝇(Liriomyzatrifolii)和美洲斑潜蝇(L.sativae)是我国一类园艺及蔬菜作物上重要外来有害生物,其形态学相似,危害严重。2 0 14和2 0 19年分别对江苏地区2 种斑潜蝇的发生分布和危害程度进行调查并对其发生危害的原因进行探讨。结果表明:美洲斑潜蝇主要在
3、苏北地区发生危害并不断向苏南地区扩张,三叶斑潜蝇主要在苏南、苏中地区发生危害,其危害范围逐渐缩小且向北扩张至徐州;2 种斑潜蝇主要在豆科植物上进行危害,原先嗜食的茄科作物危害等级整体减弱,而葫芦科作物上原本占优势的三叶斑潜蝇也逐渐被美洲斑潜蝇取代;田间斑潜蝇种群对阿维菌素的敏感性最强,且扬州地区的种群药剂敏感性显著低于苏州和徐州。综上,2 0 19 年较2 0 14年2 种斑潜蝇在江苏地区发生一定程度的种群动态变化,需要加强监测,并根据近缘种斑潜蝇的发生规律和影响因子进行防治。关键词:斑潜蝇;危害规律;影响因子;毒力测定中图分类号:S433文献标志码:A文章编号:16 7 1-46 52(2
4、0 2 4)0 1-0 12 3-10Study on the occurrence,distribution and insecticide toleranceof two invasive Liriomyza species in Jiangsu ProvinceWANG Yucheng,CHANG Yawen,YUAN Jiawen”,TIAN Jie”,GONG Weirong,DU Yuzhoul.5(l.Institute of Applied Entomology,College of Plant Protection,Yangzhou University,Yangzhou 2
5、25009,China;2.Guizhou Province Tobacco Company Anshun City Company,Anshun 561000,China;3.Agricultural Technology Ertension Service Center of Guangling District in Yangzhou City,Yangzhou 225009,China;4.Plant Protection and Plant Quarantine Station of Jiangsu Province,Nanjing 210036,China;5.Joint Inte
6、rnational Research Laboratory of Agriculture and Agricultural Product Sa fetyof the Ministry of Education,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China)ABSTRACT:Liriomyza trifolii and L.sativae are important invasive pests on horticultural and vegetable plants in China,with similar biological characteri
7、stics and serious diseases.In this study,the occurrence,distribution and damage degreeof two Liriomyza species in 2014 and 2019 in Jiangsu were investigated and compared.Meanwhile,the reasons for itscompetition substitution in Jiangsu Province were discussed.Our result showed that L.sativae was main
8、ly found in north-ern regions of Jiangsu but the scope of its damage was expanding in southern regions of Jiangsu.L.trifolii was distribu-ted across central and southern areas of Jiangsu,but its damage scope gradually narrowed and expanded northward toXuzhou.The two Liriomyza species mainly harmed l
9、eguminous plants.In recent years,the damage level of Liriomyzaon solanaceous crops was weakened,while the original dominant species L.trifoli on cucurbitaceae crops was graduallyreplaced by L.sativae.Abamectin had a good effect on the field population of Liriomyza and the insecticide sensitivity ofL
10、iriomyza in Yangzhou was significantly lower than that in Suzhou and Xuzhou.These results all indicated that comparedwith 2014,the distribution of Liriomyza in 2019 changed significantly,which indicated that it was necessary to strength-en monitoring and control based on the occurrence regularities
11、and influencing factors of Liriomyza.KEY WORDS:Liriomyza;damage regularity;influencing factor;toxicity measurement收稿日期:2 0 2 3-0 3-2 0基金项目:国家重点研发计划项目(2 0 2 2 YFC2601100);江苏省科技计划项目(BE2014410);江苏现代农业产业体系专项JATS(2 0 2 2)350:国家自然科学基金资助项目(32 2 0 2 2 7 5);江苏省研究生科研创新计划项目(KYCX22-3524)作者简介:王禹程(1996 一),女,江苏苏州人
12、,扬州大学博士研究生,主要从事外来有害生物研究。*通信作者,杜予州,场州大学教授、博导,主要从事昆虫系统学及外来有害生物研究;E-mail:y z d u y z u.e d u.c n。124第45卷扬州大学学生命科学版)斑潜蝇隶属双翅目潜蝇科(Agromyzidae)植潜蝇亚科(Phytomyzidae)斑潜蝇属(Liriomyza),是我国一类重要的外来有害生物,也是一类危害蔬菜、花卉的世界性害虫1-2。斑潜蝇嗜食寄主种类繁多,目前已逐渐成为我国蔬菜上重要害虫3。其幼虫直接潜食植物叶片组织,降低植物光合能力,导致农作物产量下降;成虫刺破叶片取食、产卵形成刻点,为病菌人侵提供途径1.1。目
13、前三叶斑潜蝇(Liriom y-zatrifoli)、美洲斑潜蝇(L.sativae)和南美斑潜蝇(L.huidobrensis)是我国危害严重的3种多食性斑潜蝇3.5。美洲斑潜蝇于1994年在我国海南三亚首次发现,由于该虫喜欢高温环境,往往在夏季高温天气暴发成灾,很快便成为我国大陆地区主要的斑潜蝇种类6。随后南美斑潜蝇侵入我国云贵两省,并不断向其他地区扩散7,但南美斑潜蝇喜欢温暖?爽环境,适温范围和发育起点温度更低,主要发生在?爽的春秋季,因此没有与美洲斑潜蝇发生竞争取代现象8-9。2 0 0 5年在我国广东中山市首次发现三叶斑潜蝇传入危害,并有逐渐向北扩散传播的趋势3.10。调查5发现,海
14、南省原有优势种群美洲斑潜蝇明显减少,而三叶斑潜蝇逐渐取代美洲斑潜蝇成为优势种。三叶斑潜蝇也喜欢高温环境,与美洲斑潜蝇适宜生长发育的温度差异不大,二者在适宜条件下繁殖力和竞争力也相当,但三叶斑潜蝇对不利温度条件的耐受能力与竞争能力均强于美洲斑潜蝇5.111。海南地区大部分时间气温较高,为三叶斑潜蝇成为优势种提供了条件。但冬季海南地区气温相对较低,更适宜美洲斑潜蝇生长发育,其竞争优势强于三叶斑潜蝇,这可能是海南三叶斑潜蝇一直未完全取代美洲斑潜蝇的重要原因11。除海南省外,三叶斑潜蝇与美洲斑潜蝇竞争取代的现象同样出现在我国东南沿海各地。在低温冷?条件下南美斑潜蝇竞争力强于美洲斑潜蝇,而在相对更高的温
15、度下美洲斑潜蝇竞争力强于南美斑潜蝇,因此,在我国北方每年均上演着美洲斑潜蝇与南美斑潜蝇相互取代和更替现象9.12 就这3种重要斑潜蝇在我国的适生地理区域而言,美洲斑潜蝇和三叶斑潜蝇的地理生态位基本重叠,主要分布在热带、亚热带等气温较高的地区,例如海南、广东、广西等地,在我国北方只在高温季节或保护地有分布5.13;而南美斑潜蝇主要生存在温带及海拔或纬度较高的地区,例如云南、贵州等西南地区和青海、甘肃等西北地区14。在江苏,美洲斑潜蝇最早于1994年在南京市发现,到2 0 0 0 年已成为江苏许多地区危害严重的一种蔬菜害虫15-18。三叶斑潜蝇于2 0 0 8 年在江苏泰兴和句容地区首次发现,后逐
16、渐成为江苏主要斑潜蝇种类16-18。目前三叶斑潜蝇已成为江苏南部地区主要斑潜蝇种类,而苏中等沿江地区是三叶斑潜蝇和美洲斑潜蝇共同发生危害的区域,苏北大部分地区仍然以美洲斑潜蝇为主,少数苏北地区开始发现三叶斑潜蝇的危害,这表明三叶斑潜蝇有向北蔓延扩散的趋势17.19。此外,目前在江苏地区未发现南美斑潜蝇的危害。诸多研究9.10.2 0 表明,影响人侵性斑潜蝇近缘种发生危害及分布的因素很多,如生殖干扰、抗药性、寄主植物、天敌、温度等。鉴此,本研究对江苏地区蔬菜上美洲斑潜蝇和三叶斑潜蝇的危害情况进行调查,比较2 0 14和2 0 19年江苏地区入侵性斑潜蝇的发生和危害特点,并对形成这些特点的成因进行
17、初步探讨,以期为这2 种斑潜蝇的有效防治提供依据。1材料与方法1.1田间调查及鉴定方法1.1.1田间调查方法2014和2 0 19年在斑潜蝇发生危害高峰期(6 一11月),对江苏省13个地级市所辖部分市(区、县)47个采样点的保护地和露地蔬菜进行调查。采集带有疑似斑潜蝇危害潜道和活虫的蔬菜叶片,记录采集时间、采集地点和寄主植物名称并带回实验室继续饲养。待采集叶片上的幼虫化蛹后,用毛笔将蛹挑至玻璃试管中,置于培养箱中待其羽化为成虫,然后用吸虫管收集新羽化的成虫,将部分成虫浸泡在7 5%乙醇中用于形态鉴定,部分成虫浸泡在10 0%乙醇中并迅速置于一2 0 冰箱中保存,用于分子鉴定。1.1.2斑潜蝇
18、鉴定方法1.1.2.1形态特征鉴定近缘种斑潜蝇形态学鉴定参照Yang等1、Chang等117 方法,略加改进。将样本置于显微镜下调125第1期王禹程等:江苏地区2 种入侵性斑潜蝇的发生分布及耐药性整姿势和角度,将头顶鬃和腹部特征突出,对照相关资料进行初步鉴定。主要鉴定特征2 1如下:成虫内外顶鬃着生位置和雄成虫外生殖器形态。三叶斑潜蝇内、外顶鬃均着生在黄色区,雄虫外生殖器端阳体中间偏端部缢缩明显,柄部较长,阳茎端短壶状;美洲斑潜蝇内顶着生在黄色区,外顶鬃着生在黄色或黄黑交界处,雄虫外生殖器端阳体呈豆荚状,柄部短,阳茎端长壶状;南美斑潜蝇内、外顶鬃均着生在黑色区,雄虫外生殖器端阳体与中阳体仅以膜
19、囊相连,阳茎端双鱼形。1.1.2.2分子生物学鉴定1)基因组DNA提取:采用南京诺唯赞生物科技公司的DNA小量试剂盒(DC102)并按说明书进行DNA提取。具体步骤如下:将包含单头成虫或蛹的离心管放入液氮中,30 s后取出,移入玻璃匀浆器中,加人10 0 LBufferGA和2 0 L蛋白酶K研磨2 min,再用130 LBufferGA冲洗;将匀浆器中所有溶液收集至新的1.5ml离心管中,55水浴10 min,12 0 0 0 r min离心3min,将上清液转移至新的1.5mL离心管中;加人2 50 lBufferGB后2 8 0 0 rmin-涡旋2 0 s,7 0 水浴10 min;加
20、人18 0 L无水乙醇,2 8 0 0 rmin-1涡旋30 s,将混合液加人离心柱中,12 0 0 0 rmin1离心1min;弃滤液,在离心柱中加人50 0 LWashingBufferA,12 0 0 0 r min-1离心1min;弃滤液,在离心柱中加人650LWashingBufferB,12 0 0 0 r min离心1min;弃滤液,用6 50 LWashingBufferB再洗脱1次;弃滤液后离心2 min;最后加人55预热的ElutionBuffer20L,室温静置1min,再12 0 0 0 rmin-1离心1min,收集DNA样品。2)PC R扩增及产物检测:根据GenB
21、ank中发布的3种斑潜蝇mtDNACOI基因序列使用Premier5.0设计特异性引物,分别为三叶斑潜蝇(登录号EU219614,L t-F序列CAATTACAATACTATTAACAGACC)、美洲斑潜蝇(登录号AY375175,L s-F序列AGCTCCAGACATAGCATTTCCTCG)、南美斑潜蝇(登录号EU219615,L h-F序列TTCAGATGGCTTGCCACATTACACG),PCR扩增时将这3种引物混配成最终上游引物,下游引物R序列为GAATAAATCCKGCTATAATTGCAAATAC以上序列由上海生工生物工程公司合成。PCR反应体系(2 5L)中,2 XTaqma
22、sterMix(南京诺唯赞生物科技公司,P111/P112)12.5L,10molL-上、下游引物各1L,D NA 模板2 l,d d H,O 8.5L。扩增条件:94预变性3min;94变性30 s,53退火30 s,7 2 延伸1min,共30 个循环;最后7 2 延伸10 min。反应结束后,取5LPCR产物用10 gL-1琼脂糖凝胶电泳检测,电泳缓冲液为0.5TBE,电压140 V,用DL2000Marker作为分子量标准参照物。电泳结束后,将凝胶置于紫外分析仪上观察,用凝胶成像仪拍照并记录结果。三叶斑潜蝇、美洲斑潜蝇、南美南美斑潜蝇线粒体COI基因序列扩增片段大小分别为 7 0 5、
23、1 0 55、358 bp221.2危害等级划分从每个调查点采集寄主植物,随机选取不同部位叶片10 张,记录每张寄主叶片上幼虫数,统计总潜道数、死虫数及叶面积,并计算不同寄主植物单位叶面积内虫量(头cm-)的平均值16-17。按危害程度将单位叶面积虫量分为4级16-17:1级,1头cm-。1一4级分别记作十、+、t、t。1.3室内毒力测定方法1.3.1供试药剂选择防治斑潜蝇最常用的3种化学药剂进行毒力测定,即3%阿维菌素乳油(安徽省四达农药化工公司)、8 0%杀虫单粉剂(安徽华星化工公司)、2 0%斑潜净(中国农业科学院植物保护所廊坊农药中试厂)。1.3.2供试斑潜蝇根据前期田间调查情况,分别
24、在苏南、苏中、苏北地区各选一处代表性城市采集田间含危害潜道的豇豆叶片。收集叶片上新蛹,待其羽化后进行成虫毒力测定。幼虫毒力测定对象为3日龄幼虫,选取含多数3日龄幼虫潜道的叶片,并用针将所选叶片上其余大小潜道中的幼虫扎死。1.3.3生物测定方法1)幼虫采用浸渍法测定供试农药的敏感水平:以蒸馏水处理为对照,同时用蒸馏水将每种农药分美洲126第45卷扬州大学学报(农业生命科学版)别稀释成5个浓度梯度,每个浓度设3个重复。将供试叶片完全浸入稀释好的药液中,10 s后取出晾干,将叶柄插人含水花泥小方块中进行保湿,统计幼虫死亡数及化蛹数。2)成虫采用药膜法测定供试农药的敏感水平:以蒸馏水处理为对照,用蒸馏
25、水将每种农药分别稀释成5个浓度梯度,每个浓度设3个重复。将2 ml稀释液加人玻璃管(3cm10cm)中,滚动玻璃瓶,待其完全蒸发后在玻璃管内表面留下一层均匀的药膜2 3。将新羽化的成虫放入药膜管中并立即用纱布密封管口,然后在纱布上方放置含10%蜂蜜水的湿润棉花球进行营养补充;48 h后统计成虫死亡数,并用DPS9.01软件计算LCso和95%置信区间2 42结果与分析2.1江苏斑潜蝇发生危害规律调查2.1.1斑潜蝇种类及发生分布调查对江苏省13个市47 个采样点的斑潜蝇调查结果表明,2 0 14年江苏受三叶斑潜蝇和美洲斑潜蝇危害地点分别占总调查点的6 3.0%和50.0%,受美洲斑潜蝇和三叶斑
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