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霍乱诊断标准及处理原则GB.doc
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1、 霍乱诊断标准及解决原则GB 霍乱诊断标准及解决原则 GB 霍乱是由 01 群和 0139 群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病, 是发病急、 传播快、 波及面广、危害严重的甲类传染病, 也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。 根据中华人民共和国传染病防治法 和中华人民共和国传染病防治法实行办法 的规定,制定本病的诊断标准及解决原则。 1 主题内容与合用范围 本标准规定了霍乱的诊断标准, 对病人、 疫点、 疫区的解决原则等, 并推荐了对霍乱的病原学检查、 血清免疫学检查、 霍乱弧菌的鉴定和分型方法以及对病人的补液疗法等。 本标准合用于全国各级卫生防疫、 医疗保健机构对由 01 群和 0139 群
2、霍乱弧菌引起的霍乱的诊断和解决。 2 诊断原则 根据夏秋季节霍乱流行期间的疫区内, 凡有腹泻, 伴有呕吐, 从粪便或吐泻物检出 01 群或0139 群霍乱弧菌或血清检核对 01 群或 0139 群霍乱弧菌的抗体有明显升高者予以诊断。 病人的临床症状可由轻度到重度不等。 3 诊断标准 3.1 疑似霍乱诊断标准 a.凡有典型临床症状, 如剧烈腹泻, 水样便(黄水样、 清水样、 米泔样或血水样), 伴有呕吐,迅速出现严重脱水, 循环衰竭及肌肉痉挛(特别是腓肠肌)的首发病例, 在病原学检查尚未肯定前。 b.霍乱流行期间有明确接触史(如同餐、 同住或护理者等), 并发生泻吐症状, 而无其他因素可查者。
3、具有上述项目之一者诊断为疑似霍乱。 3.2 拟定诊断标准 a. 凡有腹泻症状, 粪便培养 01 群或 0139 群霍乱弧菌阳性; b. 霍乱流行期间的疫区内, 凡有霍乱典型症状(见 3.1a), 粪便培养 01 群和 0139 群霍乱弧菌阴性, 但无其他因素可查者; c. 在流行期间的疫区内有腹泻症状, 作双份血清抗体效价测定, 如血清凝集实验呈 4 倍以上或杀弧菌抗体测定呈 8 倍以上增长者; d. 在疫源检查中, 初次粪便培养检出 01 群或 0139 群霍乱弧菌前后各 5 天内有腹泻症状者。 临床诊断: 具有 b。 确诊病例: 具有 a 或 c 或 d。 4 临床分型标准 4.1 轻型
4、仅有腹泻症状, 很少伴呕吐, 大便一天少于 10 次, 大便性状为软便、 稀便或黄水样便, 个别患者粪便带粘液或血, 皮肤弹性正常或略差, 大多数患者能照常进食及起床活动, 脉搏、血压、 尿量均正常。 4.2 中型 腹泻次数一日 1020 次, 精神表现淡漠, 有音哑, 皮肤干而缺少弹性, 眼窝下陷, 有肌肉痉挛, 脉搏细速, 血压(收缩压)儿童9.33kPa(70mmHg), 成人 129.33kPa(9070mmHg),尿量每日400mL, 脱水限度相称体重儿童为 510, 成人为 48。 4.3 重型 腹泻次数一日 20 次以上, 极度烦躁甚至昏迷, 皮肤弹性消失, 眼窝深凹, 明显发绀
5、, 严重肌肉痉挛, 脉搏薄弱而速, 甚或无脉, 血压(收缩压)儿童6.67kPa(50mmHg), 成人9.33kPa(70mmHg)或测不到等循环衰竭的表现, 尿量每日50mL 或无尿, 脱水限度儿童相称于体重 10以上, 成人 8以上。 4.4 中毒型(干性霍乱) 为一较罕见类型, 起病后迅速进入休克状态, 无泻吐或泻吐较轻, 无脱水或仅轻度脱水, 但有严重中毒性循环衰竭。 5 治疗原则 5.1 按甲类传染病隔离治疗。 危重病人应先就地抢救, 待病情稳定后在医护人员陪同下送往指定的隔离病房。 确诊与疑似病例应分开隔离。 5.2 轻度脱水病人, 以口服补液为主。 口服补液治疗方法可参考附录
6、D 的 D1 章。 5.3 中、 重型脱水病人, 须立即进行静脉输液抢救, 待病情稳定、 脱水限度减轻、 呕吐停止后改为口服补液。 输液治疗方法可参考附录 D 的 D2 章。 5.4 在液体疗法的同时, 给予抗菌药物治疗以减少腹泻量和缩短排菌期。 可根据药品来源及引起流行的霍乱弧菌对抗菌药物的敏感性, 选定一种常用抗菌药物, 连服 3 天。 常用抗菌药物及剂量可参考附录 E。 6 解除隔离标准 6.1 停服抗菌药物后, 连续二天粪便培养(如无粪便, 可用肛拭子从直肠取粪便)未检出霍乱弧菌者解除隔离。 6.2 患者经治疗症状消失后, 如无大便培养条件, 自发病日起, 住院隔离不得少于七天。 6.
7、3 慢性带菌者, 大便培养连续七天阴性, 每周培养胆汁一次, 连续两次阴性者可解除隔离,但尚需进行流行病学观测。 7 疫点疫区解决 疫点疫区的划定及解决的目的在于及时发现和管理传染源, 切断传播途径, 迅速控制疫情。 对从首例病人检出的埃尔托型霍乱弧菌应及时做噬菌体生物分型。 如为流行株要及时划定疫点、 疫区, 并按下列规定解决。 如为非流行株, 按一般腹泻病菌解决。 7.1 疫点、 疫区的划定 a. 疫点: 指与病人、 疑似病人或带菌者同一门出入的住户或与其生活有密切关系的若干户为范围。 b. 疫区: 根据疫点的地理位置、 水系分布、 交通情况、 自然村落等特点来划定。 一般在农村以一个村或
8、几个村、 一个乡或毗邻乡, 在城市以一个或几个居委会或一个街道为范围。 7.2 疫点解决 a. 疫情报告: 责任疫情报告人发现病人、 疑似病人或带菌者时, 城乡于 6h 内, 农村于 12h内, 以最快的通讯方式向发病地的卫生防疫机构报告, 并同时报出传染病卡。 b. 隔离治疗传染源: 病人、 疑似病人和带菌者要立即就地隔离治疗。 转送病人时对途中污染的物品、 地面和运送病人的工具要随时消毒解决。 c. 疫点消毒: 做好随时消毒和终末消毒。 对病人、 疑似病人和带菌者的吐泻物和污染过的环境、 物品、 饮用水进行消毒。 d. 验便: 对疫点内所有人员, 自开始解决之日起每日验便一次。 第一次采便
9、应在服药前进行。 e. 病家和密切接触者防止服药: 可根据药敏实验情况和药物来源选择一种抗菌药物, 连服 2天。 常用抗菌药物及服用剂量参考附录 E。 7.3 疫点的解除: 在传染源隔离后, 疫点内所有人员验便连续两次阴性, 无续发病人或带菌者出现时可予以解除。 如无粪检条件, 自疫点解决后 5 日内无新病例出现时亦可解除。 7.4 疫区解决: 加强饮用水消毒和水源管理、 饮食卫生和集市贸易管理、 做好粪便管理、 改善环境卫生。 及时发现传染源, 按 7.2 规定解决, 防止传播。 附录 A 病原学检查 (补充件) A1 标本的收集 标本以病人粪便为主, 水样便采用 13mL, 成形便采用指甲
10、大小的粪量, 亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内 35cm 处采用。 A2 标本的送检 采得的标本应立即接种于培养基。 不能立即检查的, 要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入 Cary-Blair 二氏半固体保存培养基中。 标本与保存液比例约为 1 5。 A3 分离培养 A3.1 直接分离培养: 急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种在选择性培养基上。 目 前常用的强选择性培养基有庆大霉素琼脂、 4 号琼脂和TCBS 琼脂等。 A3.2 增菌后分离培养: 所有粪便标本都应接种碱性蛋白胨水培养基, 放 37增菌 68h 后,从菌膜下表层取一接种环培养物,
11、划线接种于强选择性琼脂平皿。 A3.3 鉴定: 自分离培养基上挑取可疑菌落与 01 群霍乱弧菌多价诊断血清及 0139 群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集实验。 玻片凝集用血清的效价一般应为 1 401 50。 如可疑菌落在血清中不久(一般在 10s 内)出现肉眼可见的明显凝集, 在生理盐水中不凝集者判为阳性。 可疑菌落较多时, 应挑选 5 个以上的菌落逐个进行玻片凝集检查, 必要时, 取原划线菌落边沿透明部分再做玻片凝集, 均为阴性时方可报告未检出 01 群及 0139 群霍乱弧菌。 对首发病例菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查。 附录 B 血清学检查 (参考件) B1 血清学检查有助于流行病
12、学追溯诊断, 检查抗体的成分为抗菌抗体。 为进行血清学诊断,需要采用病人的双份血清, 在发病第 13 天采第一份血清, 第 1520 天采第二份血清。 检查血清中抗菌抗体常用凝集实验和杀弧菌实验, 杀弧菌实验比凝集实验敏感。 B2 试管凝集实验: 用生理盐水对倍连续稀释待检血清, 每管含稀释血清 0.5mL。 将标准菌在营养琼脂上的 1618h培养物用 0.2福尔马林生理盐水制成约含 18 亿菌/mL(相称于细菌标准比浊管浓度)的悬液, 每稀释血清管加 0.5mL; 另将菌悬液加入 0.5mL 生理盐水中作对照。 摇匀, 置 37C3h 观测初步结果, 再放冰箱(4)或室温过夜, 观测最后结果
13、。 生理盐水对照不出现自然凝集, 能使菌凝于管底成伞状, 上清半透明者判为, 以能使菌呈凝集的血清最高稀释度判为血清凝集效价。 第二份血清效价比第一份血清增长 4 倍或以上者有诊断意义。 B3 杀弧菌抗体检测: 可采用改良微量法, 检测程序如下: a. 2, 3, 5氯化三苯四氮唑溶液(TTC)的配制: 用无菌蒸馏水配制 0.5(W/V)溶液, 加热溶解, 置灭菌棕色瓶中, 4保存备用。 b. 补体指示菌混悬液制备: 选取标准 01 群及 0139 群霍乱弧菌为指示菌, 分别连续在营养琼脂平板上分离 2 次, 选取光滑型菌落 23 个, 挑取小量接种于 5mL 营养肉汤中, 37培养 6h,
14、取 0.1mL 转种于 5mL 营养肉汤, 37培养 2h, 用分光光度计测定 492nm 吸光度(OD)值, 调整 OD 值至 0.1 为原液。 将原液作 1 50 稀释后与 1 10 补体等量混合, 即为补体指示菌混悬液。 c. 待检血清稀释: 于经洗涤解决、 无水乙醇浸泡 5min 和紫外灯照射灭菌 1h 的微量培养板或 4 10 孔聚苯乙烯塑料板用微量加液滴管每孔加入一滴(0.025mL)灭菌磷酸盐缓冲盐水PBS 或生理盐水, 再将待测灭活血清一滴(0.025mL)加入每排的第 1 孔, 自第 1 孔开始作连续对倍稀释至第 10 孔。 d. 加补体指示菌悬液: 于每孔稀释血清加入补体指
15、示菌悬液一滴, 加盖, 在微型振荡器上振荡 12min, 置 37水浴箱孵育 30min。 e. 加 TTC 营养肉汤: 每孔加入含 0.01TTC 的营养肉汤 0.15mL(2 大滴), 混匀后, 继续置37水浴箱孵育 4h。 f. 观测结果: 以孔内无颜色变化的血清最高稀释度为被检测标本的杀弧菌抗体滴度, 第二份血清效价比第一份血清升高 8 倍或以上者有诊断意义。 附录 C 01 群霍乱弧菌的鉴定和分型 (参考件) C1 血清分型 用普通琼脂或碱性琼脂培养基上的菌苔进行血清分型。 分型使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反映。 C1.1 在小川型单价血清凝集, 在稻叶型单价血清不凝集者为
16、小川型。 C1.2 在小川型单价血清不凝集, 在稻叶型单价血清凝集者为稻叶型。 C1.3 在小川型、 稻叶型单价血清均呈明显凝集者为彦岛型。 C2 试管凝集实验 用生理盐水自 1 20 开始对倍连续稀释 01 群霍乱多价血清, 每管含稀释血清 0.5mL。 将被检菌在营养琼脂的 1618h 培养物用 0.2福尔马林生理盐水制成每毫升约含 18 亿菌体(相称于细菌标准比浊管浓度)的悬液, 每稀释血清管加入 0.5mL; 另将菌悬液 0.5mL 加入 0.5mL生理盐水中作对照。 摇匀, 置 373h 观测初步结果。 再放 4或室温过夜, 观测最后结果。 生理盐水对照不出现自然凝集, 能使实验菌出
17、现凝集的血清最高稀释倍数为凝集滴度,凝集滴度达成或超过血清原效价一半的即可拟定为 01 群霍乱弧菌。 对一次流行的首批病例菌株和玻片凝集反映不典型的菌株应做本实验。 C3 古典型和埃尔托型的鉴别 C3.1 按表 C1 所列的实验鉴别 01 群霍乱弧菌的两个生物型。 表 C1 01 群霍乱弧菌两个生物型的鉴别 注: 括弧内为少数菌株结果。 C3.2 实验方法: a. 第组霍乱噬菌体裂解实验: 本项实验与噬菌体分型在同一平皿上进行, 方法见 C4.1.2。 b. 多粘菌素 B 敏感实验: 将 1.5普通琼脂加热溶化, 待冷却至 50左右, 按每毫升培养基加入 50 单位多粘菌素 B, 摇匀后倾注平
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