鲍芹低值部位乙醇提取物的抗氧化活性评价.docx
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1、 鲍芹低值部位乙醇提取物的抗氧化活性评价 尤常清 毕玉平 于金慧 马德源 黄超 尤升波摘要:为探索鲍芹低值部位高值化利用的途径及科学依据,本试验对外围叶柄和根中的物质进行提取,同时测定了该乙醇提取物中总酚和总黄酮含量与抗氧化指标总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力、亚铁离子螯合能力、总还原力,并对各测定指标的相关性进行分析。结果表明:叶柄提取物中总酚含量为92.69 mg GAE/g,总黄酮含量为2.60 mg RE/g;根部提取物总酚含量为145.41 mg GAE/g,总黄酮含量为5.91 mg RE/g。在同等质量浓度条件孵育150 min后,鲍芹叶柄和根提取物中总抗氧化能力可达到BHT
2、的65%以上;二者DPPH自由基清除能力可达到BHT的57.1%以上;二者亚铁离子螯合能力可达EDTA的74.3%84.0%;二者的还原力较小,仅能达到BHT的7%10%。相关性分析表明抗氧化活性与总酚和总黄酮含量极显著正相关。综合分析可知,鲍芹低值部位具有较好的抗氧化能力。关键词:鲍芹;抗氧化能力;总酚;总黄酮:S636.301文献标识号:A:1001-4942(2019)02-0033-07Assessment on Antioxidant Activity of Alcohol Extract fromLow-Value Parts of Apium graveolens Bao Qin
3、You ChangqingBi YupingYu JinhuiMa DeyuanHuang ChaoYou Shengbo2(1. College of Life Sciences, Shihezi University, Shihezi 832003, China;2. Biotechnology Research Center, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China)AbstractIn order to find the methods and scientific bases for high-va
4、lue utilization of low-value parts of Apium graveolens cultivar Bao Qin, the outer petiole and root were extracted by alcohol, and then the contents of total polyphenols and total flavonoids in the extract were determined. The total antioxidant activity, DPPH radical scavenging, ferrous ion chelatin
5、g ability and reducing power were used to evaluate its antioxidant activity, and the correlation between the content of polyphenols and flavonoids and the antioxidant activity was also analyzed. The results showed that the content of total polyphenols and total flavonoids was 92.69 mg GAE/g and 2.60
6、 mg RE/g in the outer petiole respectively and 145.41 mg GAE/g and 5.91 mg RE/g in roots respectively. The extracts of outer petiole and root of Bao Qin had better antioxidant activity. Under the same concentration, the total antioxidant activity of the extract of the two parts was up to 65% of the
7、BHT; the DPPH radical scavenging capacity was up to 57.1% of the BHT; the ferrous ion chelating ability was up to 74.3%84.0% of the EDTA; and the reduce capacity was weak and only 7%10% of the BHT. The content of total flavonoids and polyphenols had significant correlations with the indicators of an
8、tioxidant activity. In conclusion, the low-value parts of Bao Qin such as the outer petiole and roots had higher antioxidant ability.KeywordsBao Qin; Antioxidant activity; Total polyphenols; Total flavones自由基是一種普遍存在于生物体内的游离基,按其化学结构可分为半醌类自由基、氧中心自由基和其它类型自由基。随着对自由基与疾病关系认知的深入,Ahmadinejad等1发现自由基与多种疾病的发生发
9、展密切相关,它会造成生物膜的脂质过氧化损伤,引起酶、氨基酸、蛋白质的氧化破坏,对内脏器官、免疫系统的形态功能产生影响,进而引起机体疾病1。抗氧化成分能够清除机体过量自由基,因此,从天然生物中寻找植物源抗氧化剂成为现代保健、医药等行业的热点课题之一2-5。目前,科研人员已在蔬果、作物、中草药3-5等植物的抗氧化活性成分方面开展大量研究。芹菜作為药食同源的一种蔬菜,具有很好的保健价值。研究表明,芹菜叶内黄酮含量最高,根中最低,各部位均具有较好的抗氧化能力,且与总黄酮含量显著正相关6,7。鲍芹因其色泽翠绿、茎柄充实肥嫩、入口香脆微甘、芹芯生食无丝无渣、芹香浓郁等特点倍受消费者青睐,已被列为山东省地理
10、标志产品。但其绝大部分只作为鲜蔬供应,仅心部茎秆市场价值较高,外围茎秆和根部的附加值低,综合利用不够充分,甚至废弃,这不仅影响农民收益,也污染当地环境。因此,本试验以鲍芹外围叶柄和根为研究对象,对其总黄酮、总酚及抗氧化能力进行评价,以期寻找其高值化利用的科学依据,并为提升芹菜相关产业的发展空间和拉长产业链提供思路和借鉴。1材料与方法1.1试验材料供试材料为鲍芹外围叶柄与根(均为废弃部分),于2016年12月份采自山东省章丘市辛寨乡鲍家村。样品经干燥、粉碎、过筛处理后置阴凉干燥处储存备用。2017年512月份完成后续试验。1.2试剂与仪器主要试剂为乙醇、亚硝酸钠、三氯化铝、氢氧化钠、硫酸、磷酸钠
11、、钼酸铵、氯化亚铁、EDTA、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁,均为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司;福林酚(Folin-Ciocalteu)、没食子酸和芦丁购自上海阿拉丁有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)和菲洛嗪购自Sigma-Aldrich。仪器设备有电子天平(JA5003,上海舜宇恒平科学仪器有限公司)、超声清洗仪(SB25-12 DTD,宁波新芝生物技术有限公司)、水浴锅(DK-S24,上海森信实验仪器有限公司)、纯水仪FYY(40-120)01/02,青岛富勒姆科技有限公司、旋转蒸发仪(RE100-P
12、ro,北京大龙)、干燥箱(DHG-9030A,浙江赛德仪器设备有限公司)、紫外分光光度计(756PC,上海舜宇恒平科学仪器有限公司)。1.3试验方法1.3.1提取物的制备将鲍芹外围叶柄和根切成碎块并于50烘干,用粉碎机打碎,过69 m筛得叶柄与根粉末样品。分别取粉末25 g各3份,于具塞磨口三角烧瓶中加入70%乙醇250 mL,采用超声辅助提取的方式,浸泡30 min后超声萃取两次,每次15 min。过滤得上清液,固体物料继续按照相同方式提取两次,合并三次上清液。利用旋转蒸发仪于60将上清液旋干,并使用干燥箱低温烘至恒重。记录提取物重量,计算提取得率。提取物干燥保存于-20备用。使用前提取物用
13、70%乙醇溶液配制成质量浓度为20 mg/mL母液,再稀释到所需质量浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)的样品溶液。1.3.2总酚与总黄酮含量的测定总酚含量测定采用Folin-Ciocalteu方法8,并略加改动。取0.5 mL样品溶液,加入0.5 mL蒸馏水和2 mL Folin-Ciocalteu试剂(稀释10倍,现用现配),混匀后反应5 min。加入7.5%的碳酸钠溶液(w/v)2.0 mL,黑暗条件下25室温反应30 min。于765 nm测定吸光度值,以没食子酸(galic acid equivalent, GAE)为标准品做标准曲线,提取物总酚含量以
14、mg GAE/g表示。总黄酮含量测定参考文献9的方法。将0.5 mL样品溶液加入到4.5 mL蒸馏水中, 然后加入5%的亚硝酸钠溶液(w/v)1 mL,充分混匀后静置5 min,加入10%的三氯化铝(w/v)1 mL,混匀后25水浴6 min,加入1 mol/L氢氧化钠溶液10 mL,最后补足蒸馏水至25 mL,充分混匀放置15 min。于510 nm测定吸光度值,以芦丁(rutin equivalent, RE)为标准品做标准曲线,不同提取物总黄酮含量以mg RE/g表示。1.3.3抗氧化能力评价采用钼酸铵法8对样品的总抗氧化能力进行评价。分别取1.0 mL不同质量浓度梯度(0.25、0.5
15、0、1.00、2.00、4.00 mg/mL)的鲍芹根和外围叶柄提取物溶液,置10 mL试管中,加入3.0 mL反应液(由0.6 mol/L硫酸、28 mmol/L磷酸钠和4 mmol/L钼酸铵组成),充分混匀后于95水浴锅中分别加热30、60、90、120、150 min,冷却至室温,以蒸馏水为空白,于695 nm处测定其吸光度。分别选择0.25、0.50 mg/mL BHT作为对照。DPPH自由基清除能力测定参考文献10 的方法,并略作改动。取1.0 mL不同质量浓度梯度(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)的鲍芹根和外围叶柄提取物溶液,置5 mL离心管中,加入0
16、.008 mmol/L的DPPH溶液3.0 mL,室温避光反应30 min,以无水乙醇为空白,于517 nm处测定吸光度。分别选择0.25、0.50 mg/mL BHT作为对照。按下列公式计算DPPH自由基清除率:DPPH自由基清除率(%)=A0-(As-Ac)/A0100。式中,A0为1.0 mL蒸馏水+3.0 mL DPPH溶液的吸光度;As为1.0 mL样品溶液+3.0 mL DPPH溶液的吸光度;Ac为1.0 mL样品溶液+3.0 mL无水乙醇的吸光度。亚铁离子螯合能力测定参考文献11的方法。取1.0 mL不同质量浓度梯度(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)
17、的鲍芹根和外围叶柄提取物溶液,加入3.7 mL蒸馏水混匀后,再加入2 mmol/L FeCl2溶液0.1 mL和5 mmol/L的菲洛嗪溶液0.2 mL,于25水浴静置10 min,以蒸馏水为空白,于562 nm处测定吸光度。选择0.25、0.50 mg/mL EDTA作为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下:Fe2+螯合率=1-(A1-A2)/A0100%。式中,A0为1 mL蒸餾水代替反应体系中样品溶液后的吸光度;A1为样品溶液反应后的吸光度;A2为0.2 mL的蒸馏水代替反应体系中菲洛嗪溶液后的吸光度。总还原力测定参考文献12的方法。取1.0 mL不同质量浓度梯度(0.25、0.
18、50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)的鲍芹根和外围叶柄提取物溶液,加入0.2 mL/L的磷酸盐缓冲液(pH=6.6)2.5 mL和1%的铁氰化钾溶液(w/v)2.5 mL,混匀后将混合物于50水浴保温20 min,然后加入10%三氯乙酸溶液(w/v)2.5 mL,混合溶液于3 000 r/min离心10 min,准确吸取上清液2.5 mL,加入2.5 mL蒸馏水和0.1%三氯化铁溶液(w/v)0.5 mL。以蒸馏水为空白,于700 nm处测定吸光度,以0.25、0.50 mg/mL BHT作为对照。1.4数据处理本试验所得数据均以平均值标准误表示,各处理均进行3次重复。采用SPSS
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