浅论Survivin、caspase.docx
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1、浅论Survivin、caspase【摘要】 目的探讨大肠癌伴血吸虫病中Survivin 、Caspase-3、AKT1蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化技术检测40例大肠癌伴血吸虫病中Survivin 、Caspase-3、AKT1蛋白的表达,并与35例不伴血吸虫病的大肠癌及40 例正常结肠粘膜作对照。结果 AKT1 在大肠腺癌中的表达与正常大肠粘膜相比有显着意义(),在大肠腺癌中Survivin的阳性率与正常大肠粘膜相比,差异具有显着性意义(),caspase-3在大肠腺癌中的阳性表达率与对照组相比差异无统计学意义()。AKT1 在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中阳性表达率分别为%和
2、%,差异无统计学意义()。Survivin在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中表达率分别为%,%,差异无统计学意义()。caspase-3在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中表达率分别为%,%;差异无统计学意义(P ) 。结论 在大肠癌变过程中起重要作用的三种基因(AKT1、Survivin、caspase)的改变与血吸虫病无明确关系,因此血吸虫病与大肠癌之间的关系还需进一步探讨。【关键词】 大肠癌伴血吸虫病;凋亡抑制因子;细胞周期调控目前对大肠癌的发生、发展已进行多方面的研究,但大肠癌伴血吸虫病的相关研究报道不多。AKT1是细胞生存通路PI3K/AKT的关键分子,其持续活化与组织增殖密切相关
3、, Survivin 是迄今发现最强的凋亡抑制因子,具有抑制凋亡效应蛋白酶Caspase 活性、参与细胞周期调控及调节细胞有丝分裂等多种生物学作用。细胞凋亡的异常与肿瘤发生发展密切相关,而Caspase-3 在凋亡过程中起着重要的作用。为此,我们应用免疫组织化学方法检测大肠癌伴血吸虫病组织中AKT1、Surviving 、Caspase-3蛋白的表达,以探讨血吸虫感染与大肠癌发生的关系。1 材料与方法研究对象 标本取自我院病理科2002年至2005年期间手术大肠腺癌标本75例,男性39例,女性36例,年龄3679岁,平均48岁;年龄60岁者36例,60岁者39例。肿瘤病理分级:高分化腺癌28例
4、、中分化腺癌35例、低分化腺癌12例。其中40例大肠腺癌中见钙化血吸虫卵沉积。采用免疫组化技术检测40例大肠癌伴血吸虫病组织中Survivin 、Caspase-3、AKT1蛋白的表达水平,并与35例不伴血吸虫病的大肠癌及40 例正常结肠粘膜组织作对照(大肠粘膜伴/不伴血吸虫病各20例)。研究方法 标本均经10%的甲醛固定,常规石蜡包埋,切片厚45um,载玻片经多聚赖氨酸处理,防止脱片。微波抗原修复。鼠抗人AKT1免疫组化单克隆抗体,兔抗人Survivin免疫组化多克隆抗体,鼠抗人caspase-3免疫组化单克隆抗体兔抗人,免疫组化试剂盒、DAB显色剂试剂盒均购自福州迈新公司。染色步骤按试剂盒
5、说明书操作。PBS冲洗,DAB显色,苏木素复染,常规脱水透明,树胶封片。以PBS代替一抗作阴性对照。光镜下任取4个高倍视野进行细胞计数,至少计数200个细胞,AKT1阳性着色定位于细胞的胞质和(或)胞膜,呈淡黄棕黄色细颗粒状,局灶或弥漫性分布。Survivin阳性着色主要定位于细胞的胞质和胞核上,呈淡黄棕黄色细颗粒状,阳性细胞呈局灶或弥漫性分布。caspase-3的阳性着色在细胞的胞质中,呈淡黄棕黄色细颗粒状,局灶或弥漫性分布。采用半定量积分法1-3判定免疫组化染色结果:计算阳性细胞百分数并赋予分值, 5%为0分,6%25%为1分,26%50%为2分,51%75%为3分,75%为4分;观察着色
6、强度并赋予分值,无着色为0分,浅黄着色为1分,黄色为2分,棕黄着色为3分,两者相乘,0分为(-),14分为(+),58分为(+),912分为(+)。统计学方法 采用统计学软件SPSS 进行处理。AKT1、Survivin、caspase-3在大肠腺癌与对照组间的表达差异用四格表的2检验,Spearman秩相关进行AKT1、Survivin、caspase-3间的相关性分析, P =为检验水准,差异有显着性意义,差异有非常显着性意义。2 结 果AKT1在大肠腺癌中的表达AKT1 在正常大肠粘膜不伴血吸虫病、正常大肠粘膜伴血吸虫病、大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率依次为15%,10
7、%,%和%;其在大肠腺癌与正常大肠粘膜中的表达率相比,差异有非常显着性统计学意义(),但在大肠腺癌不伴血吸虫病与大肠腺癌伴血吸虫病相比,其表达率差异无统计学意义()( 见表1)。Survivin在大肠腺癌中的表达 Survivin在正常大肠粘膜不伴血吸虫病、正常大肠粘膜伴血吸虫病不表达,在大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率分别为%,%;其在大肠腺癌与正常大肠粘膜中的表达率相比,差异有非常显着性统计学意义(),但在大肠腺癌不伴血吸虫病与大肠腺癌伴血吸虫病相比,其表达率差异无统计学意义(),见表1。caspase-3在大肠腺癌中的表达 caspase-3在正常大肠粘膜不伴血吸虫病、正
8、常大肠粘膜伴血吸虫病、大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率分别为%,%,%、%,大肠腺癌与正常大肠粘膜中的阳性表达率相比明显降低,在伴血吸虫病组降低个百分点,在不伴血吸虫病组降低个百分点,但组间差异无统计学意义();大肠腺癌不伴血吸虫病与大肠腺癌伴血吸虫病相比,其阳性表达率差异无统计学意义(P ) ,见表1。大肠腺癌中AKT1、Survivin和caspase-3表达的相关分析 在AKT1表达阳性的63例患者中,有61例Survivin表达阳性,在12例AKT1表达阴性的患者中,有5例Survivin表达阴性,Spearman秩相关分析显示,AKT1与Survivin的表达存在显着
9、正相关(r=,)。Spearman秩相关分析结果显示Survivin与caspase-3的表达无相关性(),caspase-3与AKT1的表达无相关性()。(见表24)血吸虫病对大肠腺癌AKT1、Survivin和caspase-3表达的影响及其与病理特征的关系AKT1 在大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中阳性表达率分别为%和%,差异无统计学意义()( 见表1)。Survivin在大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率分别为%,%,阳性表达率差异无统计学意义()( 见表1)。caspase-3大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率分别为%,%;阳性表达率差异无统计学
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