浅论PLC-delta1基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达和临床意义.docx
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1、浅论PLC delta1基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达和临床意义【摘要】 【目的】 本研究旨在探讨PLC delta1 在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义。【方法】 采用免疫组化方法,检测PLC delta1在223例上皮性卵巢肿瘤(183例卵巢癌和对照组40例交界性卵巢肿瘤)组织芯片中的表达;结合患者的临床资料,分析PLC delta1的表达与上皮性卵巢癌的关系。【结果】 在有效检测的197例上皮性卵巢肿瘤标本中,大多数(25例,%)交界性肿瘤呈现正常表达,而在卵巢癌中,多数(91例%)肿瘤出现PLC delta1的过度表达,两者存在显着差异(P1);而且PLC delta1在卵巢癌中表达与
2、肿瘤的临床分期、患者年龄有显着的相关性(P1)。【结论】 PLC delta1在卵巢癌组织中的过度表达与肿瘤的恶性进展密切相关,可能是未来检测卵巢癌的一种有价值的新肿瘤标志物。【关键词】 卵巢肿瘤; PLC delta1; 癌基因Abstract: 【Objective】 To investigate the expression of PLC delta 1 in epithelial ovarian tumor and its clinical significance. 【Method】 Examination of PLC delta 1 expression in the tissu
3、e microarray among 223 cases of epithelial ovarian tumor (including 183 cases of ovarian cancer and the control group, 40 of borderline ovarian tumor), using immunohistochemistry method. Subsequent analysis was conducted to reveal the relationship between PLC delta 1 expression and the occurrence of
4、 epithelial ovarian cancer. 【Results】 Among 197 valid samples, most of the borderline tumor cases (25 samples, %) indicated normal expression of PLC delta 1; most of the ovarian cancer cases (91 samples, %), on the other hand, indicated overexpression of PLC delta 1. The study also found a significa
5、nt difference in PLC delta 1 expression (P1) between the two types of cases. Also, there is a significant correlation between the PLC delta 1 expression in the ovarian cancer cases and their clinical stages, as well as the age of the patients (P1). 【Conclusion】 The overexpression of PLC delta 1 in t
6、he ovarian cancer tissue is closely related to tumor malignancy, suggesting that PLC delta 1 could be another effective marker for the diagnosis of ovarian cancer.卵巢癌是女性生殖器官常见恶性肿瘤,发病年龄以50岁左右为高峰。由于卵巢肿瘤发病隐匿,早期诊断困难,大多数(约70%)卵巢癌患者在初诊时已是浸润晚期(FIGO或期)的肿瘤,其5年生存率不超过30%,死亡率居妇科恶性肿瘤的首位1。在我国,卵巢癌的发病呈上升趋势,在一些大城市如上
7、海今年的卵巢癌发病率达/10万,成为危害女性生命健康的主要“杀手”之一。众所周知,卵巢癌的发生发展是一个多基因改变多步骤的复杂过程。因此,卵巢癌密切相关基因的分子致癌机制及其临床肿瘤学意义的深入研究,将对加强和促进卵巢癌的防治工作提供实验研究的基础。目前,越来越多的新基因如RUNX1、TACC1、DeltaTAp73、clusterin、THY1及YKL-40蛋白等异常已被证实与卵巢癌的发生发展和预后密切相关4-6。人类PLC delta1基因定位于染色体3p22,包括16个外显子,编码756个氨基酸的蛋白质。PLC delta1 是哺乳动物中磷酸肌醇PLC大家庭中的一员。PLC delta1
8、的表达水平、调节机理和生物学特征已经被广泛研究。但是,该基因在癌症发生、发展中的作用研究很少。国外有学者研究发现,PLC delta1与食管鳞癌和结肠癌的恶性进展密切相关。目前,国内外暂时还没有关于PLC delta1在上皮性卵巢肿瘤中表达的相关研究。 因此,本研究旨在初步探讨PLC delta1 在上皮性卵巢肿瘤中的表达情况及其临床意义。1 材料与方法材 料选取1994年至2003年间在中山大学附属第一医院妇产科接受手术治疗的上皮性卵巢肿瘤患者223例(术前均未行放化疗或生物治疗),收集其临床病理资料。其中卵巢癌患者183例,交界性卵巢肿瘤患者40例。本组上皮性卵巢癌患者的中位年龄为岁,其中
9、浆液性腺癌120例、粘液性腺癌23例、其它类型肿瘤40例;在肿瘤的Silverberg氏分级中,36例是G1级卵巢癌、104例为G2级卵巢癌、43例为G3级卵巢癌。临床分期按国际FIGO分期标准:期35例,期21例,期101例,期26例。所有组织标本均再次切片HE染色证实诊断。同时选取20例非卵巢疾病(如子宫肿瘤等)手术切除的正常卵巢组织作为实验对照组;标本经40 g/L多聚甲醛溶液固定,常规石蜡包埋。主要仪器和试剂仪器:组织芯片制作机为美国NIH国家人类基因研究所肿瘤遗传实验室制造。石蜡切片机购自德国Leica公司。显微镜及显微摄像装置为日本Olympus公司产品。试剂:PLC delta1
10、的多克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology, Inc组织芯片的制作及结果判断首先在显微镜下对“供体”蜡块的切片选出典型病变部位,然后从“供体”蜡块标本中取出所需组织(每例肿瘤选定2个不同取样位点, 取样确保组织的代表性),插入“受体”蜡块的洞内,排列成微组织阵列,制成组织芯片蜡块。用切片机对组织芯片蜡块进行连续切片,厚约4 m,选取石蜡切片作HE染色,检查每一点是否与设计阵列中的组织一致。组织芯片石蜡切片作HE染色后,对组织芯片阵列中的每一点在显微镜下进行观察与核对,为保证实验结果的可靠性组织芯片中若存在以下情况之一即予剔出:组织定位与取材的偏差导致无效组织过多,有效细胞
11、数过少,缺乏代表性;组织芯片脱片,即制片过程中组织芯的移位或脱落;记录被剔除的组织芯所在阵列,在下一步实验将不列入观察统计。免疫组织化学染色采用免疫组化染色二步法。首先,将制作成的组织芯片脱蜡至水,然后放入3 mL/L H2O2甲醇液中20 min(室温)。接着蒸馏水洗后,放入抗原修复液(pH )内微波修复20 min。pHPBS缓冲液洗3次,滴加正常血清37 ,放置20 min;甩去多余血清后,将其放入PLC delta1的多克隆抗体中,4 过夜。pHPBS缓冲液洗3次后,放入1:200的二抗液体中,37 下放置30 min。pHPBS缓冲液洗3次,DAB显色5 min,水洗后,苏木素淡染,
12、蓝化,脱水,透明,封固 (图1)。结果观察采用半定量的9分法:按染色的强度,阴性染色记为0分,弱阳性染色1 分,中度阳性 2分,强阳性3分。按阳性细胞数, 400倍显微镜下每例观察5个视野,每个视野100个细胞,计数染色阳性细胞数,当阳性细胞数少于1%时,为0分;1% 30%为1分;31% 70%为2分;超过70%为3分。将两者的积分相乘(即0 9分),记录染色结果。统计学方法采用SPSS 统计软件进行统计处理。计数资料采用2检验。所有检验结果以P为有统计学意义。2 结 果在本组223例上皮性卵巢肿瘤组织中,有166例卵巢癌标本和31例交界性卵巢肿瘤标本成功地进行了PLC delta1免疫组化
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