SOP-P-IF-003-03-发酵岗位标准操作规程.doc
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7、。2.范围实用与GM-CSF工程菌从二级种子培养液上罐、发酵、离心收菌的操作。3.职责发酵岗位操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程实施负责。4.规程4.1.生产前的准备:4.4.1.根据生产指令开出领料单。领取时,核对物料名称、数量、批号、有效期等,然后将其送到传递窗。 4.1.2.岗位生产操作人员按进出十万级洁净区更衣标准操作规程进行更衣,然后进入岗位。4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性,设备、容器、工具、室内卫生是否有清洁合格证,清洁合格证是否在有效期内,如不合格按其清洁标准操作规程重新清洁。4.2操作方法4.2.1培养基配制 LB培养基按比例配制(100L) 蛋白
8、胨 16g/L 酵母粉 10g/L 氯化钠 5g/L4.2.3 实罐灭菌4.2.3.1 按BI0SATA-D型发酵罐标准操作规程将配制好的培养基加入到发酵罐中,加入5ml消泡剂,121、30min灭菌。 设定搅拌速度为150rpm左右,保证培养基加热均匀。 4.2.3.2灭菌时当温度升至 121时,打开DO电极电源,设定DO电极零点。当灭菌温度降至30时,设定DO电极百点。4.3上罐4.3.1 调节通气量到15L/min,搅拌速度为150rpm,稳定3分钟后设定DO电极 100%。4.3.2 调节通气量,使罐内保持正压。4.3.3 通过接种管道从种子管向发酵罐中打入二级种子液,整个过程注意无菌
9、操作。4.3.4 取样测OD600值。4.4培养4.4.1 上罐后,设定通气量为10L/min、搅拌速度为150rpm、温度为30,开始 培养。4.4.2 培养过程中,注意DO值和pH值的变化,调节通气量和搅拌速度使DO值为40%。4.4.3 每隔1小时取样测量OD600值。取样前后取样管用纯蒸汽流通灭菌10分钟。 做好生产记录。4.4.4 生产过程中,注意及时用蘸有0.1%新洁尔灭溶液的抹布擦去洒落在不锈钢 罐体表面及地面的液体,维持发酵罐清洁和生产车间的整洁。4.4.5 诱导4.4.5.1培养8-10小时后,OD600为2左右时,将温度在3分钟内升高至42,继续培养4小时。4.4.5.2
10、培养过程中,注意DO值和pH值的变化,调节通气量和搅拌速度使DO值为35%。4.4.6 收菌4.4.6.1 诱导培养4小时后,OD600值为5-6,取1ml菌液检测。4.4.6.2 降低搅拌速度为120rpm、通气量为10L/min。4.4.6.3 连接发酵罐和离心机之间的软管。4.4.6.4 按Z61型管式离心机标准操作规程安装离心机,确认安装正确后,试启动离心机,确认无异常声音。4.4.6.5 待转速达到恒定后,打开发酵罐下料阀,发酵液在压力的推动下进入离心机,离心收菌。4.4.6.6 调节下料阀,控制发酵液的流出速度,使上清液的OD6000.1。4.4.6.7 收菌完毕后,上清液重新泵入
11、发酵罐中,经过121灭菌30分钟后排放。4.4.6.8 菌体离心后装入灭菌后的不锈刚容器内称重,-20冻存。4.5.清场:4.5.1.每次操作完成后,按照清场标准操作规程和发酵罐清洁标准操作规程进行清场、清洁。 4.5.2.清场结束后填写清场及清洁记录,并由QA检查员检查确认清场合格后,贴挂清洁合格标志。4.6物料平衡的计算按物料平衡管理规程计算。4.7注意事项4.7.1发酵罐长期不用时,应卸下电极,将pH、DO电极放入电极液中进行保养。 同时对罐体进行彻底的清洗,加入约30升去离子水,灭菌一次,将水放掉。4.7.2发酵罐更换菌种发酵时,应对罐体进行彻底的清洗,加入约30升去离子水, 灭菌一次
12、,将水放掉。进行新菌种发酵。4.7.3使用过程中,注意检查pH、DO电极平衡液的情况,按照电极说明书及时 补充电极平衡液。4.7.4.岗位操作人员在生产操作过程中发现异常情况按紧急情况处理管理制度处理。下面是古文鉴赏,不需要的朋友可以下载后编辑删除!谢谢!九歌湘君屈原朗诵:路英君不行兮夷犹,蹇谁留兮中洲。美要眇兮宜修,沛吾乘兮桂舟。令沅湘兮无波,使江水兮安流。望夫君兮未来,吹参差兮谁思。驾飞龙兮北征,邅吾道兮洞庭。薜荔柏兮蕙绸,荪桡兮兰旌。望涔阳兮极浦,横大江兮扬灵。扬灵兮未极,女婵媛兮为余太息。横流涕兮潺湲,隐思君兮陫侧。桂棹兮兰枻,斫冰兮积雪。采薜荔兮水中,搴芙蓉兮木末。心不同兮媒劳,恩不
13、甚兮轻绝。石濑兮浅浅,飞龙兮翩翩。交不忠兮怨长,期不信兮告余以不闲。朝骋骛兮江皋,夕弭节兮北渚。她含着笑,切着冰屑悉索的萝卜,她含着笑,用手掏着猪吃的麦糟,她含着笑,扇着炖肉的炉子的火,她含着笑,背了团箕到广场上去晒好那些大豆和小麦,大堰河,为了生活,在她流尽了她的乳液之后,她就用抱过我的两臂,劳动了。大堰河,深爱着她的乳儿;在年节里,为了他,忙着切那冬米的糖,为了他,常悄悄地走到村边的她的家里去,为了他,走到她的身边叫一声“妈”,大堰河,把他画的大红大绿的关云长贴在灶边的墙上,大堰河,会对她的邻居夸口赞美她的乳儿;大堰河曾做了一个不能对人说的梦:在梦里,她吃着她的乳儿的婚酒,坐在辉煌的结彩的
14、堂上,而她的娇美的媳妇亲切的叫她“婆婆”大堰河,深爱她的乳儿!大堰河,在她的梦没有做醒的时候已死了。她死时,乳儿不在她的旁侧,她死时,平时打骂她的丈夫也为她流泪,五个儿子,个个哭得很悲,她死时,轻轻地呼着她的乳儿的名字,大堰河,已死了,她死时,乳儿不在她的旁侧。大堰河,含泪的去了!同着四十几年的人世生活的凌侮,同着数不尽的奴隶的凄苦,同着四块钱的棺材和几束稻草,同着几尺长方的埋棺材的土地,同着一手把的纸钱的灰,大堰河,她含泪的去了。这是大堰河所不知道的:她的醉酒的丈夫已死去,大儿做了土匪,第二个死在炮火的烟里,第三,第四,第五而我,我是在写着给予这不公道的世界的咒语。当我经了长长的飘泊回到故土
15、时,在山腰里,田野上,兄弟们碰见时,是比六七年鸟次兮屋上,水周兮堂下。捐余玦兮江中,遗余佩兮澧浦。采芳洲兮杜若,将以遗兮下女。时不可兮再得,聊逍遥兮容与。注释湘君:湘水之神,男性。一说即巡视南方时死于苍梧的舜。君:指湘君。夷犹:迟疑不决。蹇(jian3简):发语词。洲:水中陆地。要眇(miao3秒):美好的样子。宜修:恰到好处的修饰。沛:水大而急。桂舟:桂木制成的船。沅湘:沅水和湘水,都在湖南。无波:不起波浪。夫:语助词。参差:高低错落不齐,此指排箫,相传为舜所造。飞龙:雕有龙形的船只。北征:北行。邅(zhan1沾):转变。洞庭:洞庭湖。薜荔:蔓生香草。柏(bo2伯):通“箔”,帘子。蕙:香草
16、名。绸:帷帐。荪:香草,即石菖蒲。桡(rao2饶):短桨。兰:兰草:旌:旗杆顶上的饰物。涔(cen2岑)阳:在涔水北岸,洞庭湖西北。极浦:遥远的水边。横:横渡。扬灵:显扬精诚。一说即扬舲,扬帆前进。极:至,到达。女:侍女。婵媛:眷念多情的样子。横:横溢。潺湲(yuan2援):缓慢流动的样子。陫(pei2培)侧:即“悱恻”,内心悲痛的样子。(19)櫂(zhao4棹):同“棹”,长桨。枻(yi4弈):短桨。(20)斲(zhuo2琢):砍。(21)搴(qian1千):拔取。芙蓉:荷花。木末:树梢。(22)媒:媒人。劳:徒劳。(23)甚:深厚。轻绝:轻易断绝。(24)石濑:石上急流。浅(jian1间)
17、浅:水流湍急的样子。(25)翩翩:轻盈快疾的样子。(26)交:交往。(27)期:相约。不闲:没有空闲。(28)鼂(zhao1招):同“朝”,早晨。骋骛(wu4务):急行。皋:水旁高地。(29)弭(mi3米):停止。节:策,马鞭。渚:水边。(30)次:止息。(31)周:周流。(32)捐:抛弃。玦(jue1决):环形玉佩。(33)遗(yi2仪):留下。佩:佩饰。醴(li3里):澧水,在湖南,流入洞庭湖。(34)芳洲:水中的芳草地。杜若:香草名。(35)遗(wei4味):赠予。下女:指身边侍女。(36)聊:暂且。容与:舒缓放松的样子。译文君不行兮夷犹,神君迟疑犹豫徘徊不肯向前,蹇谁留兮中洲?你为谁滞
18、留在水中的岛上呢?美要眇兮宜修,我容颜妙丽装饰也恰倒好处,沛吾乘兮桂舟。急速地乘坐上我那桂木小舟。令沅、湘兮无波,叫沅湘之水柔媚得波澜不生,使江水兮安流。让长江之水平静地缓缓前行。望夫君兮未来,盼望着你啊你为何还不到来,吹参差兮谁思!吹起洞箫寄托我的思念之情!驾飞龙兮北征,用飞龙驾舟急速地向北行驶,邅吾道兮洞庭。改变我的道路引舟直达洞庭。薜荔柏兮蕙绸,用薜荔做门帘用蕙草做床帐,荪桡兮兰旌。以香荪装饰船桨以兰草为旗。望涔阳兮极浦,遥望涔阳啊在那辽远的水边,横大江兮扬灵。大江横陈面前彰显你的威灵。扬灵兮未极,难道你的威灵彰显还没终止?女婵媛兮为余太息!我心中为你发出长长的叹息。横流涕兮潺湲,眼中的
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