高中生物检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

第一章第一章 细胞分子组成细胞分子组成第三节第三节 有机化合物及生物大分子有机化合物及生物大分子试验试验1：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质第1页试验：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质试验：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质试验原理：试验原理：一些化学试剂能够使生物组织中相关有一些化学试剂能够使生物组织中相关有机化合物产生特定颜色反应。机化合物产生特定颜色反应。化学试剂化学试剂+有机化合物有机化合物特定颜色特定颜色还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀脂肪脂肪+苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色淀粉淀粉+碘碘蓝色蓝色水浴加热水浴加热第2页斐林试剂与双缩脲试剂比较斐林试剂与双缩脲试剂比较斐林斐林试剂试剂双双缩脲试剂缩脲试剂甲液甲液乙液乙液A液液B液液成份0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.05 g/mL CuSO4溶液溶液0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.01 g/mL CuSO4溶液溶液判定物质可溶性可溶性还还原糖原糖蛋白蛋白质质或多或多肽肽添加次序甲乙两液等量混匀后马上使用（现配现用）先加入先加入A液液1 mL，摇摇匀，匀，再加入再加入B液液4滴（不能滴（不能过过量）量），摇摇匀匀反反应应条件条件5065 水浴加水浴加热热不需加不需加热热，摇摇匀即可匀即可反反应应现现象象样样液液变砖红变砖红色沉淀色沉淀样样液液变变紫色紫色斐林试剂用是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴斐林试剂用是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴加热。双缩脲试剂用是加热。双缩脲试剂用是A液和液和B液，先加液，先加A液，后滴液，后滴B液，液，不用水浴加热。不用水浴加热。第3页比较项目比较项目斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂不不同同点点使用方法使用方法甲液和乙液混合均匀后方可甲液和乙液混合均匀后方可使用，且使用，且现配现用现配现用使用时先加使用时先加A液再加液再加B液液反应条件反应条件需需50-65水浴加热水浴加热不需加热即可反应不需加热即可反应反应原理反应原理还原糖中醛基被Cu（OH）2 悬浊液氧化,Cu（OH）2被还原为砖红色Cu2O沉淀含有两个以上肽键化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成紫色络合物颜色颜色砖红色砖红色紫色紫色浓度浓度乙液乙液CuSO4浓度为浓度为0.05 g/mLB液液CuSO4浓度为浓度为0.01g/mL相同点相同点 都含有NaOH、CuSO4两种成份，且所用NaOH浓度都是0.1g/mL第4页双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键化合物与碱性硫酸铜双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键化合物与碱性硫酸铜作用，生成蓝紫色复合物作用，生成蓝紫色复合物第5页斐林试剂与双缩脲试剂都由斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和和CuSO4组成，但二者有以组成，但二者有以下三点不一样：下三点不一样：溶液浓度不一样。溶液浓度不一样。斐林试剂中斐林试剂中NaOH浓度为浓度为0.1g/mL，CuSO4浓度为浓度为0.05g/mL；双缩脲试剂中；双缩脲试剂中NaOH浓度为浓度为0.1g/mL，CuSO4浓度为浓度为0.01g/mL。使用原理不一样。使用原理不一样。斐林试剂实质是新配制斐林试剂实质是新配制Cu(OH)2溶液；双溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下缩脲试剂实质是在碱性环境下Cu2。使用方法不一样。使用方法不一样。使用斐林试剂时，先把使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液混合，然后马上使用。使用双缩脲试剂时，先加入溶液混合，然后马上使用。使用双缩脲试剂时，先加入NaOH溶液，然后再加入溶液，然后再加入CuSO4溶液溶液。第6页第7页一、可溶性还原糖检测：一、可溶性还原糖检测：（1）原理：还原糖）原理：还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀。砖红色沉淀。（2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白色或近于白色植物组织。白色或近于白色植物组织。（3）检测过程：）检测过程：水浴加热水浴加热振荡混匀振荡混匀5065水浴水浴加热加热2min2mL组织组织样液样液刚配制斐林刚配制斐林试剂试剂2mL展现浅蓝色展现浅蓝色变成砖红色（变成砖红色（Cu2O）还原糖：含有半缩醛羟基糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽还原糖：含有半缩醛羟基糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。第8页 当质量浓度为当质量浓度为0.1g/mL氢氧化钠溶液与质量浓氢氧化钠溶液与质量浓度为度为0.05g/mL硫酸铜溶液混合后，马上生成淡蓝色硫酸铜溶液混合后，马上生成淡蓝色Cu（OH）2悬浊液。悬浊液。Cu（OH）2与葡萄糖、果糖、与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色Cu2O沉淀。所以，利用该反应，可证实样液中含可溶性沉淀。所以，利用该反应，可证实样液中含可溶性还原糖。还原糖。RCHO+2Cu(OH)RCHO+2Cu(OH)2 2RCOOH+CuRCOOH+Cu2 2O+2HO+2H2 2O O甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。加，或者久置后才用。第9页制备组织样液制备组织样液梨或苹果梨或苹果研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液（用单层纱布）（用单层纱布）显色反应显色反应 向试管中加入向试管中加入2ml组织样液组织样液向试管中加入向试管中加入2ml新配制斐林试剂或新配制斐林试剂或本尼迪特试剂本尼迪特试剂振荡混匀振荡混匀5065水水浴加热浴加热2min观察现象观察现象 观察溶液颜色改变：浅蓝色观察溶液颜色改变：浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。砖红色糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃砖红色糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃第10页2 ml组织样液组织样液1 ml新配制斐林试剂新配制斐林试剂50 65水浴加热水浴加热约约2min观察颜色改变观察颜色改变砖红色砖红色浅蓝色浅蓝色棕棕 色色【斐林试剂斐林试剂】：甲液：甲液：0.1g/mLNaOH溶液，乙液：溶液，乙液：0.05 g/mLCuSO4溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。第11页还原糖检测结果还原糖检测结果还原糖检测结果还原糖检测结果斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热条件下，生成砖红色斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热条件下，生成砖红色Cu2O沉淀。沉淀。-CHO+Cu(OH)2悬浊液悬浊液-COOH+Cu2O（砖红色）（砖红色）第12页二、脂肪检测二、脂肪检测（1）选材：经浸泡去种皮花生种子。）选材：经浸泡去种皮花生种子。（2）检测过程：）检测过程：制片制片选取最薄切片置于洁净载玻片中央选取最薄切片置于洁净载玻片中央制成暂时装片：滴制成暂时装片：滴1 2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴苏丹滴苏丹染液染液，染色，染色2 3min洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%酒精酒精1 2滴滴镜检观察：镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色圆在低倍镜下寻找到已着色圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。形小颗粒，然后用高倍镜观察。苏三（苏丹苏三（苏丹）送了我一个橘黄色胭脂（脂肪）送了我一个橘黄色胭脂（脂肪）切片：切片：花生种子（浸泡花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片。），去皮，将子叶削成薄片。视野中视野中有橘黄有橘黄色颗粒色颗粒第13页橘黄色小圆颗粒橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒即为脂肪颗粒脂肪脂肪+苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液 橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）第14页第15页注意事项：注意事项：（1）若用花生种子作试验材料，必须提前浸泡若用花生种子作试验材料，必须提前浸泡34小时，浸小时，浸泡时间短了，不轻易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下泡时间短了，不轻易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下薄片不易成形，切片要尽可能薄。薄片不易成形，切片要尽可能薄。（2）染色后一定要用）染色后一定要用50%酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹丹），染色和洗浮色时间不宜过长。），染色和洗浮色时间不宜过长。第16页三、蛋白质检测：三、蛋白质检测：（1）原理：蛋白质）原理：蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色络合物紫色络合物（2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2 ml双缩脲试剂双缩脲试剂A液，摇匀液，摇匀3-4滴双缩脲试剂滴双缩脲试剂B液，摇匀液，摇匀观察颜色改变观察颜色改变紫色紫色双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）第17页 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为反应式为:双缩脲（双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（）在碱性环境（NaOH）中）中能和能和Cu2+作用生成紫色络化物，这个反应叫做双缩脲反应。蛋作用生成紫色络化物，这个反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键结构与双缩脲结构相同，所以，蛋白质也白质分子中含有肽键结构与双缩脲结构相同，所以，蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。可与双缩脲试剂发生颜色反应。双缩脲双缩脲双缩脲试剂双缩脲试剂第18页无色无色紫色紫色（创造碱性条件）（创造碱性条件）（提供（提供Cu2+）双缩脲试双缩脲试剂剂B 3-4滴滴双缩脲试双缩脲试剂剂A 2mL2mL组织组织样液样液在碱性条件（在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中肽键）下，蛋白质中肽键（NHCONHCO）与与Cu2作用生生紫色络合物。所以，操作时，应先加作用生生紫色络合物。所以，操作时，应先加A再加再加B，且且A多多B少，假如少，假如B过量，过量，Cu2蓝色就会遮盖生成紫色。蓝色就会遮盖生成紫色。第19页制备组织样液制备组织样液黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆黄豆浸泡浸泡研磨研磨过滤过滤滤液滤液去皮、切片去皮、切片蛋清液蛋清液鸡蛋鸡蛋鸡蛋清稀释液鸡蛋清稀释液稀释稀释显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液向试管中注入向试管中注入2ml双缩脲试剂双缩脲试剂A加入加入3-4滴双缩滴双缩脲试剂脲试剂B观察现象观察现象观察颜色改变：无观察颜色改变：无紫色紫色结论：加入双缩脲试剂结论：加入双缩脲试剂A后，颜色展现为无色，加入后，颜色展现为无色，加入B后，变为后，变为紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。第20页蛋白质检测结果蛋白质检测结果第21页注意事项：注意事项：（1）假如用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，不然反应）假如用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，不然反应后产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷后产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷洁净。洁净。（2）【双缩脲试剂双缩脲试剂】：A液液：0.1g/mL NaOH，B液：液：0.01g/mL CuSO4。先加。先加A液后加液后加B液，且液，且B不能过量，不需要加热。不能过量，不需要加热。（3）过量双缩脲试剂）过量双缩脲试剂B会与试剂会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成紫色。生成紫色。（4）先加入）先加入A液液2ml，摇匀；再加入，摇匀；再加入B液液3-4滴，摇匀。滴，摇匀。第22页四、淀粉检测：四、淀粉检测：（2）选材：马铃薯匀浆）选材：马铃薯匀浆（1）原理：淀粉）原理：淀粉+碘碘 蓝色蓝色（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2滴碘液滴碘液观察颜色改变观察颜色改变蓝色蓝色蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）第23页制备组织样液制备组织样液马铃薯块茎马铃薯块茎研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液加入加入5滴碘滴碘-碘化钾碘化钾观察现象观察现象观察溶液颜色改变：无色观察溶液颜色改变：无色蓝色蓝色结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。第24页判定物质生物材料生物材料所用试剂所用试剂颜色改变还原糖还原糖脂肪脂肪蛋白质蛋白质淀粉淀粉苹果、梨、白萝卜苹果、梨、白萝卜斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀花生种子花生种子苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色豆浆、牛奶、鸡蛋清豆浆、牛奶、鸡蛋清双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色面粉、马铃薯匀浆液面粉、马铃薯匀浆液碘液碘液蓝色蓝色注：判定还原糖需加热；脂肪判定不一定要用显微镜，注：判定还原糖需加热；脂肪判定不一定要用显微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。第25页五、观察五、观察DNA、RNA在细胞中分布在细胞中分布试验原理：试验原理：（1）DNA主要分布在细胞核内，主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。大部分存在于细胞质中。（2）甲基绿和吡罗红两种染色剂对）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和和RNA亲和力不一样，亲和力不一样，甲基绿使甲基绿使DNA展现绿色，吡罗红使展现绿色，吡罗红使RNA展现红色。展现红色。（3）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，能够显示）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，能够显示DNA和和RNA在细胞中分布。在细胞中分布。（4）盐酸能够改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞，同盐酸能够改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中时使染色体中DNA和蛋白质分离，有利于和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。和染色剂结合。甲基绿使甲基绿使DNA展现绿色，吡罗红使展现绿色，吡罗红使RNA展现红色，经过观展现红色，经过观察两种颜色出现部位来判断察两种颜色出现部位来判断DNA和和RNA在细胞中分布。在细胞中分布。第26页方法步骤：方法步骤：（1）取材和制片）取材和制片在洁净载玻片上滴在洁净载玻片上滴1滴滴0.9%NaCl溶液溶液用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上将涂有将涂有口腔上皮细胞口腔上皮细胞载玻片在酒精灯上烘干载玻片在酒精灯上烘干（2）水解：）水解：将烘干载玻片放入盛有将烘干载玻片放入盛有30 mL 8%盐酸盐酸小烧杯中，小烧杯中，30水浴水浴保温保温5 min（3）冲洗涂片：用蒸馏水缓水流冲洗载玻片）冲洗涂片：用蒸馏水缓水流冲洗载玻片10秒秒（4）染色）染色吸水纸吸去载玻片上水分吸水纸吸去载玻片上水分在载玻片上滴加两滴在载玻片上滴加两滴2滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染色色5分钟分钟吸去多出染色剂，盖上盖玻片吸去多出染色剂，盖上盖玻片（5）观察：）观察：先先低倍镜：选染色均匀，色泽浅区域，移到视野中央低倍镜：选染色均匀，色泽浅区域，移到视野中央。后高。后高倍镜：观察细胞核和细胞质染色情况。倍镜：观察细胞核和细胞质染色情况。第27页0.9%生理盐水？生理盐水？人口腔上皮细胞人口腔上皮细胞8%盐酸？盐酸？蒸馏水蒸馏水30水浴水浴吡罗红甲基绿染色剂吡罗红甲基绿染色剂取材取材水解水解冲洗冲洗染色染色观察观察第28页思索与讨论：思索与讨论：（1）9%Nacl溶液作用？溶液作用？保持空腔上皮细胞正常形态。保持空腔上皮细胞正常形态。（2）8%盐酸作用？盐酸作用？杀死细胞，改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞；使杀死细胞，改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞；使染色体中染色体中DNA与蛋白质分离，有利于与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。与染色剂结合。（3）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该试验不宜选取绿色植）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该试验不宜选取绿色植物叶肉细胞（有颜色）和其它有颜色细胞（如鸡血细胞）作为物叶肉细胞（有颜色）和其它有颜色细胞（如鸡血细胞）作为试验材料，因其会干扰颜色观察。试验材料，因其会干扰颜色观察。第29页第30页