基于指标成分与近红外光谱对宁夏野生和栽培甘草的比较鉴别研究.docx
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1、 基于指标成分与近红外光谱对宁夏野生和栽培甘草的比较鉴别研究 狄天云+高晓娟+张霞+赵建军+雍婧姣+马玲+王英华+王汉卿摘要比较宁夏乌拉尔甘草(以下均简称甘草)中基于指标成分含量的色谱鉴别和基于近红外光谱的光谱鉴别差异,建立快速有效鉴别宁夏野生和栽培甘草的方法。采用HPLC和紫外光谱法测定9批野生甘草和14批栽培甘草中甘草苷、甘草酸和总黄酮的含量并采集其近红外光谱信息。结果显示,基于指标成分定量的色谱鉴别无法有效鉴别宁夏野生和栽培甘草,近红外光谱结合聚类分析和主成分分析能够直观、快速、有效鉴别宁夏野生和栽培甘草样品,为甘草生长方式的鉴别及应用研究提供有效方法。同时,为甘草的品种、产地及规格等方
2、面的鉴别提供了研究思路。关键词甘草; 近红外; 指标成分; 聚类分析; 主成分分析; 鉴别AbstractThis study is to construct a rapid and effective method for identification of wild and cultivated Glycyrrhiza uralensis (hereinafter referred to as Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) from Ningxia by comparison of the difference in chromatography ident
3、ification based on index components and near-infrared spectroscopy identification. HPLC and UV methods were used to determine the content of liquiritin, glycyrrhizate and total flavonoids for 9 wild Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and 14 cultivated Glycyrrhizae Radix et Rhizoma samples,and the near-in
4、frared spectroscopy was also,collected. The results illustrated that the chromatography identification based on index components could not identify wild and cultivated Glycyrrhizae Radix et Rhizoma from Ningxia, while near-infrared spectroscopy could quickly and effectively achieve it. It provides a
5、n effective method for the growth pattern identification and application of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma.Key wordsGlycyrrhiza uralensis (Glycyrrhizae Radix et Rhizoma); near-infrared spectroscopy; index components; cluster analysis; principal components analysis; identification甘草Glycyrrhizae Radix
6、et Rhizoma為豆科植物甘草(又称乌拉尔甘草)Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Batal.或光果甘草G.glabra L.的干燥根和根茎1,具有补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,缓急止痛,调和诸药之功,素有“十方九草”之称。在我国,甘草分布范围最广,主要分布在西北、东北和华北地区,以中西部地区(内蒙古、宁夏和甘肃)所产的西甘草而闻名2。甘草作为药材、食品及烟草添加品,其市场需求量急剧增加,野生资源过度采挖3,蕴藏量不足50万t2,被列入国家重点保护野生药材物种名录二级保护野生药材,2000年国务院发布的关于禁止采集和销售发菜。制止滥挖甘草
7、和麻黄草有关问题的通知明令禁止对甘草的掠夺性采挖。目前,市售甘草以人工栽培为主。但是由于栽培与野生药材之间存在质量差异2,4,对二者进行鉴定区分,有利于合理使用以提高临床疗效。中药鉴定旨在研究中药的品种、质量,保证临床疗效。目前,对于中药鉴定研究除传统的基源鉴别、性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别外,以指纹图谱研究较多5,其次,分子鉴定也已逐步开展6。指纹图谱虽然可以反映药材的内在质量,但是需要考虑产地、采收期等因素对化学成分的影响,且需要对药材进行前处理;分子鉴定专属性强,但是其操作复杂,且成本高7。近红外光谱作为一种快速、价廉、无损分析方法,其与化学计量学结合,已被用于农业、食品、化学和石油化工
8、等领域的定性和定量分析8-9,已被欧美药典纳入附录内容10-11。近红外光谱分析技术在中药材真伪、掺伪、产地、同属中药品种和中成药的鉴定及含量测定等方面已有相关研究报道,但是关于其对不同生长方式(野生和栽培)的鉴定研究报道鲜少。本研究采用近红外光谱技术建立宁夏14批栽培甘草和9批野生甘草的近红外光谱,并对光谱采用不同的预处理方法预处理后进行聚类分析和主成分分析。同时,采用HPLC及紫外光谱法对各批甘草中指标成分甘草苷、甘草酸和总黄酮进行测定,并对其含量进行聚类分析。对近红外分析结果和指标成分含量分析结果进行比较研究,进而确定宁夏野生和栽培甘草的鉴定方法。 1 材料1.1 仪器Bruker Ma
9、trix-F型傅利叶变换近红外光谱仪(测试条件:分辨率8 cm-1;样品累积扫描次数32 Scans;背景累积扫描次数32 Scans;光谱范围12 0004 000 cm-1;软件为OPUS 5.5);高效液相色谱仪(Agilent 1260 LC色谱工作站,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1311A四元泵,G1379A脱气机,GB15B二极管阵列检测器);岛津UV1901紫外分光光度计;梅特勒XS-205电子分析天平。1.2 试剂甘草苷、甘草酸对照品(批号111610-201106,110731-201418)、芦丁对照品(批号100080-200707)均购于中国食品药品检
10、定研究院;甲醇、乙腈为色谱纯;娃哈哈纯净水;其他试剂均为分析纯。1.3 药材实验所用的23批甘草药材采自宁夏不同产区,栽培甘草生长年限3年,经王英华主任药师鉴定为豆科植物甘草G. uralensis,样本信息见表1。2 方法2.1 近红外光谱测定分别取甘草药材粉末适量,在Bruker Matrix-F型傅利叶变换近红外光谱仪扫描近红外光谱,测试条件:分辨率8 cm-1;样品累积扫描次数32Scans;背景累积扫描次数32 Scans;光谱范围12 0004 000 cm-1;软件为OPUS 5.5。每个样品平行测定6次,取平均值作为该样品的原始光谱,环境条件为:温度23 ,湿度40%。2.2
11、甘草指标成分检测2.2.1 甘草苷、甘草酸的含量测定 按照中国药典2015年版一部甘草【含量测定】项下甘草苷、甘草酸的測定方法测定。2.2.2 总黄酮的含量测定 参考文献测定总黄酮含量12。2.3 数据分析2.3.1 近红外光谱数据预处理 采用OPUS5.5软件对各批次甘草近红外光谱分别进行矢量归一化、一阶导数、二阶导数、一阶导数+矢量归一化和二阶导数+矢量归一化预处理,导出各近红外光谱点数据。2.3.3 聚类分析 采用R语言3.2.3对甘草近红外光谱预处理后的数据及指标成分含量数据分别进行进行聚类分析。2.3.4 主成分分析 采用SIMCA13.0对甘草近红外光谱预处理后的数据及指标成分含量
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