关于DNA自动化检验技术体系及UMS运用研究.docx
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1、 关于DNA自动化检验技术体系及UMS运用研究 摘要:本文对自动化与手工检测方法进行比较测试,根据测试自动化与手工操作DNA检验的时间,进行了交叉污染测试,提出实验室信息管理系统(UMS)的构建。结果与讨论:研究比较不同DNA提取及检测方法,UMS及DNA自动化检验技术体系应用。关键词:DNA;自动化检验;UMS;运用在DNA数据库建设中已经广泛应用自动化工作站高通量提取生物检材DNA的方式,而Chelex一100法或磁珠法手工操作、分别提取各种检材DNA等方法仍然在检案实践中应用较广。自动化技术的应用必须考虑其通用性,才能满足STR分型检测时血痕、烟蒂、毛发、精斑、骨骼等不同样本对DNA模板
2、的质量要求,且不能造成样本间相互污染。磁珠法是在硅胶外表涂上一层磁性树脂,在肌盐存在的条件下,可特异性吸附DNA,而达到提取的目的,适当控制磁珠浓度还可达到定量作用。实际应用表明,该方法适用于各类涉案生物检材,可获得质量较高的模板DNA,且无需离心、过滤等步骤,易于实现自动化操作。本文主要研究分析建立DNA自动化对不同涉案检材的检验体系,在操作平台上加载模块及其自动化程序,包括ETCANFreedomEVO100-4型自动化的DNA提取工作站及75-2型的自动加样工作站两种方式。同时,通过带有DNA质控数据的实验室信息管理系统(UMS)的应用,使样本从提取到检验全程处于规范化。网络化的系统管控
3、之中,从而提高DNA检案效率和质量。一、材料与方法(一)对自动化与手工检测方法进行比较测试1.DNA提取在FreedomEVO100-4工作站上配置模块,参照标准DNAIQTM磁珠法、Chelex-100法操作流程,对工作站-磁珠法、工作站-Chelex法DNA自动提取程序进行设计、优化并装载。分别采用上述四种方法,手工-磁珠法、手工-Chelex法及工作站-EQ磁珠法(EQ1000法医DNA提取试剂盒)、工作站-IQ磁珠法(DNA-IQTM试剂盒)、工作站-Chelex法对上述检材进行DNA提取。2.DNA扩增参照标准PCR操作流程,在FreedomEVO75-2型工作站上设置、装载、“PC
4、R-磁珠”、“PCR-Chelex”自动加样程序。进行PCR10L反应体系构建,AB-9700型PCR仪扩增。?3.毛细管电泳在FreedomEVO57-2型工作站上参照标准STR检测操作流程,设置、装载“STR-检案”自动加样程序,通过PCR进行产物扩增、DNA变性及STR01L检测体系构建,检测STR分型采用AB一3130/3130xL型基因分析仪电泳。(二)测试自动化与手工操作DNA检验的时间STR检测的对象是同板(96孔板)的样本数为20、48和92的检材,在此基础上对DNA自动化检验技术体系与手工操作的DNA一PCR一STR检测时间进行比较测试。(三)交叉污染测试选择48份无关个体血
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