2695高效液相色谱仪验证方案DOC.doc

标题
Subject
Waters e2695高效液相色谱仪验收报告
文件编码
Document code
07-G-09001
版 本 号
Edition number
00
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日 期
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日 期
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批 准
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日 期
Date

目 录
1．目的
2．范围
3．责任
4．验证
4．1．公用系统检查
4．2运行确认
4．2．1目的
4．2．2方式
4．2．3内容
4．2．3．1设备使用原理
4．2．3．2确认标准操作规程的可行性
4．2．3．3确认设备正常运行的项目
4．3性能确认
4．3．1输液系统
4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4．3．1．2定性、定量测量重复性误差
4．3．1．3系统适用性试验
4．3．2紫外检测器性能
4．3．2．1基线漂移与基线噪声

5．拟订验证周期
6．验证结果评价与结论
7．附件

1 目的：
为确认Alliance2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证委员会批准。
2 范围：
适用于美国Waters 公司Alliance2695型高效液相色谱仪系统的再验证。
3 责任：
3．1验证委员会
3．1．1负责验证方案的批准。
3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3．1．3负责验证数据及结果的审核。
3．1．4负责验证报告的审批。
3．1．5负责发放验证证书。
3．1．6负责验证周期的确认。
3．2设备部。
3．2．1负责建立设备档案。
3．2．2负责仪器、仪表的校正。
3．3质量保证部
3．3．1负责制定验证方案。
3．3．2负责验证的实施。
3．3．3负责拟定验证周期。
3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证委员会。

4 验证：
4．1 公用系统检查
名 称
设计要求
实 际
结 论
确认人
日期
备注
电压（V）
220伏、单相

功率
500W

频率
50HZ

接地保护
有

检查项目
标 准
结果
检查人
日期
备注
生产厂商
美国Waters公司

设备名称
Alliance 2695型HPLC系统

安装地点
液相色谱室220

公司内部设备编号
ZJ-LH-201

主要性能参数
2695型溶剂与样品管理系统参数
电源
220V/50Hz，250W

流速范围
0.00～45ml/min

压力范围
0～6000Psi

流速精度
±0.01ml

工作温度
4～38℃

工作湿度
20～90%

重量
42.3Kg

PDA检测器参数
电源
220V/50Hz, 250W

波长范围
190～800nm

波长精度
±1nm

基线噪音
5×10-5AU 254nm

漂移值
1×10-3AU/hour 254nm

线性范围
5% over-0.1～2.0AU

光谱分析
1.2nm/光电二极管

工作温度
4～40℃

工作湿度
20～80%

重量
15.4Kg

复核人： 日期：

4．2运行确认
4．2．1目的
试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计范围内准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
4．2．2方式
通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4．2．3内容
4．2．3．1设备概述
4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，2996检测器和自动进样器、Millennium32色谱管理工作站及打印机组成。
4．2．3．1．2高压液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入分析色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果,然后分别进行收集。
4．2．3．2确认高效液相色谱系统标准操作规程的可行性测试过程:
A．前提：安装确认结果使得设备安装稳固，电源连接完好，仪器自检完毕。
B．仪器操作运行：仪器运行，整个操作过程完全按《10-G-08002 Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程》进行。
C．在整个系统运转的同时，运行确认以下项目，以证明设备符合要求。
4．2．3．3高效液相色谱仪运行确认
项 目
要求
结论
确认人
日期
备注
泵流量设定值测定
误差SS＜±2%

泵流量稳定性测定
误差SR＜±2%

系统重复性测定
误差RSD≤1.5%

基线漂移与基线噪声测定
基线漂移≤5×10-3（AU/h）
基线噪声≤5×10-4（AU）

4．3 性能确认
4．3．1输液系统
4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4．3．1．1．1要求：泵流量设定值误差SS＜±2%；流量稳定性误差SR＜±2%。
4．3．1．1．2检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，以甲醇为流动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗干燥称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算SS和SR。
SS＝
SR＝
式中：SS为流量设定值误差（%）；
Fm＝为流量实测值（ml/min）；
W2为容量瓶＋流动相的重量（g）；
W1为容量瓶的重量（g）；
FS为流量设定值（ml/min）；
Ρt为实验温度下流动相的密度（g/cm3）；
t为收集流动相的时间（min）
SR为流量稳定性误差（%）
Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）；
Fmin为同一组测量中流量最小值（ml/min）
F为同一组测量值的算术平均值（ml/min）
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
1.5
测量次数
3
3
3
收集流动相时间（min）
25
15
10
允许误差
SS
3%
2%
2%
SR
3%
2%
2%
表1 SS、SR的检定
4．3．1．2定性、定量测量重复性误差
4．3．1．2．1检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，使之处于正常工作状态，注入注射用胸腺五肽样品溶液20μl，记录保留时间和峰面积，连续测量5次，计算相对标准偏差RSD。
4．3．1．2．2可接受标准：RSD≤1.5%。
测定次数
1
2
3
4
5
保留时间

峰 面 积

实测RSD
保留时间(min)：
标准RSD
≤1.5%
峰面积：
按下式计算相对标准偏差RSD。
RSD＝
式中：RSD为定性、定量测量重复性的相对标准偏差
为第i次测得的保留时间或峰面积
为n次测量结果的算术平均值
i为测量序号
n为测量次数
4．3．1．3系统适用性试验
选定注射用胸腺五肽含量测定的色谱条件作为系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）-甲醇（90：10）为流动相；检测波长为275nm。精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续测定3次，依据图谱，记录理论板数。
4．3．1．3．1可接受标准：记录色谱图理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于2000。
4．3．2紫外检测器性能
4．3．2．1基线漂移与基线噪声
4．3．2．1．1要求：基线漂移≤5×10-3（AU/h）；基线噪声≤5×10-4（AU）。
4．3．1．1．2检定法：将仪器各部分联接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min,吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20-30分钟，计算基线漂移和噪声。
5．拟订再验证周期
设备验证周期拟订为：一年一次。
6．验证结果评价与结论
由设备动力部负责收集各项验证试验结果记录，根据验证试验结果起草验证报告，报验证委员会，验证委员会对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认验证周期。对验证结果的评审应包括：
6．1验证实验是否有遗漏？
6．2验证实验过程中对验证方案有无修改？修改方案的依据以及修改是否经过批准？
6．3验证记录是否完整？
6．4验证试验结果是否符合要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要进一步补充试验？
7．附件

附件1
高效液相色谱仪验证结果及记录（1）
验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设 备 名 称
Alliance 2695高效液相色谱仪
规 格 型 号
Alliance 2695
设 备 位 置
液相色谱室220
设 备 编 号

制 造 厂 家
美国Waters公司
出 厂 日 期
2002
泵流量设定值误差与流量稳定性误差
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
1.5
操作人
日 期
测量次数
3
3
3
收集流动相时间（min）
25
15
10

允许误差
SS
3%
2%
2%
SR
3%
2%
2%
实测误差
SS

SR

结果评价及建议：

设备动力部： 日期：
结果评价及建议

中心化验室： 日期：
结果评价及建议

质量保证部： 日期：
备注：

附件2
高效液相色谱仪验证结果及记录（2）

验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设 备 名 称
Alliance 2695高效液相色谱仪
规 格 型 号
Alliance 2695
设 备 位 置
液相色谱室220
设 备 编 号

制 造 厂 家
美国Waters公司
出 厂 日 期
2002
定性、定量重复性检定
测定次数

操作人
日 期
保留时间(min)

峰面积

实测RSD
保留时间(min)：
标准RSD
≤1.5%
峰 面 积：
结果评价及建议：

设备动力部： 日期：
结果评价及建议

中心化验室： 日期：
结果评价及建议

质量保证部： 日期：
备注：

附件3
高效液相色谱仪验证结果及记录（3）

验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设 备 名 称
Alliance 2695高效液相色谱仪
规 格 型 号
Alliance 2695
设 备 位 置
液相色谱室220
设 备 编 号

制 造 厂 家
美国Waters公司
出 厂 日 期
2002
系统适用性试验
测定次数
1
2
3
操作人
日 期
色谱图理论塔板数（n）

可接受标准
n不低于2000

结果评价及建议：

设备动力部： 日期：
结果评价及建议

中心化验室： 日期：
结果评价及建议

质量保证部： 日期：
备注：

附件4
高效液相色谱仪验证结果及记录（4）

验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设 备 名 称
Alliance 2695高效液相色谱仪
规 格 型 号
Alliance 2695
设 备 位 置
液相色谱室220
设 备 编 号

制 造 厂 家
美国Waters公司
出 厂 日 期
2002
紫外检测器性能试验
测定
项目
标准要求
实测数据及结果计算
操作人
日期
备注
基线
漂移
与基
线噪
声

波长254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20～30分钟，计算基线漂移和噪声
判定标准:
基线漂移≤5×10-3（AU/h）
基线噪声≤5×10-4（AU）。
基线漂移:

基线噪声:

结果评价及建议：

设备动力部： 日期：
结果评价及建议

中心化验室： 日期：
结果评价及建议

质量保证部： 日期：
备注：

附件5
验证最终评价报告
验证方案名称
Alliance2695型高效液相色谱仪再验证方案
验证方案编码
07-G-09001
设 备 名 称
Alliance 2695高效液相色谱仪
规 格 型 号
Alliance 2695
设 备 位 置
液相色谱室220
设 备 编 号

制 造 厂 家
美国Waters公司
出 厂 日 期
2002
部 门
最 终 评 价
设备动力部
负责人： 日期：

负责人： 日期：
质量保证部
负责人： 日期：
批准
负责人： 日期：
备 注：