贝达喹啉治疗药物浓度监测方法的建立与应用.pdf

20贝达喹啉治疗药物浓度监测方法的建立与应用王仲建，陈夏霖3，张侠？，张向荣？，曹辉1,王允吉1*南京中医药大学附属南京医院/南京市第二医院1药学部；结核科，南京2 10 0 0 3；3江苏康缘药业股份有限公司，南京2 11112摘要目的：建立贝达喹啉人体血药浓度的测定方法并应用。方法：血浆样本以舍曲林为内标经甲醇沉淀蛋白后，采用C1s色谱柱甲醇-10 mmolL-1甲酸铵溶液梯度洗脱分离，电喷雾正离化，多反应监测模式（MRM）定量测定贝达喹和舍曲林的离子反应分别为m/z555.2229.0和m/z306.2159.0。结果：贝达喹啉检测质量浓度的线性范围为0.0 10 3.0 gmL-1（r=0.9 9 9 5），定量下限为0.0 10 gmL-1；方法经验证符合生物样本分析要求。用于6 例耐多药结核病(MDR-TB)患者贝达喹啉治疗血药浓度监测，患者在治疗第7 天血浆中贝达喹啉血药峰浓度Cmx为（3.48 土0.70)gmL-1，峰时间tmx为（5.331.0 3)h，半衰期ti/z为（18.7 36.39)h；血药浓度曲线下面积AUCmst为（50.16 9.7 4)ghmL-1，平均驻留时间MRT为（10.6 2 0.6 9)h；其中CL/F为（4.8 31.34)Lh-1,V/F为（12 3.55土2 4.19)L。结论：所建LC-MS/MS法专属性好，准确度高，精密度与灵敏度均较好，可用于MDR-TB患者体内贝达喹啉血药浓度的检测。关键词LC-MS/MS;贝达喹啉；人体血药浓度；耐多药结核病中图分类号R969.1文献标志码马A文章编号1673-7806(2024)01-020-06结核病(tuberculosis,TB)是由单一病原体引发的传染病，严重危害人类健康。2 0 2 2 年结核病成为了仅次于新冠病毒感染（COVID-19)的第二大传染性疾病，成为了全球因呼吸衰竭造成患者死亡的主要原因2 。贝达喹啉作为自19 7 1年以来第一个批准上市的新型抗结核药物3,在期临床实验结果中展现出具有较强的抗耐药结核杆菌活性。贝达喹啉在肝脏内主要经由肝药酶CYP3A4介导进行代谢，此外，肝药酶CYP2C19与CYP2C8也参与贝达喹啉肝脏代谢4。贝达喹啉在肝内代谢为N-单去甲基代谢物（M2）,M 2 是引起心脏不良反应的主要原因4，会引起QT间期延长的风险，而严重的QT间期延长可导致严重心脏事件甚至猝死5。同时贝达喹啉的临床使用可能会导致肝毒性和肾毒性,且在患者肝肾功能严重损伤的情况下应慎用。因此对于使用贝达喹啉治疗耐药结核的患者进行治疗药物监测，实现个体化用药设计，规避QT间期的严重不良反应*基金项目国家“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项“十三五”项目（2 0 18 ZX10725509）；江苏省教育厅省高校自然科学基金面上项目（2 1KJB350024)作者简介王仲建，男，主管药师E-mail:*通信作者王允吉，男，主管药师E-mail：w a n g y u n j i 19 8 4 12 6.c o m收稿日期2023-06-29修回日期2 0 2 3-11-2 0显得尤为必要贝达喹啉血药浓度尚缺乏酶标仪快速测定试剂盒，LC-MS/MS测定报道6 仍缺乏对人体完整药动学曲线的描述，不利于构建个体化给药方案和精准治疗7.8。本文结合贝达喹啉治疗药物检测，同时结合临床试验，用密集采血点的方式收集药动学数据，为临床耐药肺结核患者合并糖尿病、乙型肝炎、高甘油三酯血症等其他疾病的贝达喹啉群体药动学模型的建立提供临床数据基础，为通过控制贝达喹啉血药浓度峰值与M2的血药浓度值来减少患者QT间期延长的不良反应，提供临床个体化用药参考1材料1.1仪器LC-30AD系列HPLC液相色谱仪（日本岛津公司），API4000串联质谱仪（美国ABSciex公司），Milli-Q纯水仪（德国默克公司）,BY-R20型医用离心机（北京白洋医疗器械有限公司），Kylin-bell-VORTEX-5涡旋仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司），十万分之一分析天平（型号：XS205DU，梅特勒上海有限公司）等。1.2药品与试剂富马酸贝达喹啉片（斯耐瑞/Sirturo）（国药准字21PharmaceuticalandClinicalResearch药学与临床研究HJ20171366，规格10 0 mg/片，2 4片/盒），西安杨森药业；对照品贝达喹啉（批号：S15N9H74854，纯度99.0%），舍曲林（内标，批号：Y15M9C55501，纯度99.0%），上海源叶生物科技有限公司。甲醇、乙睛(LC-MS级）,湖北弗顿科技有限公司；甲酸铵（LC-MS级，纯度9 9.0%），阿拉丁生化科技股份有限公司,水由Milli-Q超纯水系统制得1.3空白血浆收集空白血浆采集于南京市第二医院进行体检的健康者6 人，年龄范围（2 4.42 5.6 8)岁，男性与女性各3人,其中健康志愿者的上肢静脉取血的生化管编号为：8 0 2 2 38 49 40、8 0 2 2 38 50 40、8 0 2 2 38 42 40、80223837408022384340,80223832401.4临床样本的纳入与排除标准在南京市第二医院内耐药结核病区，收集临床使用贝达喹啉治疗糖尿病合并耐药肺结核患者和非糖尿病耐药肺结核患者服用贝达喹啉治疗的外周血样本。纳人标准：患者年龄18 6 5岁；临床确诊为耐多药结核病患者；临床规律服用贝达喹啉片治疗MDR-TB达1周以上，中途未中断或未更改剂量。排除标准：严重的肝肾功能衰竭患者；严重的精神系统疾病；患有恶性肿瘤患者；肾衰竭患者；心脏病患者。南京市第二医院人体临床实验医学伦理审评编号：2 0 2 3-LY-kt023,2023-LS-043,所有患者均需要在患者知情同意书中签字。1.5受试者贝达喹啉用药方案与取血时间本研究共纳人我院2 0 2 3年4 5月收治的非糖尿病合并MDR-TB患者共6 例。其中,男性4例，女性2 例；患者的平均年龄为（42.17 9.7 0)岁患者均口服给药，40 0 mgqd,连续治疗2 周；患者在服用贝达喹啉的第7 天进行药代动力学实验，分别在患者的服药前30 min、服药后2、4、5、6、8、12、2 4h 上肢静脉取血（以第1天服药时刻记为0 h点，第7 天的采血点为143.5、146、148、150、152、156,168 h)。1.6检测方法及结果实验使用抗凝采血管采集患者上肢静脉血，于4离心10 min，离心机转速为30 0 0 rmin-，使用Eppendorf移液器取血浆上清置于2 mL冻存管中，于-8 0 冰箱中保存，备用。取患者血浆生物样本，按照“2.1 与“2.2 项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积并使用随行标准曲线和内标法计算贝达喹啉的血药浓度2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:ZORBAXEclipse Plus Cis（3.0 m m 50mm,1.8m），柱温40,流动相：10 mmolL-l甲酸铵（A)；和甲醇（B），梯度洗脱（0 min,30%A;1.5min，90%A;4.1 min,90%A;4.4 min,30%A;5.4 min,30%A）流速：0.6 5mLmin-l；进样量：5L；分析时间：5.40 min。2.2质谱条件采用电喷雾离子源原（electron spray ionization,ESI)正离子化，多反应监测模式（multiplereactionmonitoring,MRM)检测9,其中离子源温度为550，毛细管电压为450 0 V，气帘气为2.0 7 10 5Pa，碰撞气为5.50 10*Pa，雾化气（GS1)为3.10 10 5Pa，辅助气（GS2)为3.10 10 Pa9。贝达喹啉和内标（舍曲林）的二级质谱全扫描（MS-scan)图见图1，各自的监测离子对和质谱参数见表1。2.4e7758.1A2.0e7-1.6e7-1.2e7555.20.8e6229.0537.2328.10.4e6478.1492.1523.3140.9.184.1311.62364.472.1101.0157.8254.91326.1350.3414.1050100 150200250300350400450500550600m/z,Da159.02.4e7B275.52.0e7-1.6e7129.11.2e7-0.8e6306.291.10.4e6115.2197.12.40.1247.3060100140180220260300340m/z,Da图1（A)贝达喹啉和(B)内标舍曲林二级质谱全扫描图表1贝达喹啉和内标LC-MS/MS测定参数母离子质量子离子质量碰撞电压去簇电压化合物(Da)(Da)(V)(V)贝达喹啉555.2229.03084舍曲林（内标）306.2159.022382.3溶液配制取贝达喹啉对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释制成1.0 0 mg?mL-的对照品储备液，置于-2 0 冰箱中保存。临用前用甲醇定量稀释成0.10、0.2 0.0.50、1.0、2.5、5.0、10、2 0、30 gmL-的系列对照品工作液22Feb;32(1)贝达喹啉治疗药物浓度监测方法的建立与应用2024取舍曲林（内标)适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释制成1.0 0 mgmL-1的舍曲林内标储备液，置于-2 0 冰箱中密封保存，临用前用质谱甲醇定量稀释制成2.0 gmL-l的内标工作液备用。2.4血浆生物样本的处理精密移取血浆生物样本10 0 L,置于2 mL聚塑离心管中，加人舍曲林内标工作液10 L，加入甲醇30 0 L沉淀蛋白，涡旋5min，于12 0 0 0 rmin-1离心10 min10,取上清液适量，置于进样小瓶中，按“2.1 和“2.2 项下方法进样测定。2.5贝达啉人体血清方法学验证2.5.1专属性取6 份不同来源的体检健康人体空白血浆，加入贝达喹啉对照品的人体血浆样本（质量浓度为30 0 0 和2 0 0 0 ngmL-）与使用贝达喹啉的患者血浆生物样本，同时按“2.4 项下方法处理分析10。结果贝达喹啉和内标舍曲林的保留时间分别为3.43和1.2 8 min，见图2。11000.955.0e4111.78AB10004.5e4900IS4.0e4sdo800sdo3.5e4-700-3.0e46005002.5e4-4002.0e4-3001.5e4-2001.0e4-1005.0e3000.5 1.01.52.02.53.03.54.04.55.000.51.01.52.02.53.03.5 4.04.55.0t/mint/min1.263.0e56.0e5CD2.5e55.0e52.0e54.0e51.5e53.0e51.0e52.0e51.77ISISBDQBDQ0.5e5-1.0e5000.51.01.52.02.53.03.54.0 4.55.000.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0t/mint/min图2(A)空白血浆;(B)空白血浆加内标;(C)空白血浆加入定量下限(LLOQ)浓度贝达喹啉;(D)给药后2 h血浆中贝达喹啉和内标舍曲林的LC-MS/MS色谱图1.贝达喹琳：2.舍曲林。2.5.2标准曲线向空白人血浆中分别加人“2.3”项下的系列对照品工作液，配制成0.10、0.2 0、0.50、1.0、2.5、5.0、10、2 0、30 gmL-的对照品血浆样本，按“2.4 项下方法处理后进样分析以贝达喹啉的标准浓度（X)为横坐标，贝达喹啉与舍曲林的内标的峰面积比值（Y）为纵坐标，进行回归分析(W=1/X2)10,得贝达喹啉标准曲线回归方程:Y=3.78104X+4.5910-4(r=0.9977),r 0.99，结果说明在本研究条件下血浆中贝达喹啉在0.01030g?mL-1与峰面积线性关系良好。2.5.3精密度与准确度向人空白血浆中分别加人2.3”项下质量浓度为0.2 5、7.5、2 5gmL-1的对照品工作液，配制成低、中、高3个浓度水平（0.0 2 5、0.75、2.5gmL-)的质控样本，每6 份为1个分析批次，按“2.4”项下方法处理后进样分析，根据随行标准曲线，计算质控样本的准确度和批内精密度9。在1周内对3个分析批质控样本进行检测分析，计算质控样本的准确度和批间精密度，结果见表2。表2贝达喹啉人体血浆药物浓度测定方法学的准确度和精密度结果批内（n=6)批间(n=18)理论质量浓度(gmL-)测定值RSD(%)RE(%)测定值RSD(%)RE(%)0.0100.0094 0.000383.9994.150.009 6 0.001 616.1396.380.0250.022 0.000934.1589.870.0230.00187.8294.440.750.72 0.0273.7396.090.75 0.0435.74100.032.52.1 0.0833.8387.002.3 0.187.9892.33本研究方法下，贝达喹啉低、中、高3个质量浓度的质控生物样本日内，日间RSD均小于15%，定量下限(lower limit of quantification,LLOQ)生物样本日内，日间RSD均小于2 0%10,准确度RE%均在23PharmaceuticalandClinicalResearch研药学与临床研究87.0%100.0%之间，均符合生物样本定量分析的要求。2.5.4提取回收率和基质效应取“2.5.3 项下低、中、高3个质量浓度水平（0.0 2 50.7 5、2.5gmL-）的质控样本，每个浓度水平6 份，按“2.4 项下方法处理后进行分析，得到贝达喹啉的峰面积A1；另取人空白血浆，甲醇沉淀蛋白后取得上清液，向上清液中加入分别加人“2.3 项下质量浓度为0.2 5、7.5、25gmL-的对照品工作液，配制成低、中、高3个质量浓度水平（0.0 2 5、0.7 5、2.5gmL-）的样本，每个浓度水平6 份，分析后得到贝达喹啉的峰面积A2，峰面积比A1/A2即为贝达喹啉的提取回收率，结果见表3。本研究方法下，贝达喹啉的提取回收率为7 8.9 2%8 2.54%（RSD15%），说明本生物样本前处理方法适用于贝达喹啉的提取分析。以50%甲醇-水作为基质，配制低、中、高3个质量浓度水平（0.0 2 5、0.7 5、2.5gmL-）的样本，每个浓度水平6 份，进样分析得到贝达喹啉的峰面积A3。根据峰面积比A2/A3求算贝达喹啉的基质效应。结果见表3，贝达喹啉的基质效应结果为82.05%90.90%（RSD 15%），表明基质中内源性物质对贝达喹啉的影响较小10 表3贝达喹啉人血浆样本测定方法学中提取回收率和基质效应结果理论质量浓度（g?mL-）提取回收率（%）基质效应（%）0.02582.54 7.8890.90 9.730.7582.053.9282.054.552.578.92 3.1482.77 2.062.5.5稳定性考察取低、中、高3个质量浓度水平（0.0 2 5、0.7 5、2.5gmL-)的质控样本，分别于室温放置6 h、-8 0 冰箱放置30 天以及经过3次冻融循环后，按“2.4 项下方法处理后进样分析，考察样本在上述3种条件下的稳定性。另取处理好的样本于自动进样器（8)中放置2 4h后分析，考察处理后样本在自动进样器中的稳定性稳定性考察结果见表4，在上述4种不同条件下，低、中、高3个浓度水平的测定值与理论值的正负偏差均在15%范围内，表明人血浆中贝达喹啉在本实验条件下稳定。2.5.6稀释稳定性取“2.4 项下质量浓度为8 gmL-i的标准曲线血浆生物样本，用空白血浆稀释4倍后，按照“2.4 项下方法处理后，再按照“2.1 与“2.2”项下色谱与质谱条件进样分析以考察稀释稳定性(平行稀释操作，制备6 份样本)9。结果显示，稀释后生物样本的精密度RSD小于10%,准确度为表4贝达喹啉人血浆样本测定方法学中稳定性结果（n=5,xs）测定准确度（%）理论质量浓度室温放置-80冻融循环自动进样(ugmL-)6h30d3次器2 4h101.96 97.52101.84 95.730.02510.107.272.576.6697.47 98.08 95.57 106.000.752.252.516.445.9489.2094.2490.80114.93 2.51.471.512.586.26（9 1.7 7%2.2 3%），表明血浆生物样本用空白血浆稀释4倍对贝达喹啉的定量分析无明显影响。2.6受试者基本信息与临床治疗方案本研究共纳入6 例MDR-TB受试者，血药浓度监测点共计42 个，受试者的人口学信息包括年龄（42.17 9.7 0）岁，体重（6 7.50 9.46)kg，身高(172.177.05)cm,BMI(22.651.55)kgm,血肌酐(67.7327.27)molL-l，肾小球滤过率（10 9.7 2 20.86)mL1.73mminl，总胆固醇（3.8 8 0.7 7）mmolL-,总胆红素（7.531.57)molL-1,丙氨酸氨基转移酶（2 3.2 0 13.8 3)UL-，间接胆红素(5.281.42)molL-l,尿素氮(3.6 2 0.9 6)mmol.L-l,血糖(5.8 0 1.30)mmol L-l。临床试验受试者均服用贝达喹啉治疗耐药肺结核，患者的临床症状均为咳嗽咳痰，并伴随咳血胸痛,其中在胸部CT显示在两肺散在斑片结节影，伴有肺上叶空洞形成。患者在多药耐药利福平耐药快速检测(XpertMTB/RIF)中均检出结核分枝杆菌阳性合并利福平耐药。痰液结核分枝杆菌耐药基因检测示：结核分枝杆菌复合群序列数为7 2 14，异烟katG突变，利福平rpoB突变，吡嗪酰胺pncA突变，链霉素xpsL突变,氟喹诺酮类gyxA突变,为典型广泛耐多药肺结核，并诊断明确。依据中国耐多药与耐利福平结核病治疗专家共识(2 0 19 年版)推荐的治疗方案，本实验的受试者予以“贝达喹啉、利奈唑胺、左氧氟沙星（或莫西沙星）、环丝氨酸、氯法齐明”抗结核治疗，合并临床监测心电图情况，必要时将莫西沙星更换为左氧氟沙星，减轻莫西沙星对心脏的影响2。患者总疗程共计18个月，其中强化期6 个月，每日使用贝达喹啉(Bdq)、利奈唑胺(Lzd)、左氧氟沙星(Lfx)或莫西沙星（Mfx）、环丝氨酸（Cs)和氯法齐明（Cfz)；巩固期12个月，每日使用Lfx(或Mfx）、Lz d、Cf z 和Cs。贝达喹啉临床试验在患者住院治疗两周内由结核科耐药结核病区与临床药学部共同合作完成，其中治疗强化期共6 个月，贝达啉初始日剂量为40 0 mg，每日24贝达喹啉治疗药物浓度监测方法的建立与应用一次，服用两周后改为每次2 0 0 mg，每周3次，在强化期（2 4周）结束后停药。2.7贝达隆在耐药肺结核患者中人体药代动力学实验结果贝达喹啉在6 名受试者服药第7 天的药代动力学血药浓度曲线见图3A，连续7 天给药的药代动力学群体均值预测线见图3B，其中药动学参数计算使用PhoenixWinnolin8.3.5，贝达喹啉群体均值预测的计算使用软件PhoenixNLME8.4.0。实验结果显示，在第7 天贝达喹啉最高血药浓度Cmx值为(3.480.70)gmL-,半衰期ti/z为(18.7 36.39)h；患者的达峰时间为（5.331.0 3)h（贝达喹啉在第7天的达峰时间为149.33h，SD 值为1.0 3h)；6 名患者的血药浓度曲线下面积AUClast为（50.16 9.7 4）ghmL-,平均驻留时间MRT为(10.6 2 0.6 9)h;其中CL/F为（4.8 31.34)Lh-,V/F为（12 3.5524.19)L。在本实验中所有受试者的血糖与血脂的指标均正常，以上药代动力学参数为本课题组开展贝达喹啉在耐药肺结核患者合并有糖尿病、乙型肝炎、高血脂等合并疾病的群体药动学个体化给药方案的制定提供基础6000(-Tu.Bu)A500027400046300048200010000140 144 148152 156 160 164.168t(h)104(r-T.Bu)B103男男女男男女38102女48群体均值预测40 0 mg101024487296120144168192t(h)图36 名受试者(A)服药第7 天贝达喹啉(Bdq)血药浓度-时间曲线；(B第7 天实测血药浓度散点图注：图3的时间轴以第1天服药为0 时刻。3 讨 论近年来贝达喹啉在临床广泛应用，因此而导致的QT间期延长的不良反应在临床中经常出现，很多患者被迫停药，关于贝达喹啉耐药肺结核患者个体化用药也成为了研究热点。ZOUJ等3 报道了中国地区的贝达喹啉的群体药动学研究，并深入研究了rs31995基因多态性与CL/F与稳态血药浓度Cmx,的关系,但是对特定合并其他疾病的耐药肺结核的患者仍缺少相关剂量调整方案。因此本课题组开展贝达喹啉治疗血药浓度测定，旨在通过构建耐药肺结核的患者群体药动学的模型，实现合并基础疾病患者的贝达喹啉的个体化用药。课题组在方法的开发过程中，为了弱化贝达喹啉色谱峰的拖尾提高检测的稳定性，流动相中水相加人甲酸铵，测定结果显示，水相加人甲酸铵所得的色谱峰峰型良好，综合考察2、5和10 mmolL-1l甲酸铵色谱峰的峰型和分离效果，最终选择了10 mmolL-1甲酸铵溶液作为水相，并确定“2.1 项下色谱条件。在前期扫描贝达喹啉母离子时发现，母离子m/z555.2在Q1一级平扫中相应较高，在Q2子离子的碎片中贝达喹啉出现了3个相应比较高的碎片离子，分别为58.1、2 2 9.0 和32 8.0；在实验过程中，我们同时探索了三个离子对的线性与相关质控稳定性情况，发现m/z555.2229.0离子对的线性稳定性要优于朱慧等报道的m/z555.258.1的离子对。因此依据离子的稳定性和分布,统计依据在标准曲线方法构建的离子线性考察，确定2 2 9.0 为贝达喹啉的检测子离子；综合考虑化合物的特性和保留时间，选择舍曲林作为内标基准物质，检测离子对 m/z 306.1158.9。研究指出，使用小体积的甲醇对人体血浆进行沉淀时存在相关的基质效应,因此在保证测定血药浓度的情况下将10 0 L的血浆使用30 0 L甲醇沉淀，从而减少基质效应对生物样本测定的影响。本课题组同时采用梯度洗脱的方式，通过调整流速、优化水相和有机相的比例，尽可能减少内源性物质的干扰。同时单个生物样本的测定时间为5.4min，测定使用了成本较低且组成简单的10 mmolL-I甲酸铵甲醇溶液，其中贝达喹啉出峰时间为1.7 5min，单针检测时间不超过6 min，适合于临床大样本的快速检测。在生物样本的检测限方面，贝达喹啉的质谱血浆浓度检测线性范围已经达到10 30 0 0 ng?mL-l,结合稀释效应稳定性实验，血浆中贝达喹啉的药物浓度的检测上限为8 0 0 0 ngmL-，可以实现对高于3000ng?mL-1生物样本的快速定量。综上所述，本研究成功建立了检测人体血浆中贝达喹啉浓度的LC-MS/MS方法，可用于检测耐药结核患者体内贝达喹啉的血药浓度。后期课题组将扩大相关样本量进行检测，同时收集贝达喹啉在耐药肺结核临床治疗有效性和安全性的相关数据,并回访相关患者不良反应的发生情况，为课题组进行糖尿病合并耐药肺结核患者中贝达喹啉群体药代25M:ugM药学与临床研究Pharmaceuticaland ClinicalResearch动力学建模提供服务，并完善其个体化用药的相关临床研究。参考文献1丁巧燕，张欢，马丽华，等德拉马尼血药浓度测定方法的建立及应用 中国药房，2 0 2 2，33(2 4)：5.2卢春容，房宏霞，陆普选，等WHO2021年全球结核病报告：全球与中国关键数据分析 .新发传染病电子杂志,2 0 2 1,6(4):36 8-7 2.3 FIORILLO M,SCATENA C,NACCARATO AG,et al.Bedaquiline,an FDA-approved drug,inhibits mitochon-drial ATP production and metastasis in vivo,by targetingthe gamma subunit(ATP5F1C)of the ATP synthaseJ.Cell death and differentiation,2021,28(9):2797-817.4聂文娟，周文强，初乃惠贝达喹啉药代动力学和药物相互作用研究进展 J中国防痨杂志，2 0 2 2，44(7):716-9.5谢莉，朱慧，高静韬，等贝达喹啉血药浓度在耐药肺结核治疗中的变化及其与QTc间期延长的相关性J中国防痨杂志，2 0 2 2,44(3):8.6】朱慧，刘忠泉，谢莉，等，贝达喹啉的HPLC-MS/MS检测方法建立及应用；耐药结核病临床诊治难点与热点问题专题研讨会，中国陕西西安，F，2 0 18 C 7COLLINS FS,VARMUS H.A new initiative on preci-sion medicineJ.N Engl J Med,2015,372(9):793-5.8 刘占中，闫家微，王亮，等治疗药物检测和药物基因检测对结核病精准治疗的作用 J中国处方药，2 0 2 1,19(2):13-5.9杨旭萍，邹素兰，蒋艳，等.LC-MS/MS同时测定人血浆中6 种抗真菌药物浓度 J中国现代应用药学，2021,38(17):2093-9.10钱亚芳，杨旭萍，蒋艳，等.LC-MS/MS法测定人血浆中比阿培南浓度 J.中南药学，2 0 2 3，2 1(2)：432-6.11中华医学会结核病学分会.中国耐多药和利福平耐药结核病治疗专家共识(2 0 19 年版)J.中华结核和呼吸杂志，2 0 19,42(10)：7 33-49.12牛玉兰，孔君，黄艳，等。影响耐多药肺结核早期疗效危险因素分析 .新发传染病电子杂志，2 0 2 3，8(5):15.13 ZOUJ,CHENS,RAOW,et al.Populationpharmacokineticmodelingofbedaquilineamongmultidrug-resistant pulmonarytuberculosisspatientsfrom ChinaJ.Antimicrob Agents Chemother,2022,66(10):e0081122.lethodEstablishment and Application for BedaquilineTherapeuticDIlotoring*WANG Zhongjian,CHEN Xialin,ZHANG Xia,ZHANG Xiangrong,CAO Hui,WANG YunjiDepartment of Pharmacy,the Second Hospital of Nanjing,Afiliated to Nanjing University of ChineseMedicine,Nanjing 210003,China;2Department of Tuberculosis,the Second Hospital of Nanjing,Affiliatedto Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210003,China;3Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,Ltd.,Nanjing 211112,ChinaABSTRACTObjective:To establish a method and apply it for the determination of plasma bedaquilineconcentrations.Methods:Human plasma samples containing bedaquiline were spiked with sertraline as aninternal standard.After protein precipitation with methanol,the samples were subjected to separation usinga Cis chromatographic column with a gradient elution of methanol and 10mmolL-l ammonium formate solu-tion.Detection was performed using electrospray ionization,and multiple reaction monitoringg(MRM)wasemployed for the quantitative determination of bedaquiline and sertraline,with ion transitions at m/z555.2229.0 and m/z 306.2159.0,respectively.Results:The linear range for the determination of be-daquiline was found to be 0.010 to 3.0 gmL-1(r=0.9995),with a quantification limit of 0.010 gmL-l.The validated method conformed to the requirements for analysis of biological samples.For the monitoringof bedaquiline blood concentrations during treatment in six multidrug-resistant tuberculosis(MDR-TB)pa-tients,the peak plasma concentration(Cmx)of bedaquiline on the 7h day of treatment was(3.48 0.70)g:mL-,with a time to peak concentration(tmx)of(5.33 1.03)hours,and a half-life(ti2)of(18.73 6.39)hours.The area under the concentration-time curve(AUClas)was 50.16 9.74 ghmL-l,and the meanresidence time(MRT)was(10.62 0.69)hours.The apparent clearance(CL/F)was(4.83 1.34)Lh-,andthe apparent volume of distribution(V/F)was(123.55 24.19)L.Conclusions:The established LC-MS/MSanalysis method has good specificity,high sensitivity,accuracy and precision,and can be used to determinebedaquiline plasma concentrations in MDR-TB patients.KEYWORDSLC-MS/MS;Bedaquiline;Blood concentration;Multidrug resistant tuberculosis