HPV操作步骤.doc

HPV操作步骤详细一、 试剂配制区、样品处理区、核酸扩增区。步骤注意事项同时准备关紫外灯。开排气扇。申请单及其对应的标本编号，相应个数离心管准备。标本震荡30秒/个阴阳质控管视情况做，若做，加试剂的顺序是先阴最后阳且在放入扩增仪前不做任何处理。将试剂拿出来解冻、预热，预热一管蒸馏水、杂I、杂II、溶II。这里也可以同时PCR管编号转移标本液约1ml于1ml的离心管粘液不要吸取，不要过猛，不接触离心管内圈离心5分钟，12000转/分开干式恒温仪去上清液倒（准备吸纸）或用移液枪（沿页面慢慢吸下去）加生理盐水，震荡至均匀酌情加入该步离心5分钟，12000转/分或者这步开干式恒温仪去上清液倒（准备吸纸）或用移液枪（沿页面慢慢吸下去）加入DNA提取液50l并震荡至均匀这里注意吸取上珠子放入干式恒温仪10010分钟按R/S键调节时间，必须要100才能放入并计时这里可以配杂I、杂II、溶II。溶II放室温，杂I、杂II预热离心5分钟，12000转/分PCR管编号吸取5l上清液至PCR管不可破蜡，也不可离口太近顺势离心转速达到6000转/分即可将PCR管放入PCR扩增仪扩增约2小时20分钟注意检查程序，选择程序（共两个程序）该区与产品分析区的门最好别打开程序二开始的时候或之前（若标本量大）准备相应的10ml的离心管（加4ml杂I，杂I继续预热）和膜条，两者都要编号冰水混合盒转移PCR管当程序二运行结束的时候，必须（切记很关键）马上转移PCR管二、 产物分析区。步骤注意事项同时准备转移PCR管里的液体50l至10ml离心管争取一次性吸取成功PCR管在冰水混合盒一般放置2分钟以上再转移，从蜡中心突破用无水乙醇将枪头擦拭水浴恒温摇床杂交1小时一定要盖好盖子并且尽量固定，同时控制好时间是否固定可以摇荡看看膜条取出置于蒸馏水管漂洗同时弃10ml离心管结合液配好后，便可以将膜条从蒸馏水管里取出放入结合液中。结合液、洗脱液、显色液要现配配结合液，以5条膜条为基数：15ml杂I+40l溶I。即每条膜条为：3ml杂I+8l溶I。结合管里水浴恒温摇床10分钟洗净蒸馏水管，再配一管蒸馏水放于水浴恒温摇床预热洗脱液配20ml杂II将膜条从结合管转移至洗脱管置水浴恒温摇床10分钟洗净结合管倒掉杂II，加入溶II这里不用将膜条取出，直接水浴恒温摇床，摇到显色液配好即可配置显色液。每条膜条：3ml溶II+0.3ml溶III+1.5l溶IV。溶III最后加，最关键倒掉溶II，将膜条转移至显色管，显色5分钟洗净洗脱管若是前面忘了配一管蒸馏水，这里可以配，但是要放在水里预热膜条从显色管里取出放入蒸馏水管稍微漂洗（约12分钟）显色液先不要倒掉，看显色效果如何，若可以便可以倒掉，洗净显色管将膜条取出放在A4纸上肉眼读取结果并发报告单洗净显色管和蒸馏水管用无水乙醇擦拭枪头、仪器和桌面。关排气扇。开紫外灯。