免疫增殖性疾病的免疫学检验.pptx
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1、第九单元 免疫增殖性疾病免疫学检验免疫增殖性疾病免疫学检验免疫增殖性疾病的免疫学检验第1页概概 述述v免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞异常增生为特征疾病,其表现往往有免疫功效异胞异常增生为特征疾病,其表现往往有免疫功效异常及免疫球蛋白质和量改变。常及免疫球蛋白质和量改变。v与免疫学检验最为亲密是与免疫学检验最为亲密是B淋巴细胞异常增殖或其淋巴细胞异常增殖或其它造成免疫球蛋白异常免疫球蛋白病,免疫球蛋白它造成免疫球蛋白异常免疫球蛋白病,免疫球蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症。病主要表现为高免疫球蛋白血症。免疫增殖性疾病的免疫学检验第2页v
2、当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时,普通先以血清蛋白区浆细胞恶变等免疫球蛋白病时,普通先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本周蛋白定性作带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本周蛋白定性作为初筛试验。为初筛试验。v假如发觉有异常球蛋白区带,继而进行免疫固定电泳、假如发觉有异常球蛋白区带,继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做深入定量分析和免疫球免疫球蛋白亚型定量等检测做深入定量分析和免疫球蛋白分类判定。蛋白分类判定。免疫增殖性疾病的免疫学检验第3页试验一试验一血清免疫固定电泳试验血清免疫固定电泳试验免
3、疫增殖性疾病的免疫学检验第4页试验目标试验目标v本试验以血清免疫固定电泳试验为例进行实习本试验以血清免疫固定电泳试验为例进行实习v经过实习,熟悉血清免疫固定电泳试验过程及注意经过实习,熟悉血清免疫固定电泳试验过程及注意事项;掌握血清免疫固定电泳检测事项;掌握血清免疫固定电泳检测M蛋白基本原理蛋白基本原理与临床意义。与临床意义。免疫增殖性疾病的免疫学检验第5页试验原理试验原理v 将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后,将固定剂将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后,将固定剂和各型和各型Ig及其轻链抗血清加于凝胶表面各自泳道上,经孵育及其轻链抗血清加于凝胶表面各自泳道上,经孵育让固定剂和抗血清
4、在各自泳道对应凝胶内渗透并扩散,若让固定剂和抗血清在各自泳道对应凝胶内渗透并扩散,若有对应抗原存在,则在适当位置形成抗原抗体复合物并沉有对应抗原存在,则在适当位置形成抗原抗体复合物并沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗,去除未结合蛋白质,淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗,去除未结合蛋白质,仅保留贮存在凝胶内抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电仅保留贮存在凝胶内抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被泳参考道和抗原抗体沉淀区带被Acide Violet染色液着色。染色液着色。依据电泳移动距离分离出单克隆组分。依据电泳移动距离分离出单克隆组分。免疫增殖性疾病的免疫学检验第6页试剂与器材试
5、剂与器材vAcide Violet染色液:用染色液:用1L 10%冰醋酸溶解冰醋酸溶解Acide Violet。v脱色液:用脱色液:用1L蒸馏水溶解蒸馏水溶解Citric Acid Destain。v清洗液清洗液:8L蒸馏水溶解蒸馏水溶解Tris-Buffered Saline。v电泳仪:电泳仪:spife 3000全自动电泳仪。全自动电泳仪。免疫增殖性疾病的免疫学检验第7页Spife 3000全自动电泳仪全自动电泳仪免疫增殖性疾病的免疫学检验第8页操作步骤操作步骤v样本处理:样本处理:用生理盐水将血清标本适当稀释后备用,其中同一份血清用生理盐水将血清标本适当稀释后备用,其中同一份血清第一泳道
6、样本稀释第一泳道样本稀释3倍,第二至第六泳道样本稀释倍,第二至第六泳道样本稀释5倍。倍。免疫增殖性疾病的免疫学检验第9页v区带电泳区带电泳 上样上样 胶片准备胶片准备 电泳电泳免疫增殖性疾病的免疫学检验第10页v沉淀反应沉淀反应 加抗血清加抗血清洗涤、烘干洗涤、烘干着着 色色 免疫增殖性疾病的免疫学检验第11页结果分析结果分析 v对染色烘干后胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白分对染色烘干后胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白分子量参考道,观察第二至第六泳道有没有对应特异性单克子量参考道,观察第二至第六泳道有没有对应特异性单克隆免疫球蛋白条带。如图隆免疫球蛋白条带。如图12-1所表示所表示,其
7、中其中sp泳道为血清蛋泳道为血清蛋白参考道,由下至上分别为白蛋白、白参考道,由下至上分别为白蛋白、1球蛋白、球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白。第球蛋白。第2、3、4、5、6泳道分别为泳道分别为IgG、IgA、IgM、抗血清泳道。抗血清泳道。免疫增殖性疾病的免疫学检验第12页免疫增殖性疾病的免疫学检验第13页注意事项注意事项v标本需取新鲜血清进行分析,为防止抗原过剩引发带现象,标本需取新鲜血清进行分析,为防止抗原过剩引发带现象,血清于加样前应先作适当稀释并混匀。血清于加样前应先作适当稀释并混匀。v总免疫球蛋白水平总免疫球蛋白水平20g/L稀释剂量加倍,当总免疫球蛋白稀释剂量加倍,
8、当总免疫球蛋白水平水平5g/L稀释剂量减半(除了稀释剂量减半(除了ELP泳道)。泳道)。v一些样本(尤其是含有冷球蛋白或冷凝胶)冷藏或冰冻后,一些样本(尤其是含有冷球蛋白或冷凝胶)冷藏或冰冻后,可能变得粘稠或混浊。这种样本可能因为扩散障碍而存在可能变得粘稠或混浊。这种样本可能因为扩散障碍而存在点样问题。在这么情况下,加点样问题。在这么情况下,加25l液化剂于液化剂于75l血清中,混血清中,混匀匀15s。然后按要求程序继续进行。然后按要求程序继续进行。免疫增殖性疾病的免疫学检验第14页v一些单克隆蛋白质可能因多聚体而造成全部免疫固定一些单克隆蛋白质可能因多聚体而造成全部免疫固定泳道上均出现单克隆
9、片段。在这么情况下可加泳道上均出现单克隆片段。在这么情况下可加25l还还原剂(原剂(1-巯基乙醇)于巯基乙醇)于75l血清混匀并令其反应最血清混匀并令其反应最少少15min(至多(至多3h)后按要求程序继续进行。后按要求程序继续进行。v在电泳之前,凝胶与电泳槽贴合面充满电泳介质,并在电泳之前,凝胶与电泳槽贴合面充满电泳介质,并确保二者之间无气泡。确保二者之间无气泡。免疫增殖性疾病的免疫学检验第15页v在抗血清加入血清加样孔后,确保血清与凝胶之间无在抗血清加入血清加样孔后,确保血清与凝胶之间无气泡。气泡。v染色之前胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤,以出去染色之前胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤,以出
10、去游离血清和抗血清成份,降低染色后凝胶背景色。游离血清和抗血清成份,降低染色后凝胶背景色。免疫增殖性疾病的免疫学检验第16页临床应用临床应用v本法可对各类本法可对各类Ig及其轻链进行分型,最惯用于临床及其轻链进行分型,最惯用于临床常规常规M蛋白分型与判定。通惯用于单克隆蛋白分型与判定。通惯用于单克隆Ig增殖病,增殖病,单克隆单克隆Ig病,本周蛋白和游离轻链病、多组份单克病,本周蛋白和游离轻链病、多组份单克隆隆Ig病,重链病、脑脊液寡克隆蛋白判别、多克隆病,重链病、脑脊液寡克隆蛋白判别、多克隆Ig病诊疗和判别诊疗。病诊疗和判别诊疗。v免疫固定电泳优点是分辨率高、敏感度高、操作周免疫固定电泳优点是
11、分辨率高、敏感度高、操作周期短(仅需数小时)、结果易于分析。期短(仅需数小时)、结果易于分析。免疫增殖性疾病的免疫学检验第17页思索题思索题v结合试验室免疫固定电泳分析系统,简述血清结合试验室免疫固定电泳分析系统,简述血清免疫固定电泳影响原因及其克服免疫固定电泳影响原因及其克服方法。方法。温州医学院温州医学院 陶志华陶志华免疫增殖性疾病的免疫学检验第18页试验二试验二 血清血清IgG定量检测可定量检测可汇报范围评价试验汇报范围评价试验 免疫增殖性疾病的免疫学检验第19页v可汇报范围指能够汇报全部结果范围,包含两种类型范可汇报范围指能够汇报全部结果范围,包含两种类型范围,即分析测量范围和临床可汇
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