咪喹莫特诱导血热型银屑病模型体内微环境变化观察.pdf
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1、DOI:10.19893/ki.ydyxb.2023-0302第 22 卷第 1 期2024 年 3 月延安大学学报(医学科学版)Journal of Yanan University(Medical Science Edition)Vol.22 No.1Mar.2024咪喹莫特诱导血热型银屑病模型体内微环境变化观察段亚倩,王宇航,张玉桐,马佳蕊,赵忻未,曹朵,赵菊梅,张正祥*(延安大学医学院,陕西 延安 716000)摘要:目的评价采用干姜、肉桂灌胃结合咪喹莫特乳膏涂抹,建立血热型银屑病动物模型的皮损和体内微环境变化情况。方法48只8周龄健康BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为正常对照组和银
2、屑病模型组。第1天起,模型组给予0.9 g/mL干姜、肉桂水煎液,按0.1 mL/10 gd剂量灌胃,对照组给予生理盐水0.1 mL/10 gd剂量灌胃,持续12 d。灌胃第6天起,模型组背部涂抹咪喹莫特乳膏42 mg,对照组背部涂抹等量凡士林乳膏,每天观察皮损情况,持续7 d。第13天,小动物麻醉机麻醉后,采集两组小鼠血液,ELISA法检测两组小鼠血清中肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-)、干扰素-(interferon-,IFN-)、白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)含量
3、变化;取两组小鼠背部涂抹处皮肤,制作病理学组织切片观察皮损情况。结果模型组小鼠涂抹部位皮肤表皮增厚,表面凹凸不平,有红斑散在分布。显微镜下显示表皮角化不全、棘层增厚、皮脂腺增多;血清中TNF-、IFN-、IL-21、IL-17水平均升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论BALB/c小鼠经干姜、肉桂水煎液灌胃12 d,期间第6天起背部加涂咪喹莫特乳膏,连续涂抹7d,成功构建的血热型银屑病动物模型,皮损变化和体内微环境改变符合银屑病患者特点。关键词:银屑病;BALB/c小鼠;银屑病动物模型;干姜;肉桂;咪喹莫特乳膏中图分类号:R965 文献标识码:A 文章编号:1672-2639
4、(2024)01-0015-05Observation of microenvironmental changes in a blood heat psoriasis model induced by imiquimodDUAN Yaqian,WANG Yuhang,ZHANG Yutong,MA Jiarui,ZHAO Xinwei,CAO Duo,ZHAO Jvmei,ZHANG Zhengxiang*(Medical College of Yanan University,Yanan 716000,China)Abstract:Objective To evaluate the chan
5、ges in skin lesions and in vivo microenvironment of an animal model of blood heat psoriasis using Rhizoma Zingiberis and Cinnamomum Cassia combined with imiquimod cream application.Methods 48 8-week-old healthy BALB/c mice(half male and half female)were randomly divided into a normal control group a
6、nd a psoriasis model group.Starting from the 1st day,the model group was given 0.9 g/mL of Rhizoma Zingiberis and Cinnamomum Cassia decoction by gavage at a dose of 0.1 mL/10 gd,while the control group was given 0.1 mL/10 gd of physiological saline by gavage for 12 days.Starting from the 6th day of
7、gastric lavage,the model group applied 42 mg of imiquimod cream on the back,while the control group applied an equal amount of vaseline cream on the back.The skin lesions were observed daily for 7 days.On the 13th day,after anesthesia with a small animal anesthesia machine,blood was collected from t
8、wo groups of mice,and ELISA was used to detect the levels of serum in both groups of tumor necrosis factor-(TNF-),interferon-(IFN-),基金项目:延安大学科研计划项目(YDY2020-21);陕西省大学生创新创业训练计划项目(S202110719103)作者简介:段亚倩(1997),女,陕西渭南人,在读硕士研究生。研究方向:中药药理学。通信作者:张正祥(1973),男,山东鄄城人,硕士,副教授。研究方向:中药药理学。E-mail:15第 22 卷 延安大学学报(医学科
9、学版)第 1 期interleukin-21(IL-21)and interleukin-17(IL-17).Skin samples were taken from the back of two groups of mice for pathological tissue sectioning to observe the condition of skin lesions.Results The skin epidermis at the application site of the model group mice thickened,with uneven surface and
10、scattered erythema.Under the microscope,it showed incomplete keratinization of the epidermis,thickening of the spinous layer,and increased sebaceous glands;The levels of TNF-,IFN-,IL-21 and IL-17 in serum both increased,and compared with the control group,the difference was statistically significant
11、(P0.05).Conclusion BALB/c mice were orally administered a decoction of Rhizoma Zingiberis and Cinnamomum Cassia for 12 days,and from the 6th day onwards,imiquimod cream was added to the back for 7 consecutive days.A blood heat psoriasis animal model was successfully constructed,and the changes in sk
12、in lesions and internal microenvironment were consistent with the characteristics of psoriasis patients.Key words:Psoriasis;BALB/c mice;Animal model of psoriasis;Rhizoma Zingiberis;Cinnamomum cassia;Imiquimod cream银屑病是一种常见的人类慢性免疫原性炎症性皮肤病,尚无有效治疗药物,成为当今皮肤病的防治难题。目前,有30多个国家报道了银屑病发病率、患病率等流行病学信息。患病率东亚最低为0
13、.14%,大洋洲最高为 1.99%,全球成人中的患病率为0.51%11.43%,儿童中的患病率最高为1.37%1。2017年我国患病率已达0.69%2。银屑病患者除有典型皮疹累及受损器官、伴有其他炎症性疾病,还有抑郁、焦虑等心理性疾病,严重影响患者的生活质量和身心健康3。近年来研究4发现,银屑病患者血清肿瘤坏死因子-(Tumor necrosis factor-,TNF-)、白细胞介素 17(Interleukin-17,IL-17)等炎症因子显著升高,并可能参与了银屑病的发病,且与病情活动度及严重程度有关。咪喹莫特乳膏诱导 BALB/c小鼠建立的血热型银屑病动物模型,被用来研究银屑病发病机制
14、或评价药物疗效,而该模型小鼠皮损变化和体内细胞因子变化是否与银屑病患者相似鲜有报道。本研究拟采用干姜、肉桂灌胃结合咪喹莫特乳膏背部涂抹,建立血热型银屑病动物模型,检测该银屑病模型小鼠皮损和血清细胞因子变化,判断其能否模拟银屑病患者发病情况,并反映银屑病患者体内微环境变化,为该模型在银屑病发病机制和药物治疗探索方面的应用提供前期实验基础。1材料与方法1.1实验动物SPF级BALB/c小鼠48只,8周龄,雌雄各半(雄性体重2025 g,雌性体重1520 g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号:SCXK(京)2021-0006)。SPF级环境下(西安交通大学医学部实验动物中心)饲养,
15、相对温度2023,相对湿度50%70,通风条件良好,自由饮水饮食。1.2药物与试剂干姜(产自四川犍为)、肉桂(产自广西防城港),咪喹莫特乳膏(四川明欣药业有限责任公司,国药准字H20030128,规格:3 g/支)。凡士林乳膏(山东赤兔马医疗科技有限公司,规格:50 mL),薇婷脱毛膏(法国薇婷,规格:200 mL),异氟烷(瑞沃德,货号R510-22,规格:100 mL)。HE染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,货号G1120,规格:100 mL)。小鼠血清TNF-、IFN-、IL-17、IL-21的ELISA试剂盒(江苏酶免实业有限公司,货号 MM-0132M1、MM-0182M1、MM-
16、0170M1、MM-0688M1)。1.3仪器电子天平(梅勒特-托利多仪器有限公司,型号:ME204E),小 动 物 麻 醉 机(瑞 沃 德,型 号:R583S),显微镜(Nikon,型号80i)、显微数码摄像头(Nikon,型号DS-Ri1),酶标仪(瑞士帝肯,型号Infinite M200)等。1.4干姜肉桂煎液制备将干姜、肉桂按1 1称量后,凉水浸泡30 min,随后放于砂锅中先用大火煮沸,最后小火煎煮15 min,制成浓度为0.9 g/mL的水煎液。1.5动物分组与处理8周龄BALB/c小鼠称重后,放入小动物麻醉机的诱导麻醉盒预麻醉。待小鼠麻醉后,将其仰卧位固定,持续面罩吸入麻醉(麻醉
17、剂为异氟烷)。薇婷脱毛膏进行背部脱毛,裸露皮肤22 cm2。然后以随机数字表法将48只小鼠分为2组,每组24只。空16咪喹莫特诱导血热型银屑病模型体内微环境变化观察白组(control):生理盐水灌胃,第6 d开始背部均匀涂抹凡士林乳膏,持续7 d;模型组(model):0.9 g/mL的干姜、肉桂煎液灌胃,第6 d开始背部均匀涂抹咪喹莫特乳膏,持续7 d。灌胃液体体积为0.1 mL/10 gd,涂抹乳膏质量均为42 mg/d。第6 d12 d观察小鼠一般情况、皮损肥厚、红斑和鳞屑情况。第13天,用麻醉机将小鼠麻醉后,压迫小鼠一侧眼球并用镊子迅速摘除,Eppendorf试管收集血液。之后,安乐
18、死处死小鼠,取涂抹处皮肤,病理切片HE染色,显微镜下观察,ELISA 法检测血清中 TNF-、-干扰素(Interferon-,IFN-)、IL-21、IL-17含量变化。1.6统计学方法采用 SPSS 24.0 和 GraphPad Prism 8.2 软件进行统计分析和作图,计量资料以(x s)表示,通过t检验进行分析,检验水准为双侧=0.05。2结果2.1小鼠背部皮损肉眼变化空白组凡士林涂抹7 d后,小鼠涂抹部位皮肤颜色、形态正常,表面平整(图1A);模型组咪喹莫特涂抹7 d后,小鼠背部皮损隆起明显,边缘清晰,有白色鳞屑成片附着,红色、紫红色斑块散在分布(图1B)。建模期间,两组动物无死
19、亡,精神状态良好,活动适中,反应敏捷,食量、粪尿正常。2.2HE染色观察小鼠背部皮损组织显微镜下空白组小鼠表皮较薄,角质层、棘层和基底层细胞完整,未见炎性细胞浸润(图2A)。模型组小鼠皮肤组织镜下结构角化不全(图2Ba)、棘层增厚,向下形成突起(图 2Bb)、皮脂腺增多(图2Bc)。结合咪喹莫特乳膏诱导小鼠皮肤组织变化和血清检测结果,确定咪喹莫特乳膏涂抹能够诱导小鼠发生银屑病样变化。2.3ELISA检测小鼠血清中相关细胞因子变化ELISA法检测发现,模型组小鼠血清中IL-21、IL-17、TNF-、IFN-含量均升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05,图3)。3讨论银屑病,又名“干癣
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