细胞酸性蛋白碱性蛋白的显示.doc
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1、 . 细胞酸性蛋白碱性蛋白的显示 【目的要求】 一、熟悉细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的化学反应染色一般原理及方法 二、了解蟾蜍红细胞内酸性蛋白和碱性蛋白在细胞中的分布 【实验准备】 一、实验材料:活蟾蜍。 二、试剂:二甲苯、70乙醇、5三氯醋酸、乙醚1NHCl。 三、染色液。 (一)三种母液(实验前配制) 甲:0.2固绿染液 乙:1/75N HCl(稀释一倍后pH=2.02.5) 丙:0.05Na2C03(稀释一倍后pH=8.08.5) (二)二种蛋白质溶液(实验时混合) 1、酸性蛋白固绿染液 甲+乙(1:1),即为0.1酸性固绿染液(1/150NHClPH=2.02.5)o 2、碱性蛋白固绿染液
2、 甲+丙(1:1),即为0.1碱性固绿染液(0.025Na2C03,PH=8.08.5) 三、Schiff氏试剂(亚硫酸晶红液) 四、器械:染色器皿,水浴箱,取材制片器械,显微镜等o 【实验原理】 蛋白质的基本组成单位是氨基酸,它们同时具有氨基和羧基(在溶液中主要以NH3+,COO式存在),而自由氨基和羧基的游离取决于溶液的pH值,当蛋白质处于酸性溶液时,由于该溶液中正离(OH)多,从而抑制蛋白质中的COOH电离,于是造成蛋白质带正电荷多;当蛋白质处于碱性溶液时,由于该溶液中负离子(OH)多,从而促使蛋白质中的COOH都电离成COO,于是造成蛋白质带负电荷多;当蛋白质处于某一种pH溶液时,它恰
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