基于Rho_Rock通路研究麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的机制研究.pdf

基金项目:山东省中医药科技项目(.)国家级大学生创新创业训练计划项目(.)作者简介:于凌群女研究方向:血管疾病:.通信作者:杨莹女硕士讲师研究方向:血管疾病:.基于/通路研究麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的机制研究于凌群高伟萍史明仟辛新王萌媛曹桂云杨莹(.山东中医药大学山东 济南.山东宏济堂制药集团股份有限公司山东 济南)摘要:目的 观察麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的作用及可能的作用机制 方法 只 大鼠随机分为假手术组、模型对照组和麝香心痛宁组 采用球囊损伤法制备大鼠腹主动脉血管损伤模型造模后灌胃给予大鼠麝香心痛宁片()后将大鼠处死取其血清及腹主动脉主动脉血管进行 染色检测血清超氧化物歧化酶()、丙二醛()、单核细胞趋化因子()及谷胱甘肽过氧化物酶()含量 法检测大鼠血管组织一氧化氮()、内皮素()、血管内皮生长因子()和白细胞介素()的含量实时荧光定量 和 检测、和 和蛋白的表达 结果 与假手术组比较模型对照组大鼠腹主动脉血管组织内膜增生腹主动脉血管部位弹力变弱且管壁增厚 麝香心痛宁治疗后血管内膜损伤程度减轻 与模型对照组相比麝香心痛宁组大鼠血清、活性升高、活性降低(.)血管组织 含量升高、和 含量降低(.)/通路相关因子、的表达降低(.)结论 麝香心痛宁可抑制血管损伤后内膜增生其作用机制可能与抑制/信号通路有关关键词:/通路麝香心痛宁内膜增生动脉球囊损伤中图分类号:.文献标志码:文章编号:():././(.):().().(.).(.).药学研究 ./(.)./.:/目前心脑血管疾病发病率、致死率均居疾病首位动脉粥样硬化()是心血管疾病发病最重要的一个病理生理基础 对于存在血管狭窄等严重威胁生命的 患者临床治疗手段包括血管成形术、支架植入、经皮冠状动脉介入治疗()等 是目前非常有效的治疗手段但手术过程损伤血管极易导致术后血管内膜增生引起继发性的血管再狭窄及支架内血栓形成等问题 腹主动脉球囊损伤术所导致的血管内皮剥落和平滑肌细胞增生与人类 术所引起冠脉狭窄的病理变化过程相似可模拟人类 术血管内膜增生病变过程研究表明/信号通路在血管损伤后内膜增生的发生过程中有着重要的作用 发生过程中血管 表达异常升高可促进激活 通路导致炎症因子的积聚进而引起血管损伤后新生内膜的增生 抑制/信号通路可起到保护血管内皮的作用维持血管稳态/信号通路在增强胆固醇摄取和泡沫细胞形成中也发挥了重要的作用 麝香心痛宁由延胡索、川芎、人参、麝香、苏合香、冰片六味中药组成具有行气开窍、活血化瘀、通络止痛之功效用于治疗胸痹冠心病气滞血瘀证者 麝香心痛宁能否抑制血管损伤后内膜增生还未见报道本研究建立腹主动脉球囊损伤大鼠模型观察麝香心痛宁的药理作用并探讨其作用机制 材料与方法.实验动物 取健康成年雄性 大鼠 只体重 由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供实验动物使用许可证号:(鲁)实验动物伦理号:饲养条件:温度为()相对湿度为 光/暗周期为 .试剂与仪器 麝香心痛宁(山东宏济堂药业集团有限公司)蛋白定量试剂盒(山东思科捷生物技术有限公司)凝胶快速制备试剂盒(上海雅酶生物医药科技有限公司)显影液、(上海碧云天生物技术有限公司)电泳液、转膜液、(公司)抗体(公司)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔(北京中山金桥生物科技有限公司)多聚甲醛缓冲液(公司)酶联免疫吸附试剂盒(江苏晶美生物科技有限公司)化学试剂盒(南京建成生物工程研究所)正置光学显微镜(公司)酶标仪(德国 公司)多色荧光成像系统(公司)实时荧光定量 仪(公司).模型制备及分组给药取健康成年 大鼠 只随机分为假手术组、模型对照组、麝香心痛宁()组 大鼠术前禁食不禁水 后称重腹腔注射 的戊巴比妥麻醉后于颈部正中做切口进行手术操作 正中纵向做 左右切口钝性分离皮下组织 模型对照组及麝香心痛宁组分离大鼠的左侧颈动脉并用外科缝合线将其颈总动脉血管远心端结扎用眼科剪在血管近心端剪开一个 形创口将浸润过酒精、肝素的球囊(.)从 形创口送至腹主动脉(送入深度约 )将 注射器注入肝素充盈球囊并回拉旋转球囊导管至左颈总动脉处将球囊抽至负压再送入血管反复缓慢牵拉球囊 次 确保血管损伤后拉出球囊结扎颈动脉清洗手术创口后缝合假手术组只进行左侧颈总动脉血管的分离用外科手术缝合线结扎并不用球囊进行血管内部损伤麝香心痛宁组大鼠灌胃给予 的药物 每天 次连续 模型对照组和假手术组同法给予等容积的生理盐水 大鼠于末次给药 后处死下腔静脉取血分离腹主动脉取两厘米长腹主动脉置于 多聚甲醛溶液剩余血管及器官组织置于 冰箱保存.指标检测.大鼠血管组织 染色 大鼠腹主动脉血管组织石蜡包埋、切片后进行 染色随后置于光学显微镜下观察组织病理变化.大鼠血清、及 含量检测 用化学试剂盒测定血清氧化相关标记物、含量.法检测大鼠血管组织、和 的含量 采用双抗体夹板法测定血管组织相关因子的浓度.实时荧光定量 取存于 冰箱的药学研究 .血管组织 抽提总 按逆转录试剂盒说明书以总 为模板逆转录 按 试剂盒以 为内参检测大鼠血管组织中相关因子的 水平.取大鼠血管 漂洗后剪成小块加入蛋白裂解液冰浴后匀浆器匀浆 离心 取上清液使用 蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度 制胶电泳转膜将蛋白转移到 膜上脱脂奶粉室温封闭.加入一抗 孵育过夜 用 洗 遍 后加入山羊抗兔 室温孵育 加入显影液观察条带并拍照.统计学分析 采用 .统计软件实验数据用 表示组间比较采用单因素方差分析()进行数据统计分析.差异有统计学意义 结果.麝香心痛宁对主动脉血管内膜损伤的影响假手术组大鼠腹主动脉血管内膜结构基本正常 模型对照组大鼠腹主动脉血管部分部位弹力变弱且管壁增厚内膜血管平滑肌细胞增多中膜血管平滑肌细胞排列紊乱血管管腔呈向心或偏心性狭窄 麝香心痛宁组大鼠腹主动脉血管内皮剥脱内膜增生等病理现象均有改善(见图).麝香心痛宁对大鼠体重的影响与模型对照组相比较麝香心痛宁给药、周后大鼠体重无统计学差异图 麝香心痛宁()对主动脉血管内膜的影响.麝香心痛宁对大鼠血清相关指标的影响与假手术组相比模型对照组大鼠血清中 和 下降而 和 增加(.)与模型对照组相比麝香心痛宁可增加 和 的含量而降低 和 的含量(.)差别有统计学意义.麝香心痛宁对大鼠血管组织相关指标的影响 与假手术组相比模型对照组大鼠腹主动脉血管组织 含量下降而、及 增加(.)与模型对照组相比麝香心痛宁可增加 的含量而降低、及 的含量(.)差别有统计学意义.麝香心痛宁对大鼠血管组织/通路相关因子 和蛋白表达的影响与假手术组相比模型对照组大鼠腹主动脉血管组织、和 的 和蛋白水平均升高(.)与模型对照组相比麝香心痛宁可降低、和 的 和蛋白的表达(.)差别有统计学意义(见图).法检测、和 的表达.法检测、和 蛋白的表达图 麝香心痛宁对大鼠血管组织通路相关因子表达的影响()注:与假手术组相比.与模型对照组相比.药学研究 .讨论 术和冠状动脉搭桥等都是治疗冠心病的主要手段而术后支架内再狭窄也是导致心血管事件发生率升高的主要因素 血管内膜炎性细胞浸润、内皮细胞增生、血管平滑肌()迁移至内膜等导致内膜增厚是管腔狭窄的主导因素因而如何抑制血管内膜增厚、防止血管发生再狭窄是心血管疾病的研究热点之一 目前临床上用于 术的药物主要有雷帕霉素、紫杉醇等 此类药物阻止损伤部位血管平滑肌增殖迁移的同时也会干预损伤血管内皮化这就会引起血管迟发性再狭窄以及迟发性血栓的生成导致 术后心血管不良事件的发生 因此寻找安全有效的治疗血管再狭窄药物具有重要的临床研究意义研究发现大鼠球囊损伤后 可引起 增殖、迁移 后内膜增生达到最高峰 模型对照组内膜呈进行性弥漫性增厚其中以平滑肌为主中膜细胞排列紊乱管腔面积明显缩小本研究建立大鼠腹主动脉球囊损伤术模型发现假手术组管壁结构完整血管内膜呈现良好的连续性中膜边缘可见 规则排列 模型对照组大鼠与假手术组相比大鼠主动脉血管内皮剥落内膜明显增厚血管腔变窄 麝香心痛宁组大鼠腹主动脉内皮剥脱、内膜增厚、血管平滑肌迁移等病理现象减少表明麝香心痛宁可抑制腹主动脉球囊损伤大鼠血管内膜增生、和 是反映血管内皮功能的因子 具有舒张血管平滑肌抑制炎症因子和血小板黏附于血管的作用 可促进血管平滑肌细胞增殖并收缩血管 可促进内皮细胞的迁移和增殖 麝香心痛宁可调节血管内皮相关因子的含量从而抑制内膜增生的发展进程 通过检测大鼠血管炎症相关因子 表达发现麝香心痛宁可降低 表达 此外麝香心痛宁可抑制/通路相关因子的表达 综上所述麝香心痛宁具有保护血管内膜、抑制内膜增生的作用并具有抗氧化损伤和抗炎作用 麝香心痛宁抑制血管损伤后内膜增生的药理作用机制可能与其抑制/信号通路相关参考文献:.:.():.赵若琳郭盈盈阮益亨等.中医为主治疗胰腺癌的疗效评价.中华中医药杂志():.薛文静杨一格柴若宁等./信号通路与炎症细胞因子的研究进展.心脏杂志():.李君.人参皂苷 通过/通路保护脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞的机制研究.延吉:延边大学.张琼张向农涂秀华等.麝香心痛宁片治疗冠心病心绞痛(气滞血瘀证)的临床研究.中国临床药理学与治疗学():.():.尉希清刘帅牛珩等.黄芪甲苷通过抑制血小板源性生长因子表达减轻大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生.中国老年学杂志():.瞿凯邱菊辉王贵学等.血管内皮细胞屏障功能的血流动力学调控及其与动脉粥样硬化的关系.中国动脉硬化杂志():.():.(收稿日期:)(上接第 页)彭煜贾默然邵轶群等.白花丹素调控/信号通路诱导膀胱癌细胞铁死亡.中国实验方剂学杂志():./:.():.():.:.():.():.(收稿日期:)药学研究 .