MicroRNA的生物表达与结核病诊断和治疗监测的相关性及其对结核病易感基因表达调控的研究.pdf
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1、58中国现代药物应用2024年4月第18卷第7期Chin J Mod Drug Appl,Apr 2024,Vol.18,No.7MicroRNA 的生物表达与结核病诊断和治疗监测的 相关性及其对结核病易感基因表达调控的研究谭珂于艳红孙娇孙秀华王悦贾琳邢黎莉张威【摘要】目的探究微小核糖核酸(MicroRNA)对结核病诊断和治疗监测及易感基因表达调控的意义。方法选取 136 例肺结核患者作为肺结核组,另选择 142 例健康体检者作为对照组。以实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测两组血清 hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA 水平;检测干扰素调节因子 8 基因(
2、IRF8)、循环换血 RNA-103571(hsa-circRNA-103571)、-干扰素(IFN-)水平。比较两组血清 hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA 的表达量;比较两组血清 IRF8、hsa-ciceRNA-103571、IFN-水平;分析肺结核患者 hsa-miR-20b 与 IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-的相关性;回归分析肺结核发生的影响因素;分析血清 hsa-miR-20b 对肺结核的诊断效能。结果肺结核组患者血清 hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA 的表达水平分别为(3.350.20)、(2
3、.940.23)、(0.410.15),对照组分别为(1.010.23)、(1.020.13)、(1.030.11);与对照组相比,肺结核组患者血清 hsa-miR-20b、GBP5 mRNA 的表达水平均升高,CUL4A mRNA 的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。肺结核组患者血清 IRF8(389.3946.85)pg/ml、hsa-circRNA-103571(22.48 5.06)ng/L 均高于对照组的(327.6241.76)pg/ml、(11.363.17)ng/L,IFN-(5.581.36)pg/ml 明显低于对照组的(12.724.78)ng/L,差异有统计
4、学意义(P0.05)。Pearson 相关性分析显示,肺结核患者血清 hsa-miR-20b 与 IRF8、hsa-circRNA-103571 水平呈正相关(r=0.585、0.539,P0.05),与 IFN-水平呈负相关(r=-0.485,P0.05)。以 hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-水平为自变量,以肺结核是否发生为因变量,行 Logistic 回归分析,结果显示 hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571是肺结核发生的危险因素(P0.05),IFN-是肺结核发生的保护因素(P0.05),具有可比性。1.2纳
5、入标准满足肺结核诊断和治疗指南3中关于诊断肺结核的标准;患者自愿参与相关试验项目,并签署知情同意书。1.3排除标准患有严重的肝肾功能障碍;对试验药物过敏;患有糖尿病、肿瘤等疾病;患有严重的急性心脑血管疾病;妊娠期及哺乳期;患有精神性疾病或不能配合试验;近期使用糖皮质激素、抗感染、免疫等影响炎症反应的药物。1.4方法 1.4.1样本收集肺结核患者在住院第 2 天采集静脉血,同时收集健康体检者的静脉血,用 3500 r/min 的速度离心 3 min,提取上清液,保持在-80的环境中。1.4.2检测 hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA difference was s
6、tatistically significant(P0.05).The pulmonary tuberculosis group had serum IRF8 of(389.39 46.85)pg/ml and hsa-circRNA-103571 of(22.485.06)ng/L,which were higher than (327.6241.76)pg/ml and(11.363.17)ng/L in the control group;the pulmonary tuberculosis group had significantly lower IFN-of(5.581.36)pg
7、/ml than(12.724.78)ng/L in the control group;the difference was statistically significant(P0.05).Pearson correlation analysis showed that serum hsa-miR-20b was positively correlated with IRF8 and hsa-circRNA-103571 levels in patients with pulmonary tuberculosis(r=0.585,0.539;P0.05),and was negativel
8、y correlated with IFN-level(r=-0.485,P0.05).Logistic regression analysis was performed with the levels of hsa-miR-20b,IRF8,hsa-circRNA-103571,and IFN-as independent variables,and whether tuberculosis occurred or not as the dependent variable,and the results showed that hsa-miR-20b,IRF8,and hsa-circR
9、NA-103571 were the risk factors for the occurrence of pulmonary tuberculosis(P0.05),and IFN-was a protective factor for the development of pulmonary tuberculosis(P0.05).The area under the curve(AUC)of serum hsa-miR-20b level for the diagnosis of pulmonary tuberculosis was 0.898,the cut-off value was
10、 1.44,and its sensitivity was 83.82%and specificity was 88.03%.Conclusion There is high expression of hsa-miR-20b in the serum of patients with pulmonary tuberculosis,which is closely related to inflammation-related factors.Hsa-miR-20b may interact with inflammation-related factors to regulate the o
11、ccurrence and development of pulmonary tuberculosis.【Key words】Micro-ribonucleic acid;Tuberculosis;hsa-miR-20b;Inflammatory factors表达量提取标本后,在无菌环境下操作,通过 BIOG血清miRNA提取试剂法收集总RNA,具体操作按BIOG血浆血清 miRNA 提取试剂(常州百代生物科技股份有限公司)说明书进行。以紫外分光光度计(Nano EX,泽尼萨尔有限公司)检测 RNA 浓度、纯度,并验其完整性。根据 BIOG miRNA 探针法逆转录试剂盒(常州百代生物科技股
12、份有限公司)说明书将 RNA 逆录成cDNA。利用 BIOG miRNA 探针法荧光定量 PCR 试剂(常州百代生物科技股份有限公司)及 PCR 仪(Rotor-Gene Q,凯杰企业管理有限公司)将 cDNA 扩增,qPCR检 测。hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA 以hsa-miR-16 为 内 参。以 2-Ct法 计 算 hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA 相对表达量。1.4.3检测血清 IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-水平提取出样本后,用人IRF8酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(KHG0111,上海研
13、卉生物科技有限公司)、hsa-circRNA-103571(ELISA)试 剂 盒(OSD_H0170,长沙达尔锋生物科技有限公司)、IFN-(ELISA)试剂盒(BS-E3748 h1,广州徕智生物科技有限公司),通过ELISA 法对 IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-水平进行检测。1.5统计学方法数据通过 SPSS22.0 软件进行统计。计量资料以均数 标准差(x-s)表示,采用 t 检验;计数资料以率(%)表示,采用2 检验。肺结核患者的hsa-miR-20b 与 IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-的相关性检验采用 Pearson 相关进行;采
14、用 Logistic 回归分析肺结核发生的危险因素;采用受试者工作特征曲线(ROC 曲线)分析 hsa-miR-20b 的表达量对肺结核的诊断效能。P0.05 表示差异有统计学意义。2结果2.1两组血清 hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A 60中国现代药物应用2024年4月第18卷第7期Chin J Mod Drug Appl,Apr 2024,Vol.18,No.7mRNA 的表达量比较与对照组相比,肺结核组患者血清 hsa-miR-20b、GBP5 mRNA 的表达水平均升高,CUL4A mRNA 的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。见表 1。2.2两组血
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