CYP3A7与MDR1基因多态性与镇痛效应的关系研究.pdf

35中国现代药物应用2024年3月第18卷第5期Chin J Mod Drug Appl,Mar 2024,Vol.18,No.5CYP3A7 与 MDR1 基因多态性与镇痛效应的关系研究邓乾唐艳平谭国芳刘江洪李国宏【摘要】目的分析 CYP3A7、MDR1 基因多态性与镇痛效应之间的关系。方法回顾性分析 87 例行腹部手术患者的一般临床资料,术后均采用舒芬太尼镇痛,对影响患者术后镇痛效应的相关因素进行分析。结果87 例行腹部手术的患者中,术后轻度疼痛(轻度疼痛组)45 例、术后中重度疼痛(中重度疼痛组)42 例。两组的年龄、性别、美国麻醉医师协会(ASA)分级以及 CYP3A7 基因多态性比较差异无统计学意义(P0.05)；两组 MDR1 2677GT/A 基因多态性比较差异有统计学意义(PT/A GG、GA、TA、AA 为术后镇痛效应的影响因素(OR=0.998、1.078、1.044、1.038,P0.05).The difference between the two groups was statistically significant when comparing the polymorphisms of the MDR1 2677GT/A gene(PT/A GG,GA,TA,and AA were the factors affecting postoperative analgesic effect(OR=0.998,1.078,1.044,1.038;P2 h 者。1.3方法1.3.1麻醉方法指导患者术前禁水、禁食,患者入室后监测无创血压、心电图以及脉搏血氧饱和度,静脉注射舒芬太尼 0.4 g/kg、盐酸戊乙奎醚注射液 0.5 mg、丙泊酚 3 mg/kg、顺苯磺阿曲库铵 0.2 mg/kg。肌肉松弛后通过视频喉镜将气管导管插入患者体内,连接麻醉机,设置参数如下：呼吸频率：1214 次/min、潮气量：810 ml/kg、呼气末二氧化碳分压：3540 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)。术中吸入七氟醚进行麻醉维持,持续静脉泵入瑞芬太尼 310 g/(kgh),间断给予患者顺苯磺阿曲库铵,术中依照患者心率与血压对瑞芬太尼泵注速度以七氟醚吸入浓度进行调整。手术结束前 20 min 给予患者舒芬太尼 0.1 g/kg,术后按照同一标准为患者配置术后镇痛泵,均应用舒芬太尼镇痛,应用剂量为 2 g/kg,设置自控泵参数如下：自控剂量：0.5 ml、持续量：2 ml/h、锁定时间：15 min、镇痛时间：48 h,应用 0.9%NaCl 注射液配制药物,总容量为 100 ml,动态观察患者生命体征以及镇痛效果。参考如下标准对疼痛程度进行分级：轻度疼痛(1 级)：有轻微疼痛感,但是未超出患者耐受度,不影响患者正常生活；中度疼痛(2 级)：疼痛感较为强烈,患者难以耐受,需要应用止痛药物缓解疼痛；重度疼痛(3 级)：疼痛感剧烈,患者无法耐受。回顾性分析轻度疼痛组与中重度疼痛组患者一般临床资料,包括年龄、性别、ASA 分级及 CYP3A7、MDR1 2677GT/A基因多态性。1.3.2引物设计针对 MDR 基因及 CYP3A7 基因多态性位点设计引物,引物序列见表 1。表 1引物序列引物名称上游引物下游引物产物大小hsa-MDRGTCCAAGAACTGGCTTTGCTTTGTTTTGTTTTGCAGGCTATAGGT406 bphsa-CYP3A7AATGGCTCCACTTGAGTTTGTTGAGGCTGTTGGATTGTTTAT251 bp1.3.3聚合酶链式反应(PCR)实验步骤1.3.3.1DNA 的提取样品处理：取一定量血块,加入 12.5 倍体积的 Buffer RCL,磨成匀浆,12000 r/min 离心 1 min,小心吸弃上清,如果沉淀中还有红色,可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入 200 l Buffer GR,震荡至彻底混匀。向以上溶液中加入 20 l Proteinase K。加入 200 l Buffer GL,震荡至彻底混匀。56孵育 10 min,期间颠倒混匀数次。加入200 l 无水乙醇,颠倒混匀数次,短暂离心。将步骤5 所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能加完溶液,可分多次加入。12000 r/min 离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。向吸附柱中加入 500 l Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇),12000 r/min 离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。向吸附柱中加入 500 l Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇),12000 r/min 离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中；(如需进一步提高 DNA纯度,可重复步骤 8)。12000 r/min 离心 2 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入 50200 l Buffer GE 或灭菌水,室温放置 25 min,12000 r/min 离心 1 min,收集 DNA 溶液,-20保存 DNA。11取 2.5 l 进行酶标仪定量。琼脂糖胶电泳检测：配制 1.5%琼脂糖胶。取 2 l DNA 样品于 PCR 管中,加入 2.5 l 6Loading Buffer,振荡混匀,瞬时离心(Marker:5 l)直接点样,140 V,20 min。1.3.3.2PCR 反应反应体系,见表 2。反应条件设置,见表 3。表 2反应体系总反应体系：20 l2SuperReal PreMix Plus10 lPrimer(F+R)1 lDNA2 lH2O7 l表 3反应条件设置温度时间循环数955 min1 Cycles9530 s36 Cycles6030 s7230 s725 min4-37中国现代药物应用2024年3月第18卷第5期Chin J Mod Drug Appl,Mar 2024,Vol.18,No.51.4观察指标对比术后轻度疼痛组与术后中重度疼痛组患者一般临床资料并分析影响术后镇痛效应的相关因素。其中,CYP3A7 包括*1A/*1A、*1A/*1C、*1C/*1C,MDR1 2677GT/A 包括野生型纯合子(GG)、突变型杂合子(TG)、突变型纯合子(TT)、突变型杂合子(GA)、突变型杂合子(TA)、突变型纯合子(AA)。1.5统计学方法通过 SPSS23.0 软件对所得数据进行处理和分析。均数 标准差(x-s)表示计量资料并以独立样本 t 检验实施组间比较,通过配对 t 检验实施组内比较；通过率(%)表示计数资料并以2检验或秩和检验对计数资料进行比较；对轻度疼痛组及中重度疼痛组具有统计学意义的单因素进行多因素Logistic回归分析。P0.05则表明差异存在统计学意义,P0.05)；两组 MDR1 2677GT/A 基因多态性比较差异有统计学意义(PT/A GG、GA、TA、AA 为术后镇痛效应的影响因素(PT/AGG17(37.78)6(14.29)24.0490.000TG4(8.89)2(4.76)TT4(8.89)9(21.43)GA2(4.44)10(23.81)TA15(33.33)4(9.52)AA3(6.67)11(26.19)注：两组 MDR1 2677GT/A 比较,PT/A 基因多态性比较差异有统计学意义(PT/A GG、GA、TA、AA 为术后镇痛效应的影响因素(P0.05)。综上所述,患者术后镇痛效应与 MDR1 基因多态性存在关联,为了提高镇痛效果,合理应用镇痛药物,临床应在进行镇痛方案治疗时将患者基因型等相关因素考虑在内,最大程度的保证镇痛效果并合理控制镇痛药物应用剂量。参考文献1 Bai J,Li L,Zhan S,et al.Heterotropic activation of flavonoids on cytochrome P450 3A4:A case example of alleviating dronedarone-induced cytocoxicity.Toxicol Lett,2020(319):187-196.2 王东,唐兢,莫珊,等.基于视觉模拟评分法和免疫功能指标评估全身麻醉复合腰方肌阻滞在老年妇科肿瘤患者围术期的应用价值.中国医刊,2023,58(4):417-421.3 Sohn M,Kim MG,Han N,et al.Whole exome sequencing for the indentification of CYP3A7 variants associated with tacrolimus concentrations in kiddney patients.Sci Rep,2018,8(1):18064.4 张青林,朱紫琼,赵娜,等.CYP3A4*1G 基因型酶活性及多态性对椎管内分娩镇痛中舒芬太尼镇痛效果的影响.中国医刊,2022,57(6):676-679.5 牛悦峰,常钧.CYP3A4 基因多态性检测结果指导食管癌术后镇痛舒芬太尼用药.中国药物与临床,2019,19(21):3754-3756.6 邱晓燕,武卓,徐璐扬,等.CYP3A4、CYP3A5 和 CYP3A7 的基因多态性对中国汉族肾移植患者他克莫司药动学的影响.药物流行病学杂志,2019,28(7):451-455,476.7 马敏明,李盈科,袁红斌.ADRB1 基因多态性与结直肠癌患者疼痛敏感度及腹腔镜术后芬太尼镇痛效果的关联.福建医科大学学报,2020,54(2):78-85.8 陈佳慧,赵雷.CYP3 A4 和 CYP2 D6 基因多态性对阿片类药物术后镇痛效应影响的研究进展.广东医学,2021,42(7):762-766.9 舒向荣,池里群.基于基因多态性不同位点的检测结果对阿片类药物给药剂量的评价.天津药学,2021,33(6):59-64.10 侯艳华,张加强,武江霞.CYP3A41G 不同基因型对髋关节置换术后地佐辛复合舒芬太尼自控镇痛效应的影响.临床麻醉学杂志,2020,36(3):239-243.11 Magliocco G,Thomas A,Desmeules J,et al.Phenotyping of human CYP450 enzymes by endobiotics:Current knowledge adn methodological approaches.Clin Pharmacokinet,2019,58(11):1373-1391.12 吴洁,侯佳展,程倩,等.等位基因特异性 PCR 检测 CYP3A5和 MDR-1 基因多态性方法的建立及临床应用.临床检验杂志,2017,35(11):844-848.13 吴飞飞.CYP3A5 和 MDR1 基因多态性对膜性肾病患者他克莫司用药剂量及疗效的影响.山东大学,2019.14 Lv J,Liu F,Feng N,et al.CYP3A4 gene polymorphism is correlated with individual consumption of sufentanil.Acta Anaesthesiol Scand,2018,62(10):1367-1373.15 王晓冰,刘永,李大祥.MDR1 C3435T 多态性对关节置换术后镇痛药物使用量的影响.中国药房,2017,28(14):1876-1880.收稿日期：2023-08-23