血细胞分析仪.doc
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1、深 圳 大 学 实 验 报 告 课程名称: 体外诊断仪器原理与实践 实验项目名称: 血细胞分析仪 学院: 医学院 专业: 医疗器械工程 指导教师: 报告人: 学号: 班级: 实验时间: 2014-05-09 实验报告提交时间: 教务部制实验目的与要求:1. 介绍血细胞分析仪的计数原理、血红蛋白浓度测定原理。2. 记录血细胞分析仪的测试流程。3.简单分析血细胞分析仪检测报告中白细胞、红细胞、血小板以及白细胞分类的意义。方法、步骤:实验仪器:三分类血细胞分析仪:一、简要操作指南及注意事项 1、 开机前的准备 检查试剂是否足量,有无浑浊变质,试剂管道有无扭结,并倒空废液瓶 2、 开机 打开机器后部的
2、开关,等待机器自动冲洗内部管路后,自动测量本底并出现计数界面 3、 本底检查 出现计数界面后,机器将自动测量的本底数值显示在屏幕上,本底结果要求: WBC0.3 RBC0.03 HGB1 PLT10 如果本底没有达到仪器的要求,仪器将会提示“本底异常”请执行清洗或维护程序 4、 全血测量 A. 在计数界面下,按模式键,将模式设置为“全血” B. 混匀抗凝血后,送到采样针下,让采样针插入抗凝血 C. 按开始键,开始对样本计数 二、三分类血细胞分析仪原理和主要结构及其参数意义:所谓三分类 是把白细胞分成大中小,测量方法是基于库尔特原理.计数原理-库尔特原理: 库尔特原理也叫电阻抗法 , 其主要原理
3、是依据电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时 , 引起电阻变化 , 在恒流电路中 , 电阻的变化引起电压的变化来进行细胞计数和体积测定的。 如图 1 所示, 将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液倒入一个不导电的容器中, 再将镶有宝石小孔的管子插入到细胞悬液中, 在小孔管内侧充满稀释液,并在其内外各置一个电极。当细胞通过小孔时, 由于血细胞具有非传导性的性质, 因此, 将引起内、外电极间的电阻增加, 产生一个脉冲。若在两电极间加上一个恒流源, 则这个电阻的变化就转换成了电压的变化。脉冲变化的次数代表血细胞通过小孔的个数, 其脉冲的高度表征细胞体积的大小。 综上可知:不同脉冲波的大小表示细胞体积的不同.不
4、同脉冲波的数量即为细胞的个数 库尔特原理主要由测量杯、小孔管、内外电极等组成。其中 , 小孔管(主要是红宝石孔)下图是整个测量系统的主要部分 , 它决定了血球分析仪的测量准确度。小孔越小(大概100米那样) , 测量准确度越高 , 但易造成堵孔 ; 小孔越大 ,测量准确度越低 , 但不易堵孔。目前市场上销售的利用电阻抗法设计的血球分析仪的竞争焦点就在于把小孔做得小而不易堵孔 ,为了实现细胞逐个通过可采用鞘流法,根据两侧鞘流的流速不同使细胞一个个的进入孔内从而不造成堵孔和细胞并排进入的误差的问题(如下图): 其排堵方法大致有反冲法和电灼烧法两种 , 或二者兼而有之。测量系统得到的电平信号经放大、
5、阈值调节、甄别、整形后进行计数 , 得到 RBC、WBC、PLT 的数量。但三者的计数原理又略有不同。白细胞计数时 , 机内微型计算机按体积大小将白细胞从 3045fl 分为 256 个通道 , 每个通道为1164fl。根据细胞大小被分别放在不同的通道中得到白细胞体积的直方图 , 根据体积大小可分为不同的细胞群 , 第一群主要是淋巴细胞 , 第二群主要是单核细胞 , 第三群为粒细胞 , 这就是“三分群法”也就是常说的三分类。 红细胞计数原理同白细胞计数原理大致相同。在红细胞计数的同时 , 把各脉冲幅度相加 , 得到红细胞的总体积 , 经计算得到红细胞的平均体积。血红蛋白的测量通常用比色法得到。
6、红细胞的平均体积 (MCV) , 红细胞平均血红蛋白含量 (MCH) , 平均血红蛋白浓度 (MCHC) , 红细胞体积分布宽度(RDW) 都是通过计算得来的。血小板计数时 , 微型计算机按体积分成 64 个通道 , 范围为 228fl 之间 , 血小板的平均体积(MPV) 是计算得来的 .血红蛋白测定原理-朗伯比尔定律. 在仪器的内部,当仪器把血液样本吸进来的时候会分成两个杯子(通道)。一个是测量红细胞和血小板的(因为红细胞和血小板的体积比较容易根据信号强度区分,白细胞造成的影响可以忽略因为红细胞的数量比较大)。另外一个杯子是测量血红蛋白和白细胞的,白细胞依然使用库尔特原理计数,而血红蛋白的
7、测定我们知道红细胞通过溶血素可以使红细胞破裂释放血红蛋白出来,然后其与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物 , 进入血红蛋白测试系统 , 在特定波长 (一般在 530550nm) 下比色 ,吸光度的变化与液体中 Hb 含量成比例 ,仪器便可显示 Hb 浓度。不同系列的血液分析仪配套溶血剂配方不同 , 形成的血红蛋白衍生物也不同 , 但大多数的最大吸收光谱接近 540nm ,所以血红蛋白的含量用朗伯比尔定律可以将测得的吸光度换算成浓度。 A=KCL其中A是吸光度无单位 K是摩尔吸光系数单位L/(MOL*CM) C是物质的浓度单位MOL/L L是 光径单位是CM由于A可以测定 K已知 L已知从而可以计算出
8、C。达到测量的目的。左图是机器的内部局部结构图,核心的是在第二个管子,是吸取血液样本的,每次只能吸收15L的样本,非常精确。右侧的管子是装清洗液用的以ML为单位,所以不需要非常精确。相关参数意义:红细胞直方图,是反映红细胞大小或任何相当于红细胞颗粒分布图,正常呈光滑的正态曲线,其峰值即MCV值,细胞大小分布在25-175fl范围。峰左移,为小红细胞性贫血;峰右移,为大红细胞贫血。由于仪器还同时提供许多其他参数,所以可明显提高疾病诊断的准确性。白细胞直方图,是一条有两个峰的光滑曲线,从左至右的分布分别为淋巴细胞,中间细胞,中性粒细胞,其分布范围相应为35-90fL, 160-400fL。但其他与
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