小鼠染色体的制备、观察、染色.doc
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1、生命科学学院Life Science College细胞生物学实验报告姓名:柳伟雄 班级:2013级生科一班学号:201300140062 同组者:曾玮璠 山东大学实验报告 2015年6月1日姓名:柳伟雄 系年级:生科一班2013级 同组者:曾玮璠科目:细胞生物学实验 题目: 小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法,了解各操作步骤的原理。2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。3.认识不同生物染色体的特征,学会做染色体组形图。二、原理凡处于活跃增殖状态的细胞,或者经过各种处理后,任何动物组织的细胞就可进入分裂,均可用于染
2、色体分析。在正常动物体内,精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素,即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌操作,易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面,精巢又比骨髓要简易一些,故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。对于小鼠精巢染色体标本的制作,一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上;
3、 3. 空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。Giemsa染色是最常用的染色方法之一,适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。三、试剂和器材1.试剂:秋水仙素、生理盐水(0.9%的NaCl溶液)、0.3%KCl低渗溶液、固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、Giemsa染液Giemsa染液的配制:吉姆萨粉(Giemsa stain) 甘油(AR) 甲醇(AR) 将Giemsa粉放入研钵中,先加入少量甘油,研磨至无颗粒为止,然后再分批加入甘油,放56温箱中2
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