口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗安全性和抗体消长规律.pdf
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1、第 9 期第 44 卷第 9 期2023 年 9 月中南农业科技South-Central Agricultural Science and TechnologyVol.44 No.9Sep.,2023王政,周海娟,旦增卓玛.口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗安全性和抗体消长规律 J.中南农业科技,2023,44(9):249-250,253口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起牛羊等偶蹄动物的一种烈性急性接触性传染病,临床特征以口腔黏膜、四肢下端及乳房等处皮肤形成水疱和烂斑为主1,2。F
2、MDV有 7个血清型,其中A型和O型病毒株流行范围最广3。FMD主要流行于非洲、亚洲、中东及南美洲等地区,其中泰国、马来西亚、缅甸、越南和柬埔寨等东南亚国家疫情形势严峻4。该病传染性强且传播迅速,广泛流行于世界各地,已严重阻碍了畜牧业的发展5,6。世界动物卫生组织(WOAH)将 FMD 列为 A 类动物疫病名单之首,中国也将其列为一类动物疫病7,8。接种疫苗是预防和控制 FMD疫病有效的手段9-12,疫苗免疫效果是决定FMD防控成败的关键因素。因此,研究疫苗安全性和抗体消长规律有助于提高疫苗免疫水平,对FMD疫病预防控制具有重要的意义。本试验选用口蹄疫 O型、A型二价灭活疫苗对西藏本地山羊及牦
3、牛进行免疫,初步确定了疫苗免疫安全性和抗体消长规律,为FMD疫苗免疫程序及疫病防控提供理论依据。1材料与方法1.1试验动物试验动物为西藏本地山羊和牦牛,经临床检查健康、无临床疾病症状。试验动物按规范饲养,以配合饲料和青干草为主进行饲喂。1.2仪器与试剂酶标分析仪购于北京普朗新技术有限公司,型号 DNM-9602;恒温培养箱购于上海鸿都科技有限公司,型号 SHP-300;高速冷冻离心机购于湖南星科科学仪器有限公司,型号 TGL16,其他耗材均为国产。口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒购于兰州兽研生物科技有限公司,批号2021121705。1.3方法1.3.1免疫前抗体检测对 145只山羊、60头
4、牦牛进行颈部静脉采血,注入采血管。2 h 内带回实验室,4 10 000 r/min 离心 3 min,分离血清至新 EP管中,4 保存,用于口蹄疫抗体检测。1.3.2疫苗安全性试验将20只山羊、10头牦牛等同量分为2组,试验组和对照组,采用耳标法和涂不同染料法对试验动物进行双重标记。试验组每头牦牛肌肉注射口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗1 mL,每只山羊肌肉注射口蹄疫 O型、A型二价灭活疫苗0.5 mL;对照组试验动物不注射口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗。免疫接种后连续观察 14 d 并记录试验动物的免疫反应。1.3.3免疫试验按照口蹄疫 O 型、A 型二价灭活疫苗说明书,对 125 只山羊、50
5、 头牦牛肌肉注射疫苗。免疫后连续 21 d 对试验动物进行临床观察记录。在免疫 21、60、90、120、150、180 d 分别对试验动物进行颈部静脉采血,分离血清,4 保存用于口收稿日期:2023-04-29作者简介:王政(1987-),男,河南南阳人,兽医师,主要从事动物疫病检验工作,(电话)13889095252(电子信箱)。口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗安全性和抗体消长规律王政1,周海娟1,旦增卓玛2(1.西藏自治区兽医生物药品制造厂,拉萨850004;2.西藏莲茎生物科技有限公司,拉萨8501414)摘要:为研究口蹄疫(FMD)O型、A型二价灭活疫苗在山羊、牦牛体内的免疫安全性和抗体
6、消长规律,试验选用疫苗接种、抗体检测等方法,对疫苗的免疫安全性和免疫抗体水平情况进行了测试和评估。结果显示,接种疫苗的试验动物无免疫副作用,免疫14 d内均未出现临床症状;但随着时间推移,试验动物口蹄疫O型、A型抗体合格率呈逐渐下降趋势,尤其是免疫150 d后抗体合格率下降较快。表明FMD疫苗具有良好的免疫安全性,在动物体内可产生高水平O型、A型抗体且维持较长时间。关键词:口蹄疫(FMD);二价灭活疫苗;抗体合格率;安全性;山羊;牦牛;消长规律中图分类号:S858.27;S858.23文献标识码:A文章编号:2097-2083(2023)09-0249-02中南农业科技2023 年蹄疫抗体检测
7、。1.3.4抗体检测方法用样品稀释液将待检血清按1 2(体积比)稀释,加入25 L血清样品于包被板样品孔,再加入 25 L样品稀释液;阴性、阳性标准血清不需要稀释,在阴性、阳性对照孔内各加入 50L阴性、阳性标准血清;酶标对照孔设立2孔,各加入 50 L 样品稀释液。封膜,振荡混匀,37 孵育60 min。用蒸馏水按1 20(体积比)稀释洗涤液。孵育结束,弃掉孔内液体。每孔加入 300 L洗涤液,洗涤 4次,弃液,在吸水纸上拍干。每孔加入 50 L酶标抗体,封板,37 孵育 30 min。包被板洗涤 4次,在吸水纸上拍干。每孔加入50 L底物溶液,封板,室温避光孵育15 min。每孔加50 L
8、终止液,于450 nm波长处测定各孔吸光度。标准样品判定,阳性对照样品抑制率(PI)=(1-阳性对照孔吸光度/酶标对照孔吸光度)100%,大于60%;阴性对照样品抑制率(PI)=(1-阴性对照孔吸光度/酶标对照孔吸光度)100%,小于40%。结果判定,样品抑制率(PI)=(1-待检样品吸光度/酶标对照孔吸光度)100%,PI50%为阳性,PI50%为阴性。1.4数据分析采用Excel 2010软件中的数据分析功能对试验动物的血清样品抗体水平进行数据分析。2结果与分析2.1疫苗安全试验结果接种口蹄疫 O型、A型二价灭活疫苗的试验组动物均未出现过敏反应、局部不适等免疫副作用。连续观察14 d,试验
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