颈动脉粥样硬化斑块患者外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化情况观察.pdf
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1、山东医药2023 年第 63 卷第 24 期颈动脉粥样硬化斑块患者外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化情况观察赵佳1,姜小建1,谢紫阳1,屈晓艳2,左林21 西安市中心医院检验科,西安 710003;2 空军军医大学唐都医院放射科摘要:目的观察颈动脉粥样硬化斑块患者外周血卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因启动子区DNA甲基化情况。方法颈动脉粥样硬化斑块患者52例(观察组),同期无颈动脉粥样硬化斑块健康体检者50例(对照组),对所有受试者进行LCAT基因启动子区DNA甲基化检测,比较两组甲基化占比;对观察组患者进行头颈部CT血管成像(CTA)检查,比较观察组甲基化患者和非甲基化患者血管狭窄
2、情况。结果观察组外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化占比为65.38%(34/52),对照组外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化占比为36.00%(18/50),两组甲基化占比比较,P0.05。观察组34例甲基化患者中,颈动脉轻中度狭窄21例、重度及闭塞13例;观察组18例非甲基化患者中,颈动脉轻中度狭窄16例、重度及闭塞2例;观察组甲基化患者与非甲基化患者颈动脉狭窄严重程度比较,P均0.05。结论颈动脉粥样硬化斑块患者外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化占比高,LCAT基因启动子区DNA甲基化与动脉粥样硬化斑块的密切相关。关键词:动脉粥样硬化;卵磷脂胆固醇酰基转移酶;DNA甲基化;颈动
3、脉狭窄程度doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2023.24.005 中图分类号:R543.5 文献标志码:A 文章编号:1002-266X(2023)24-0021-04DNA methylation in the promoter region of LCAT gene in peripheral blood of patients with carotid atherosclerotic plaqueZHAO Jia1,JIANG Xiaojian,XIE Ziyang,QU Xiaoyan,ZUO Lin1 Department of Laboratory,Xia
4、n Central Hospital,Xian 710003,ChinaAbstract:Objective To observe the DNA methylation in the promoter region of the lecithin cholesterol acyltransferase(LCAT)gene in peripheral blood of patients with carotid atherosclerotic plaque.Methods Fifty-two patients with carotid atherosclerotic plaque(observ
5、ation group)and 50 healthy subjects without carotid atherosclerotic plaque(control group)during the same period were selected.DNA methylation in the promoter region of the LCAT gene was detected in all subjects to compare the difference of the methylation rate between the two groups.Head and neck CT
6、 angiography(CTA)examination was performed in the observation group.The degree of vascular stenosis was compared between methylated patients and non-methylated patients in the observation group.Results The DNA methylation rate in the promoter region of the LCAT gene in peripheral blood of the observ
7、ation group was 65.38%(34/52),while that of the control group was 36.00%(18/50),with significant difference in the methylation rate between the two groups(P0.05).Among the 34 methylated patients in the observation group,21 cases had mild-to-moderate carotid artery stenosis and 13 cases had severe st
8、enosis or occlusion.Among the 18 non-methylated patients in the observation group,16 cases had mild-to-moderate carotid artery stenosis and 2 cases had severe stenosis or occlusion.There were significant differences in the severity of carotid artery stenosis between methylated and non-methylated pat
9、ients in the observation group(P0.05).Conclusion The DNA methylation rate in the promoter region of the LCAT gene in peripheral blood of patients with carotid atherosclerotic plaque is higher,and the DNA methylation in the promoter region of the LCAT gene is closely related to the formation of ather
10、osclerotic plaque.Key words:atherosclerosis;lecithin cholesterol acyltransferase;DNA methylation;the degree of carotid artery stenosis基金项目:西安市科技计划项目 201805102YX10SF36(6),22YXYJ0088。第一作者简介:赵佳(1984-),女,博士,主任检验师,主要研究方向为临床免疫与分子生物学检验。E-mail:通信作者简介:左林(1984-),男,硕士,副主任医师,主要研究方向为临床影像诊断与病理基础。E-mail:开放科学(资源服务)
11、标识码(OSID)21山东医药2023 年第 63 卷第 24 期由动脉粥样硬化所导致的心脑血管疾病已成为当今严重危害人类生命健康的疾病之一。颈动脉粥样硬化斑块是一种常见的动脉粥样硬化表现形式,其临床特点是颈动脉内膜下脂质沉积和纤维组织增生,导致血管腔狭窄和血流受限。脂代谢异常是其重要发病机制。卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)催化血浆脂蛋白中游离胆固醇的酯化,在高密度脂蛋白(HDL)代谢和胆固醇的逆向转运过程中发挥关键作用1-2。LCAT异常可影响胆固醇的逆向转运,进而促进动脉粥样硬化的发生和发展3。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式,甲基化通常发生在基因启动子区,抑制基因转录,这种变
12、化可以通过细胞分化遗传。研究4显示,动脉粥样硬化患者可以通过DNA甲基化调控脂代谢相关基因的表达,影响其功能,与动脉粥样硬化的形成密切相关。本研究观察了颈动脉粥样硬化斑块患者外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化情况,并分析甲基化占比与颈动脉狭窄程度的关系,以期为动脉粥样硬化的发病机制和临床治疗提供新的理论和实验依据。1 资料与方法 1.1临床资料选取2020年612月西安市中心医院收治的颈动脉粥样硬化斑块患者52例(观察组),男33例,女 19例;年龄 5064(57.06 4.42)岁;BMI(25.10 3.46)kg/m2;TC(4.42 0.97)mmol/L;TG(1.76 0.7
13、5)mmol/L;HDL-C(1.07 0.23)mmol/L;LDL-C(2.62 0.89)mmol/L;SBP(134.65 20.86)mmHg;DBP(80.24 12.79)mmHg;FBG(6.11 2.13)mmol/L;有吸烟史 19 例(36.54%)。纳入标准:符合 中国头颈部动脉粥样硬化诊治共识 的诊断标准5;年龄65岁;受试对象知情同意并表示愿意配合。排除标准:严重感染性疾病;恶性肿瘤;血液和免疫系统疾病;严重肝肾功能不全;颅内出血和占位性病变;近期服用降血脂类药物。另选同期无颈动脉粥样硬化斑块健康体检者50例(对照组),男30例,女20例;年龄5062(55.64
14、4.26)岁;BMI(23.76 3.73)kg/m2;TC(4.15 0.88)mmol/L;TG(1.44 0.54)mmol/L;HDL-C(1.16 0.30)mmol/L;LDL-C(2.37 0.76)mmol/L;SBP(131.52 18.34)mmHg;DBP(78.46 11.32)mmHg;FBG(5.75 1.94)mmol/L;有吸烟史11例(22.00%)。两组一般资料无统计学差异,具有可比性。本研究经医院伦理委员会通过,且患者知情同意。1.2外周血LCAT基因启动子区DNA甲基化情况观察采集所有受试者空腹肘静脉血2 mL,应用血液基因组DNA抽提试剂盒提取外周血基
15、因组DNA,严格按照说明书进行操作。提取的DNA进行1%琼脂糖凝胶电泳,并检测其浓度和纯度。-80 冰箱保存备用。在 NCBI GenBank 数据库中查询 LCAT(GenBank ID:3931)基因序列,应用 MethPrimer 甲基化预测软件(http:/www.urogene.org/methprimer/)对LCAT基因启动子区进行甲基化预测。经预测存在3个甲基化区域,分别设计3对引物,引物序列:区域1,上游引物GAGGGTTATAGATTGGTGGTTAGT,下 游 引 物 CAAAAACATAAACATACCACCATC;区域 2,上游引物 AGTTGGGTTTTTAYGGT
16、TAATTTTG,下游引物CACCTTACCTCCRAAAAATAAACAC;区域 3,上游引物 ATGGTTTATGGYGATTTGTGATT,下 游 引 物CTCACTATTCCTAAATAAACCAAACA。以提取的外周血基因组DNA作为模板,进行PCR反应,扩增3个甲基化区域基因片段。PCR反应条件为:95 预变性35 min;94 变性 30 s;5560 退火 2530 s;72 延伸3050 s,35个循环。反应后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,切胶回收目的基因,与pUCm-T Vector连接,连接产物转化感受态细胞(SK9307),进行蓝白斑筛选,提取质粒,应用硫化测序 PC
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