苦参素注射液改善阿霉素所致慢性心力衰竭大鼠心功能和心室重构的作用及机制.pdf
《苦参素注射液改善阿霉素所致慢性心力衰竭大鼠心功能和心室重构的作用及机制.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《苦参素注射液改善阿霉素所致慢性心力衰竭大鼠心功能和心室重构的作用及机制.pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、本文引用:叶海峰,曹旭丹.苦参素注射液改善阿霉素所致慢性心力衰竭大鼠心功能和心室重构的作用及机制J.中国动脉硬化杂志,2023,31(9):762-770.DOI:10.20039/ki.1007-3949.2023.09.004.收稿日期 2023-05-11修回日期 2023-07-06基金项目 河北省医学科学研究课题(20220550)作者简介 叶海峰,主治医师,研究方向为心血管疾病,E-mail:。实验研究文章编号 1007-3949(2023)31-09-0762-09苦参素注射液改善阿霉素所致慢性心力衰竭大鼠心功能和心室重构的作用及机制叶海峰,曹旭丹(邯郸市中心医院心血管外科,河北
2、省邯郸市 056001)摘 要 目的 探讨苦参素注射液(OMT)对阿霉素所致慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能和心室重构的影响及可能机制。方法 采用腹腔注射(ip)阿霉素(1.5 mg/kg,2 次/周,共 6 周)的方法构建 CHF 大鼠模型,设模型组、卡托普利注射液(CTP,6.5 mg/kg)组和 OMT 低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组;另设对照组,每组 10 只。各组分别每天 1 次腹腔注射给药 4 周后,通过小动物超声成像系统检测心功能指标左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD)、短轴缩短率(LVFS)、射血分数
3、(LVEF)、每搏输出量(SV),酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清心肌肌钙蛋白 I(cTnI)、脑钠肽(BNP)、基质裂解素 2(ST2)含量,计算左心室肥厚指数(LVHI),HE 染色和 Masson 染色观察心肌组织形态变化和纤维化状况,Western blot 法检测胶原蛋白(Coll-1)、平滑肌肌动蛋白(-SMA)、转化生长因子 1(TGF-1)、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7 蛋白表达。结果 与模型组比较,CTP 组和 OMT 低、中、高剂量组大鼠 LVESD 和 LVEDD 分别降低,LVFS、LVEF 和 SV 分别升高(均 P0.05)
4、,cTnI、BNP 和 ST2 含量以及 LVHI 分别降低(均 P0.05),心肌组织形态病理性改变和纤维化状况明显改善,胶原容积分数(CVF)分别降低(均 P0.05),Coll-1、-SMA 和 TGF-1 表达量分别降低,p-Smad2/Smad2 比值和 p-Smad3/Smad3 比值分别下降,Smad7 相对表达量分别升高(均 P0.05)。OMT 对 CHF 大鼠各指标的影响具有剂量依赖性,且 OMT 高剂量组对各指标的影响明显优于 CTP 组。结论 OMT 具有改善 CHF 大鼠心功能、抑制心室重构的作用,其作用机制可能与抑制 TGF-1/Smads 信号通路有关。关键词 慢
5、性心力衰竭;苦参素注射液;心功能;心室重构;TGF-1/Smads 信号通路中图分类号 R541.6文献标识码 AEffect and mechanism of oxymatrine injection improves cardiac function and ventric-ular remodeling in adriamycin induced chronic heart failure ratsYE Haifeng,CAO Xudan(Department of Cardiovascular Surgery,Handan Central Hospital,Handan,Hebei 0
6、56001,China)ABSTRACTAimTo investigate the effect and possible mechanism of oxymatrine injection(OMT)on cardiacfunction and ventricular remodeling in doxorubicin-induced chronic heart failure(CHF)rats.MethodsThe ratmodel with CHF was established by intraperitoneal injection(ip)of adriamycin(1.5 mg/kg
7、,twice a week for 6 weeks).The model group,captopril injection(CTP,6.5 mg/kg)group and OMT low(25 mg/kg),medium(50 mg/kg),high(100 mg/kg)dose group were set up,and the control group was set up,with 10 rats in each group.The rats in eachgroup were treated by intraperitoneal injection once a day.4 wee
8、ks later,the cardiac function indexes(left ventricularend-systolic diameter(LVESD),left ventricular end-diastolic diameter(LVEDD),left ventricular fractional shortening(LVFS),stroke volume(SV)were measured through animal ultrasound;the content of cardiac troponin I(cTnI),brainnatriuretic peptide(BNP
9、),stromelysin-2(ST2)in serum were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA);the left ventricular hypertrophy index(LVHI)was calculated;the morphological changes and fibrosis of myo-cardial tissue were observed by HE staining and Masson staining;the expression of collagen I(Coll-1),smooth
10、muscleactin(-SMA),transforming growth factor-1(TGF-1),Smad2,p-Smad2,Smad3,p-Smad3,Smad7 were detected by267ISSN 1007-3949 Chin J Arterioscler,Vol.31,No.9,2023Western blot.Results Compared with the model group,the LVESD and LVEDD were decreased in CTP group andOMT low,medium,high dose groups;the LVFS
11、,LVEF and SV were increased(all P0.05).The contents of cTnI,BNP and ST2 were decreased(all P0.05).The pathological changes and fibrosis of myocardial tissue were significantlyimproved,and the collagen volume fraction(CVF)were decreased(P0.05).The expressions of Coll-1,-SMA andTGF-1 were decreased;th
12、e ratio of p-Smad2/Smad2 and p-Smad3/Smad3 were decreased;the expression of Smad7 wereincreased(all P0.05).The effect of OMT on various indexes of CHF rats were dose-dependent,and the effect of OMThigh-dose group on various indexes were significantly better than those of CTP group.Conclusion OMT can
13、 improvecardiac function and inhibit ventricular remodeling in CHF rats,which mechanism may be related to the inhibition of TGF-1/Smads signaling pathway.KEY WORDS chronic heart failure;oxymatrine injection;cardiac function;ventricular remodeling;TGF-1/Smads signaling pathway 慢性心力衰竭(chronic heart fa
14、ilure,CHF)是由于心脏结构或功能异常所致心室舒张或收缩功能受损而出现的一种临床综合征。目前,全球 CHF 患者超过 6 000 万,5 年生存率约 65%,是严重威胁人类健康的公共卫生问题1-3。心肌纤维化所致心室重构是 CHF 发生和持续性加重的重要原因,转化生长因子 1(transforming growth factor-1,TGF-1)是一种强致纤维化因子,TGF-1 与其下游蛋白 Smads构成的信号通路对心、肝、肺、肾等组织纤维化具有关键性调控作用4-7。研究发现,通过药物抑制TGF-1/Smads 信号通路能够有效减轻 CHF 大鼠心肌纤维化及心室重构8。因此,以 TGF
15、-1/Smads信号通路为靶点抑制心肌纤维化或许是延缓 CHF进展的有效途径。苦参素是从豆科植物苦参的干燥根中提取的一类活性生物碱,包括苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱等成分,具有较好的免疫调节、抗炎、抗纤维化等作用9。研究发现,苦参素对大鼠肝纤维化和肺纤维化具有抑制作用,其机制与调控 TGF-1/Smads 信 号 通 路 有 关10-11。苦 参 素 注 射 液(oxymatrine injection,OMT)是以苦参素为主要成分制成的中药注射剂,目前临床上主要用于放化疗所致白细胞减少及其他原因引起的白细胞减少症。本研究通过腹腔注射阿霉素制备 CHF 大鼠模型并给予 OMT 治疗,探讨
16、 OMT 对阿霉素所致 CHF 大鼠心功能和心室重构的作用及可能机制,以期为临床治疗 CHF 提供新的思路。1 材料和方法1.1 实验动物65 只 7 周龄清洁级雄性 SD 大鼠河北伊维沃生物科技有限公司,许可证号 SCXK(冀)2020-002,体质量210 240 g,分笼饲养于河北工程大学附属医院动物房,维持室温(24 1)、相对湿度(55%10%)、12 h 光照和 12 h 黑暗,自由饮水进食。本实验获得邯郸市中心医院伦理委员会批准。1.2 药物与试剂OMT 注射液(规格:每毫升 0.1 g OMT,浙江北生药业汉生制药有限公司,批号:21Z11090014);卡托普利(captop
17、ril,CTP)注射液(规格:每毫升 25 mgCTP,常州制药厂有限公司,批号:20210927);阿霉素(规格:10 mg/瓶,山东新时代药业有限公司,批号:220103-A16)。心肌肌钙蛋白 I(cardiac troponinI,cTnI)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、基质裂解素 2(stromelysin-2,ST2)酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号:H149-2、H166、H505-1);高效 RIPA 裂解液、苏木精-伊红(hemat
18、oxylin eosin,HE)染色试剂盒和 Masson 染色试剂盒(北京索莱宝生物科技有限公司,货号:R0010、G1120、G1340);兔 抗 大 鼠 胶 原 蛋 白 I(collagen I,Coll-1)、平滑肌肌动蛋白(-smoothmuscle actin,-SMA)、TGF-1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7 抗体(北京博奥森生物技术有限公司,货号:bs-7158R、bs-10196R、bs-0086R、bs-0718R、bs-7464R、bs-23580R、bs-5616R、bs-23328R);兔抗大鼠 GAPDH 抗体、羊抗兔 IgG
19、 二抗(美国 Abcam 公司,货号:ab7018、ab6721);BCA 法蛋白浓度检测试剂盒、ECL 显色液(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:PK10026、PK10001)。1.3 主要仪器VEVO 3100 型小动物超声成像系统(加拿大Visual Sonics 公司);EG1150C 型分体式石蜡包埋机、RM2235 型石蜡切片机(德 国 Leica 公 司);YS100 型光学显微镜(日本 Nikon 公司);VarioskanLUX 型全波长酶标仪(赛默飞世尔科技有限公司);PowerPac 型电泳仪(美国 Bio-Rad 公司);DYCZ-40D367CN 43-1262/R
20、中国动脉硬化杂志 2023 年第 31 卷第 9 期型转膜仪(北京六一仪器厂);ALPHA1000-2 型数字凝胶成像系统(美国 Alpha 公司)。1.4 模型制备与给药适应性饲养 7 天后,随机取 10 只大鼠设为对照组。剩余 55 只大鼠参照 Sun 等12报道的方法(腹腔注射阿霉素 1.5 mg/kg,2 次/周,共 6 周)构建CHF 大鼠模型,左心室射血分数(left ventricular e-jection fraction,LVEF)45%,即可判定 CHF 模型制备成功。造模过程中死亡 3 只、造模失败 1 只,共造模成功 51 只,去除 LVEF 最高的 1 只大鼠,将剩
21、余50 只 CHF 模型大鼠随机分为模型组、CTP 组和OMT 低、中、高剂量组,每组 10 只。CTP 组每天 1次腹腔注射给予 6.5 mg/kg CTP(根据人与大鼠剂量换算公式计算),OMT 低、中、高剂量组分别每天1 次腹腔注射给予 25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kgOMT(根据人与大鼠剂量换算公式计算,OMT 低、中、高剂量相当于人临床剂量的 1/2 倍、1 倍、2倍),对照组和模型组每天 1 次腹腔注射给予生理盐水,注射体积均为 5 mL/kg,疗程 4 周。1.5 心功能指标检测按 0.35 g/kg 腹腔注射给予水合氯醛实施麻醉后,通过小动物超声成像系统检
22、测心功能指标,包括左心室收缩期末内径(left ventricular end-systolicdiameter,LVESD)、舒张期末内径(left ventricularend-diastolic diameter,LVEDD)、短轴缩短率(leftventricular fractional shortening,LVFS)、LVEF、每搏输出量(stroke volume,SV)。1.6 血清 cTnI、BNP、ST2 含量检测开腹并分离腹主动脉、取血 5 mL,4 离心10 min 取血清(转速3 000 r/min,离心半径10 cm),按照 ELISA 法试剂盒操作说明进行处理后
23、,通过酶标仪检测血清 cTnI、BNP、ST2 含量。1.7 左心室肥厚指数计算称量大鼠体质量(W0)后,开胸取心脏,剪取左心室并称取其质量(W1),计算左心室肥厚指数(leftventricular hypertrophy index,LVHI),LVHI=W1/W0。1.8 心肌组织形态变化和纤维化状况观察将称量后的部分左心室组织置于 10%中性甲醛溶液中固定 72 h 后,石蜡浸润包埋、4 m 切片、贴片、烤片,梯度乙醇脱蜡水化,按照试剂盒操作说明,分别行 HE 染色和 Masson 染色,然后通过光学显微镜观察心肌组织形态变化和纤维化状况。通过 Image J 图像处理软件计算胶原(蓝
24、色着色)容积分数(collagen volume fraction,CVF),CVF(%)=(蓝色面积/总面积)100%。1.9心肌组织 Coll-1、-SMA、TGF-1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7 蛋白表达检测取左心室组织 50 mg,加入 RIPA 裂解液后研磨匀浆,冰上静置30 min 后充分裂解,4 离心25 min提取总蛋白(转速 12 000 r/min,离心半径 8 cm),BCA 法测定总蛋白浓度后,各组均 20 g 蛋白量上样,10%SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白,湿法转印至硝酸纤维素(nitrocellulose,NC)膜,5%
25、牛血清白蛋白封闭液室温封膜 1.5 h,加入 Coll-1(1 1 000)、-SMA(1 800)、TGF-1(1 1 000)、Smad2(1 1 000)、p-Smad2(1 1 000)、Smad3(1 1 000)、p-Smad3(1 1 000)、Smad7(1 1 000)、GAPDH(1 2 000)抗体稀释液 4 孵育过夜,洗膜后加入IgG 二抗(1 3 000)稀释液室温孵育 1 h,ECL 显色后,通过 Image J 图像处理软件计算条带灰度值,与内参-actin 条带的灰度值比值做为目标蛋白相对表达量。1.10 统计学处理实验数据采用 SPSS 20.0 软件进行统计
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 苦参 注射液 改善 阿霉素 所致 慢性 心力衰竭 大鼠 功能 心室 作用 机制
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。