抗PD-L1单抗促免疫细胞活化参与动脉粥样硬化.pdf
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1、网络出版时间:网络出版地址:抗炎免疫药理学抗 单抗促免疫细胞活化参与动脉粥样硬化李忠莎,李婧玉,魏思萌,李月,李琦,陈畅(重庆大学附属三峡医院临床转化研究中心,重庆 ;哈尔滨医科大学药学院药理学教研室,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院生物治疗中心,黑龙江 哈尔滨 )收稿日期:,修回日期:基金项目:国家自然科学基金面上项目()作者简介:李忠莎(),女,硕士生,研究方向:动脉粥样硬化治疗,:;陈畅(),男,博士生,教授,博士生导师,研究方向:动脉粥样硬化治疗,通信作者,:文献标志码:文章编号:()中国图书分类号:;摘要:目的研究抗 单抗对高脂饮食诱导的 小鼠动脉粥样硬化(,)发生发展的影响。方法将 只
2、小鼠随机分为正常组、高脂组、正常 抗 单抗组和高脂 抗 单抗组,通过高胆固醇饲料喂养建立 模型。实验动物饲养 周后,分离各组实验动物血管(主动脉根部至胸主动脉),进行油红 染色。酶联免疫吸附法()检测血清中总胆固醇()、三酰甘油()、高密度脂蛋白()、低密度脂蛋白()和炎症因子(、)水平。流式细胞计数检测淋巴细胞(、和 )、和 细胞比例。结果与高脂组相比,给予抗 单抗后促血管壁脂质累计并上调血清 、和 含量,但是对 无影响。高脂饲养条件下给予抗 单抗促 、和 细胞活化。除此之外,高脂饲养条件下给予抗 单抗还具有活化 和 细胞的作用。检测发现,高脂饲养条件下给予抗 单抗上调血清中炎症因子含量(、
3、)。结论高脂饲养条件下给予抗 单抗促 发生发展的机制与免疫活化有关。关键词:动脉粥样硬化;抗 单抗;免疫细胞;免疫活化;炎症因子;炎症反应开放科学(资源服务)标识码():动脉粥样硬化(,)发病机制尚未完全明确。近年研究发现由免疫细胞活化所介导的炎症反应在 的进程中具有重要的意义 。提示抑制机体免疫系统活化所诱发的炎症反应具有延缓 进程的潜在临床应用价值 。细胞程序性死亡配体 (,)又称 ,属于 家族中的型跨膜糖蛋白,通过与 细胞膜上的 结合,抑制 细胞增殖和活化,在维持机体免疫稳定中发挥关键作用 。然而,表达与 临床病理学特征和预后的关系尚存在争议。本研究通过体内外实验证实抗 单抗促免疫细胞活
4、化加重 。通过探讨 功能改变与 的相关性,为 的发生发展相关病理机制研究提供新方向。同时也为合并有心血管疾病的肿瘤患者的免疫治疗提供指导建议。材料与方法 实验动物及细胞 遗传背景的载脂蛋白 基因敲除小鼠()购自南京君科生物工程有限公司,雄性,清洁级,周龄,体质量()。实验动物饲养于哈尔滨医科大学药理学实验动物中心。本实验通过哈尔滨医科大学附属肿瘤医院伦理委员会批准()。材料与试剂抗 单抗(,中国)、油红 染料(,武汉塞维尔公司);染料(,武汉塞维尔公司)。()、()、()、()和 ()试剂盒均购自赛培生物(武汉)。总胆固醇(,)、三酰甘油(,)、高密度脂蛋白(,)和低密度脂蛋白(,)均购自南京
5、建成。()抗体、()抗体和 ()抗体均购自 。高脂饲料购自北京科奥(蔗糖 ,猪油 ,胆固醇 ,胆酸钠 ,酪蛋白 ,磷酸氢钙 ,石粉 ,预混料 ,基础饲料中国药理学通报 ;():)。仪器倒置显微镜(日本 ),微型低速离心机(中国奥盛仪器),水平摇床(北京恒奥生物)酶标检测仪(美国 ),涡旋振荡器(中国科大创新)。小鼠模型制备及取材 只 小鼠随机分成 组,普通饲料喂养组(,),高脂饲料喂养组(,),普通饲料喂养并给予抗 单抗组(,腹腔注射,一周 次),高脂饲料喂养给予抗 单抗组(,腹腔注射,一周 次)。喂养 周后,使用二氧化碳过量麻醉法处死小鼠。快速分离动脉(包括左右颈总动脉、左锁骨下动脉、主动脉
6、至腹主动脉)。油红 染色将组织样本置入包埋盒中,流水冲洗 ,取出沥净,将样本浸泡于 异丙醇中后,使用油红 染液浸染 ,取出样本并放入 异丙醇中浸泡分化,直到脂质斑块呈现红色而周围组织呈现白色,取出并沥干,放在底板上,拍照。收集各组实验动物血清,离心 ,分离血清,保存。按试剂盒说明检测 、和 ,于 处测定吸光度。流式细胞计数取 抗凝血,加入 红细胞裂解液,避光孵育 ,离心 ,弃上清,重悬 次。加入 、和 荧光单克隆抗体,混匀,室温避光孵育 。流式细胞仪检测 、和 的含量。淋巴细胞分离各组实验动物眼球取血并置于加入肝素抗凝的离心管内,离心管中缓慢加入适量淋巴细胞分离液,离心 ,可见离心管从上到下分
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