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决明子水提物对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用研究.pdf
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1、440 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第5期收稿日期:2022-09-27基金项目:山西省中医药大学中药炮制学科建设项目(编号:2018-1);山西省中医药大学中药炮制研究创新团队(编号:2022TD1014);中药炮制山西省重点实验室项目(编号:202104010910029)作者简介:闫志芳,高级实验师,研究方向:中药炮制现代研究,E-mail:*通讯作者:李秀英,副教授,博士,研究方向:中药新制剂与靶向药物系统研究,E-mail:决明子水提物对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用研究闫志芳,任可乐,孟祥龙,李秀英*(山西中医药大学 中药与食品工程学院,中药炮制山西省
2、重点实验室,山西 晋中 030619)摘 要:目的 探究决明子水提物对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用。方法 将60只ICR小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药水飞蓟素组(0.2 g/kg)、决明子水提物低、中、高剂量(2.25,4.5,9 g/kg)组。空白组和模型组灌胃生理盐水,给药组分别灌胃相应剂量的决明子水提物及水飞蓟素溶液,连续给药7 d,除空白组外其余各组末次给药后9 h,灌胃大剂量42白酒。观察与分析各组小鼠体质量、肝脏指数、油红O染色;检测小鼠血清和肝脏生化指标。结果 与模型组相比,决明子水提物中、高剂量组体质量显著增长,肝脏指数显著降低;决明子水提物高剂量组总胆固醇(TC)、甘油
3、三酯(TG)、丙二醛(MDA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF-),白介素1(IL-1)和白介素6(IL-6)含量显著降低,谷胱甘肽(GSH)含量升高(P0.01,P0.05);病理切片观察结果表明,各给药组小鼠肝脏病理变化中脂肪滴变性明显降低。结论 决明子水提物能显著减轻酒精引起的肝损伤,具有保肝的作用。关键词:决明子水提物;急性酒精性肝损伤;保肝;抗炎;脂质抗氧化中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1672-979X(2023)05-0440-06DOI:10.3969/j.issn.1672-979X.2023.05.012Pr
4、otective Effect of Water Extract of Cassiae Semen on Acute Alcoholic Liver Injury in MiceYAN Zhi-fang,REN Ke-le,MENG Xiang-long,LI Xiu-ying(Shanxi Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Processing,College of Traditional Chinese Medicine and Food Engineering,Shanxi University of Ch
5、inese Medicine,Jinzhong 030619,China)Abstract:Objective To explore the protective effect of water extract of Cassiae Semen on acute alcoholic liver injury in mice.Methods Sixty ICR mice were randomly divided into blank group,model group,positive(silymarin)group(0.2 g/kg),and Cassiae Semen water extr
6、act low-dose,medium-dose and high-dose(2.25,4.5,9 g/kg)groups.The rats in blank group and model group were gavaged with physiological saline,while the rats in the experimental groups were given corresponding doses of water extract of Cassiae Semen and silymarin solution by gavage,respectively,for 7
7、days.Except for the blank group,the rats in the other groups were given a large dose of 42-degree Erguotou spirit by gavage at the 9th hour after the last administration.The body weight,liver index and oil Red O staining of each group were observed and analyzed.Serum and liver biochemical indexes of
8、 mice were detected.Results Compared with the model group,the mice body weight of Cassiae Semen water extract medium and high dose groups increased significantly,and the liver index decreased significantly.The levels of total cholesterol(TC),triglyceride(TG),malondialdehyde(MDA),alanine aminotransfe
9、rase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),tumor necrosis 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第5期 441factor-(TNF-),interleukin-1(interleukin-1)and interleukin-6(IL-6)in the mice of Cassiae Semen water extract high dose group significantly decreased(P0.01),while the content of glutathione(GSH)increased(P0.05
10、).The results of pathological section observation showed that among the liver pathological changes of mice,the fat droplet degeneration in each administration group was significantly reduced.Conclusion The water extract of Cassiae Semen can significantly reduce the liver injury caused by alcohol,and
11、 has the function of protecting liver.Key Words:water extract of Cassiae Semen;acute alcoholic liver injury;protecting liver;anti-inflammatory;lipid antioxidant酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是肝脏相关疾病和肝病死亡的主要原因之一1。ALD早期表现为急性酒精性损伤,主要原因是短时间内饮用的大量酒精。肝细胞在人体消化吸收代谢酒精时,产生大量的氧自由基和多种炎性介质,这些物质使肝脏的氧化还原反应无法进行,
12、导致脂质过氧化,损害细胞膜,细胞器的功能受到限制,肝脏受到损伤2。现代医学治疗ALD需长期服用的保肝药物会产生一定的耐药性、药源性疾病等不良反应。决明子为豆科植物钝叶决明Cassia btusifolia L.或决明(小决明)Cassia tora L.的干燥成熟种子,具有清热明目,润肠通便的作用。研究发现,决明子富含多种化学活性物质,主要包括蒽醌类、脂肪酸类、黄酮类、多糖类、苷类等3,具有保肝4、降血压5、降脂6、降糖7、抗氧化8等药理作用。其中,水溶性物质蒽醌类等被证实通过改善转氨酶水平、抗炎、调节Nrf2介导的ERK/MAPK/JNK等信号通路等,缓解酒精引起的急性肝损伤9-13。为研究
13、决明子缓解酒精所致肝损伤,本文通过灌胃白酒建立小鼠急性酒精性肝损伤模型14,经决明子水提物给药后检测小鼠血清及肝脏组织中生化指标与血清炎性因子的变化,观察肝脏病理组织病变程度,以明确决明子水提物对于肝脏的保护作用,并探讨初步的作用机制,旨在为决明子进一步开发与利用提供实验基础与理论依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂决明子(北京同仁堂,产地安徽,批号:220216004),经山西中医药大学张朔生教授鉴定为豆科植物钝叶决明Cassia obtusifolia L.或决明(小决明)Cassia tora L.的干燥成熟种子。白酒(42,北京红星);水飞蓟素(批号:C10742879,麦克林);通
14、用型组织固定液(批号:G1101,Servicebio);油红染液、苏木素染液、分化液、返蓝液、甘油明胶封片剂(Servicebio);异丙醇(批号:80109218,国药集团)。甘油三酯(TG,批号:20210819)、总胆固醇(TC,批号:20210530)、丙氨酸氨基转移酶(ALT,批号:20200815)、天冬氨酸氨基转移酶(AST,批号:20210726)、丙二醛(MDA,批号:20200921)、谷胱甘肽(GSH,批号:20209717)(南京建成生物工程研究所);肿瘤坏死因子(TNF-,批号:202109),白介素1(IL-1,批号:202107)、白介素6(IL-6,批号:20
15、2106)(上海酶免生物);实验用水均为超纯水。1.2 仪器与设备TGL-20B高速冷冻离心机(中国上海安亭科学仪器厂);AX224ZH/E十万分之一电子天平(奥豪斯上海);KZ-III-FP高速低温组织研磨仪(武汉赛维尔);SynergyHTX多功能酶标仪(美国伯腾);RE-2000B旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);CRYOSTAR NX50冰冻切片机(Thermo);LEICA 819切片刀(上海徕卡);黏附载玻片(冰冻切片,白漆色带,G6012-2,Servicebio)。1.3 实验动物SPF级ICR小鼠,雄性,体重1525 g,许可证号:SCXK(京)2019-0011,合格证号:
16、110324210102969025斯贝福(北京)。伦理批准号:AWE202209002(动物实验经山西中医药大学医学伦理委员会批准)。实验期间动物饲养于温度25,湿度40%70%的清洁级动物房。442 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第5期1.4 方法1.4.1 决明子水提物的制备 称取决明子200 g,加8倍量的水,浸泡1 h,再加热回流提取2次,每次30 min,将提取液混合浓缩至200 ml(相当于生药1 g/ml),备用。1.4.2 动物分组、造模及给药 参照文献方法15,将60只小鼠适应性饲养一周,按体质量高低,随机分为空白组、模型组、阳性组、决明子水提物
17、低、中、高剂量组(2.25,4.5,9 g/kg)(依据2020年版中国药典,通过人临床剂量换算成小鼠等效剂量,按照折合后剂量的3,9,18倍换算而得),每组10只。空白组与模型组灌胃等体积蒸馏水,阳性组灌胃水飞蓟素(0.2 g/kg),其余各给药组按照相应剂量灌胃给药,连续给药7 d。末次给药9 h后,除空白组外其余各组均按照体质量12 ml/kg一次性灌胃白酒(10 ml/kg),建立急性酒精性肝损伤模型。1.4.3 血液和组织样本采集 最后一次给药结束后,乙醚麻醉,摘眼球取血,室温静置30 min,于3000 r/min离心15 min,得待测血清,放置于-80 冰箱。分离取肝脏并称重,
18、部分肝脏固定于组织固定液中,其余肝脏置于-80 冰箱。1.4.4 体重变化及脏器指数 记录60只小鼠体质量每日的变化,计算小鼠日平均增重;解剖取新鲜肝脏,利用生理盐水清洗干净肝脏,置于滤纸上吸干水分后,称重,计算肝脏的脏器指数。计算按式1、式2。小鼠日平均增重(g)=各组小鼠平均总增重(g)/生长天数(d)式1肝脏指数(%)=肝脏鲜重(g)/体重(g)100%式21.4.5 肝脏组织油红O染色 取肝脏组织同一部位的组织做冰冻切片,经生理盐水清洗后,用4%多聚甲醛溶液固定,冰冻切片,晾干,油红染液浸染68 min。将切片停留3 s后依次浸入60%异丙醇分化2次,各3 s和5 s,再依次浸入纯水中
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