口腔厌氧菌的日常培养.pdf
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1、科技视界Science&Technology Vision33科学课堂SCIENCE CLASSROOM 科普介绍口腔健康是提高生活质量的关键,也是守护全身健康的大门。其中牙周疾病和牙髓病是最常见的口腔感染性疾病,两种疾病与厌氧菌相关,厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌,口腔部位腔隙较多,更利于厌氧菌生长。临床工作中,鉴定口腔中细菌并做药敏实验,防止抗生素滥用对于缺乏先进细菌培养仪器的基层医疗机构是极其困难的,因此,利用简便的仪器培养口腔厌氧菌选择合适的抗生素用于口腔疾病的预防和治疗是必要的。引言牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌是口腔厌氧菌的典型代表,其中牙龈卟啉单胞菌是一种革兰氏阴
2、性厌氧菌,被认为是主要的牙周病原菌1。侵入性牙龈卟啉单胞菌具有大量侵入牙周组织和避免免疫清除的特性,例如黏附宿主细胞的菌毛、用于降解细胞外基质的蛋白酶(即牙龈蛋白酶)和引发大量免疫反应的脂多糖。由于厌氧菌对于定植环境较为挑剔,因此临床上厌氧菌很难分离出来,而且分离后如果不能及时在特定环境下培养,失败率较高,而临床上一旦延迟实施适当的治疗可能会导致失败。厌氧菌在有氧的情况下不能生长,如果要培养厌氧菌,必须创造一个无氧的环境。通常可以在普通培养基中加入还原剂,或用物理、化学的方法去除普通培养环境中的游离氧,以此降低氧化还原电势,主要有疱肉、硫基乙酸钠,牛心脑浸液等培养基2。厌氧菌培养方法有许多,但
3、每种方法均有其利弊。因此,掌握厌氧菌的分离、运输和培养方法对于口腔医生临床与科研均有好处。本文主要对口腔厌氧菌的日常培养方法、效果等做一个科普式分析介绍。1材料与方法1.1 试验材料与仪器血平板(广州,环凯)、牙龈卟啉单胞菌(ATCC33277,作者简介:马海绒,硕士,助教,研究方向为口腔医学教学与研究。通信作者:张华林,博士,教授,研究方向为口腔组织工程与再生修复研究。基金项目:国家自然科学基金(81560191)。口腔厌氧菌的日常培养 马海绒张华林*(宁夏医科大学,宁夏银川750004)摘要:口腔中存在大量的微生物,其中口腔厌氧菌与口腔疾病密切相关,因此,掌握厌氧菌培养的简单方法,对于口腔
4、医生临床与科研均有好处。文章以 Pg 和 Fn 的培养为例进行研究,以期为实验条件有限状况下更好地培养口腔厌氧菌提供一种日常方便、可行、简单、经济的细菌培养、细菌冻存和复苏方法。关键词:口腔;厌氧菌;培养;冻存科学课堂CIENCE&TECHNOLOGY VISION34科技视界科技视界SScience&Technology Vision上海复祥生物)、厌氧消化链球菌(ATCC27337,上海复祥生物)厌氧产气包(美国 BD)、厌氧发生指示条(美国 BD)、厌氧培养盒(日本三菱)、细菌培养箱(电热恒温培养箱)、细菌冻存管(青岛海博)、生物安全柜(美国 Labconco)、显微镜(日本尼康)。1.
5、2 方法121细菌接种、传代与鉴定细菌接种:超净工作台照射紫外灭菌 30 min,用酒精棉球操作台面。用浸润过 75%酒精的脱脂棉球擦拭安培管壁,用酒精灯加热安培管顶端,同时在顶部滴少量的无菌水使其破裂并掰断。用无菌吸管吸取 200 L 无菌水滴入安培管内轻轻震荡使冻干菌体充分溶解呈悬浮状,吸取全部菌体悬浮液,接种在 1 个平板上,分区涂布。打开厌氧产气包和厌氧发生指示条放入厌氧培养盒中,在 37 细菌培养箱中进行培养。培养 24 h,拿出平板进行传代和鉴定。细菌传代:点燃酒精灯,在火焰上部操作,将接种环沿着酒精灯烧约 30 s,随后将接种棒金属部分放在火焰上烧灼,以彻底灭菌。将加热过的接种环
6、放入血平板取部分菌落,注意在取出时接种环不能通过火焰,应迅速插入酒精灯旁的接种管中与其中的无菌水混合均匀,测定麦氏值,由下而上划“Z”字形曲线接种在平板上,完毕后将平板盖在火焰上灭菌,将厌氧产气包和发生指示条放入厌氧培养盒中,在 37 培养箱中进行培养。细菌染色鉴定:用擦片布擦净从载物玻片,用特种铅笔在背面画涂抹的标记范围,为直径 1.5 2.0 cm的圆。用细菌斜面培养物涂片,需预先取一接种环生理盐水放在载物片上,然后再按无菌操作取材法从斜面培养物上取单个菌落,在水滴内轻轻研磨将细菌制成菌悬液,再涂成一薄膜。干燥:可放在空气中自然干燥也可把涂片置于酒精灯火焰的上部烘烤,注意不要将涂膜烤焦。固
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