昆明地区HBsAg与抗-HBs双阳性慢性HBV感染患者流行病学调查及PreS_S基因突变特征.pdf
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1、论著昆明地区H B s A g与抗-H B s双阳性慢性H B V感染患者流行病学调查及P r e S/S基因突变特征*白丽萍1 张颖慧1 杨雪艳1 白丽仙2 马志坚3(1.云南大学附属医院消化内科,云南 昆明 6 5 0 0 2 1;2.玉溪市人民医院儿科,云南 玉溪 6 5 3 1 9 9;3.昆明市第一人民医院急诊科,云南 昆明 6 5 0 0 3 1)【摘要】目的 探讨昆明地区H B s A g与抗-H B s(A n t i-H B s)双阳性乙型肝炎病毒(HB V)感染患者流行病学及P r e S/S基因突变特征。方法 选择2 0 1 8年5月2 0 2 2年4月于云南大学附属医院
2、住院及门诊定量检测乙肝两对半的4 3 8例慢性H B V感染患者为观察对象,将2 0 2例H B s A g(+)/抗-H B s(+)患者作为观察组,将2 3 6例HB s A g(+)/抗-H B s(-)患者作为对照组,对比两组患者临床特征。使用巢式聚合酶链反应扩增出P r e S/S基因全长序列,确定基因型并分析P r e S/S基因突变特征。结果 观察组患者在1 0岁及高于8 0岁人群中的流行率较高,而对照组在2 04 9岁人群中的流行率较高。与对照组比较,观察组患者年龄、H B s A g 2 5 0 I U/m L比例、C型H B V感染及乙肝携带者比例均显著增加(P0.0 5)
3、。成功扩增P r e S/S并测序成功的观察组样本共1 3 2例,其中B型基因8 1例,C型基因5 1例;对照组样本中B型基因1 1 0例,C型基因6 5例。B型基因患者中,与对照组比较,观察组N末端区域突变率明显增加(P0.0 5)。C型基因患者中,与对照组比较,观察组MHR、a决定簇及N末端区域突变率明显增加(P0.0 5)。在观察组中,8 1例B型基因患者中P r e S基因缺失突变1 4例(1 7.2 8%),5 1例C型基因患者中P r e S基因缺失突变1 9例(3 7.2 5%),而在对照组中未发现P r e S基因缺失突变。结论 HB s A g/抗-H B s双阳性H B V
4、感染者在1 0岁及高于8 0岁H B s A g阳性人群多见,H B s A g/抗-H B s双阳性可能与HB s A g突变及P r e S基因突变有关。【关键词】乙型肝炎病毒;乙型肝炎病毒表面抗原;抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体;P r e S/S 区基因;突变【中图分类号】R 5 1 2.6+2 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 1 4 基金项目:云南省基础研究计划(2 0 1 9 F E 0 0 1)通讯作者:马志坚,E-m a i l:d a v i d r o c h e s t 1
5、6 3.c o m引用本文:白丽萍,张颖慧,杨雪艳,等.昆明地区H B s A g与抗-H B s双阳性慢性H B V感染患者流行病学调查及P r e S/S基因突变特征J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 2):1 7 9 3-1 7 9 7.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 1 4E p i d e m i o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o n a n d m u t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f p
6、r e s/s g e n e i n p a t i e n t s w i t h c h r o n i c H B V i n f e c t i o n w i t h d o u b l e p o s i t i v e H B s A g a n d a n t i H B S i n t h e r e g i o nB A I L i p i n g1,Z H A N G Y i n g h u i1,Y A N G X u e y a n1,B A I L i x i a n2,MA Z h i j i a n3(1.D e p a r t m e n t o f G a
7、 s t r o e n t e r o l o g y,T h e A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Y u n n a n U n i v e r s i t y,K u n m i n g 6 5 0 0 2 1,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f P e d i a t r i c s,Y u x i P e o p l e s H o s p i t a l,Y u x i 6 5 3 1 9 9,Y u n n a n,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f Em e
8、r g e n c y,T h e F i r s t P e o p l e s H o s p i t a l o f K u n m i n g,K u n m i n g 6 5 0 0 3 1,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e p i d e m i o l o g y a n d m u t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f p r e s/s g e n e i n p a t i e n t s w i
9、 t h h e p a t i t i s B v i r u s(H B V)i n f e c t i o n w i t h d o u b l e p o s i t i v e HB s A g a n d a n t i H B S(a n t i H B S)i n K u n m i n g a r e a.M e t h o d s F r o m M a y 2 0 1 8 t o A p r i l 2 0 2 2,4 3 8 p a t i e n t s w i t h c h r o n i c HB V i n f e c t i o n w h o q u a
10、 n t i t a t i v e l y d e t e c t e d t w o a n d a h a l f p a i r s o f h e p a t i t i s B i n o u r h o s p i t a l a n d o u t p a t i e n t d e p a r t m e n t w e r e s e l e c t e d a s t h e r e s e a r c h o b j e c t s.2 0 2 H B s A g(+)/a n t i H B S(+)d o u b l e p o s i t i v e p a t
11、i e n t s w e r e t a k e n a s t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p,a n d 2 3 6 H B s A g(+)/a n t i HB S(-)p a t i e n t s w e r e t a k e n a s t h e c o n t r o l g r o u p.T h e d i f f e r e n c e o f c l i n i c a l d a t a b e t w e e n t h e t w o g r o u p s w e r e a n a l y z e d.T h
12、e f u l l-l e n g t h s e-q u e n c e o f p r e s/s g e n e w a s a m p l i f i e d b y n e s t e d p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n,a n d t h e g e n o t y p e w a s d e t e r m i n e d a n d t h e m u t a-t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f p r e s/s g e n e w e r e a n a l y z
13、e d.R e s u l t s T h e p r e v a l e n c e r a t e o f p a t i e n t s i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p i s h i g h e r i n t h e p o p u l a t i o n a g e d 1 0 a n d a b o v e 8 0,w h i l e t h e p r e v a l e n c e r a t e o f p a t i e n t s i n t h e c o n t r o l g r o u p i s h i
14、g h e r i n 3971西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2t h e p o p u l a t i o n a g e d 2 0-4 9.C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e a g e o f p a t i e n t s i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p,t h e p r o p o
15、r-t i o n o f H B s A g 2 5 0 i u/m l,t h e i n f e c t i o n o f t y p e C H B V a n d t h e p r o p o r t i o n o f h e p a t i t i s B c a r r i e r s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n-c r e a s e d(P0.0 5).A t o t a l o f 1 3 2 H B s A g(+)/a n t i H B S(+)s a m p l e s w e r e s u c c e s s
16、 f u l l y a m p l i f i e d a n d s e q u e n c e d,i n-c l u d i n g 8 1 B-t y p e g e n e s a n d 5 1 C-t y p e g e n e s;I n H B s A g(+)/a n t i HB S(-)s a m p l e s,t h e r e w e r e 1 1 0 c a s e s o f B-t y p e g e n e a n d 6 5 c a s e s o f C-t y p e g e n e.I n p a t i e n t s w i t h t y
17、 p e B g e n e,t h e m u t a t i o n r a t e o f N-t e r m i n a l r e g i o n i n d o u b l e p o s i t i v e g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n s i n g l e p o s i t i v e g r o u p(P0.0 5).I n p a t i e n t s w i t h t y p e C g e n e,c o m p a r e d w i t h
18、 t h e s i n g l e p o s i t i v e g r o u p,t h e m u t a t i o n r a t e s o f MHR,a d e t e r m i n a n t a n d N-t e r m i n a l r e g i o n i n t h e d o u b l e p o s i t i v e g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).Am o n g 8 1 p a t i e n t s w i t h t y p e B
19、g e n e,1 4(1 7.2 8%)h a d d e l e t i o n m u t a t i o n o f p r e s g e n e,a n d 1 9(3 7.2 5%)h a d d e l e t i o n m u t a t i o n o f p r e s g e n e i n 5 1 p a t i e n t s w i t h t y p e C g e n e,b u t n o d e l e t i o n m u t a t i o n o f p r e s g e n e w a s f o u n d i n t h e s i n
20、g l e p o s i t i v e g r o u p.C o n c l u s i o n H B s A g/a n t i HB S d o u b l e p o s i t i v e H B V i n f e c t i o n i s c o mm o n i n H B s A g p o s i t i v e p e o p l e a g e d 1 03I U/m L,H B s A g阳性。临床病理资料齐全。排除标准:合并其他病毒性肝炎。合并免疫功能障碍。1.2 主要仪器与试剂 A D V 2 4 0 0全自动生化分析仪(S i m e n s,德国),荧
21、光定量P C R仪(R o c h e,瑞士),A B I 7 3 0 0荧光定量P C R检测仪(A B I,美国)。H B V核酸定量测定试剂盒(上海通派生物科技有限公司),病毒D NA/R NA提取试剂盒(T h e r m o F i s h e r,美国),A L T检测试剂盒(S i m e n s,德国),P r e m i x T a q、PMD 1 9-T V e c t o r C l o n i n g K i t、E.c o l i J M 1 0 9 C o m p e t e n t C e l l s及P C R产物纯化试剂盒(T a K a R a,日本)。1.
22、3 检测H B s A g与抗-H B s 采用化学发光仪进行H B s A g与抗-H B s检测,检测过程严格按照试剂盒操作规程。判定标准:H B s A g0.0 5 I U/m L为阳性;抗-H B s 1 0 m I U/m L为阳性。1.4 血清H B V D N A提取及检测 采集血清样本,提取H B V D N A,使用A B I 7 3 0 0荧光定量P C R检测仪进行定量检测,检测范围为5 1 02 5 1 09I U/m L。1.5 H B V D N A 的P r e S/S 区P C R扩增与序列检测 使用E x p a n d H i g h F i d e l
23、i t y P C R s y s t e m进行巢式P C R扩增,第一轮以H B V D N A为模板,第二轮以第一轮P C R产物为模板。P C R引物由上海生工合成,第一轮扩 增 引 物:H B V D e l-F-o u t:5 -G C C T C A T T T T-G Y G G G T C A C C A T A T T C-3;H B V D e l-F-i n:5 -G G G T-C A C C A T A T T C T T G G G A A C A A G A-3;H B V-9 7 5:5 -A A T T C G T T G A C A N A C T T T
24、 C C A A T C A A T。第 一 轮P C R反 应 体 系 为:E x T a q 1 2.5 L、上 下 游 引 物 各0.5 L、并无菌去离子水补足至总体积2 5 L。P C R反应条件为:9 5 变性1 0 s,5 5 退火1 5 s,7 2 延伸9 0 s,共3 9个循环,最后7 2 修复延伸5 m i n。第二轮P C R反应体 系为:E x T a q 2 5 L、上 下 游 引 物 各1 L、并无菌去离子水补足至总体积5 0 L。P C R反应条件为:9 5 变性1 0 s,5 5 退火1 5 s,7 2 延伸9 0 s,共3 9个循环,最后7 2 修复延伸5 m
25、i n。1%琼脂糖凝胶电泳检测P C R产物目的条带,并送至上海生4971西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2工进行测序,测序结果用C E x p r e s s、B i o E d i t等软件进行拼接,并于N C B I的G e n B a n k中H B V野生株对比,确定基因型。1.6 统计学分析 数据分析采用S P S S 2 3.0版,计量资料以(xs)表示,组间比较采用t检验;计数资料使用(%)表示,组间比较采 用2检验。以P
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