细胞工程自选实验.doc

植物细胞工程
自
选
实
验
报
告

学院班级：农学院09级生物技术4班
学 号：20090101310100
姓 名：李晓芳

开题报告
研究进展：植物细胞工程是一门以植物组织培养为基础，具有广泛的应用前景和使用价值的生物技术。随着该技术的不断完善和发展，植物细胞工程已经在部分经济植物的育种和繁殖中发挥巨大作用。目前根据人们的需要已经相继完善和发展了一些具有特色的实用技术，包括植物细胞培养技术、单倍体育种和胚胎培养，制备转基因植物等。致谢技术的发展应用，使得植物细胞工程在人类的现代生活中的作用更加突出，并在经济植物繁殖，植物新品种选育和有用次生代谢物的产生方面有了重大突破。
实验内容：以新鲜的洋葱为实验材料，剥去外围的鳞茎组织，留下中间2~3cm茎尖，在升汞中消毒后再剥去外层最终留下约1~2cm的茎尖接种于灭菌培养基内繁殖生出愈伤组织，待20~30天后再将其接种于生根培养基内。灭菌时间根据不同材料而定。
材料：市售的新鲜洋葱
培养基：MS+NAA0.1mg/l+BA0.01mg/l+30g/l白糖+8.5g/l卡拉胶

洋葱愈伤组织培养
摘要：植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。通过洋葱茎尖分生组织培养(简称茎尖培养),使感染病毒病的植物重新获得无病毒植物。初步了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
关键词：洋葱茎尖 组织培养 愈伤组织
洋葱又名球葱、圆葱、玉葱、葱头，荷兰葱，属百合科蒜属，为2年生草本植物。洋葱由于原产于大陆性气候区，其独特的口味已经被千千万万人接受。近年来对洋葱的组织培养技术成为一个热门的研究领域。洋葱组织培养可以由鳞茎培养获得，也可以由茎尖培养获得。而茎尖培养已成为最为广泛使用的方法.
为什么会使用茎尖呢?
茎的生长点培养，实际就是茎尖培养茎尖培养脱毒的原理是茎尖几乎不含病毒，采用旺盛分裂的茎尖组织培养，就有可能去除病毒。切取茎尖的大小与脱毒效果直接相关，茎尖越小，去病毒机会越大。通常茎尖取材大小，与脱病毒效果成反比，与茎尖成活率成正比。其次幼嫩组织分裂能力强，分化程度低，易脱分化诱导成愈伤组织。
洋葱组织培养实验的基础知识。
一 实验目的
1、了解和掌握基础组织培养的原理和基本操作技术。
2 、掌握植物脱毒的基本方法。
二、实验原理
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。茎的生长点培养，实际就是茎尖培养茎尖培养脱毒的原理是茎尖几乎不含病毒，采用旺盛分裂的茎尖组织培养，就有可能去除病毒。切取茎尖的大小与脱毒效果直接相关，茎尖越小，去病毒机会越大。通常茎尖取材大小，与脱病毒效果成反比，与茎尖成活率成正比。其次幼嫩组织分裂能力强，分化程度低，易脱分化诱导成愈伤组织。

三 实验仪器及试剂材料
仪器：感量为0.0001g的电光分析天平 烧杯 玻璃棒 容量瓶 标签纸 灭菌锅 无菌操作台 培养瓶 镊子 解剖刀 酒精灯
试剂;大量元素;NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO 4·7H2O KH2PO4
Fe盐:FeSO4 ·7H2O Na2·EDTA·7 H2O
微量元素：KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O
维生素：烟酸 VB1 VB6 肌醇 甘氨酸
材料：市场上购得的洋葱数个
四 实验步骤
（一）培养基配置：
1按基本用量配MS培养基。洋葱茎尖组织培养的配方为MS+NAAmg/l+BA5mg/l +30g/l白糖+8.5g/l卡拉胶
2.加琼脂和无离子水至定容量的70%左右，加热使琼脂溶解；
3.琼脂溶解后，加入培养基母液、激素、糖等，稍加热使糖溶解；
4.糖溶解，加无离子水至定容量；
5.充分搅拌后，测pH值至要求值（PH=5.8）；
6.培养基分装入瓶。
（二）灭菌
1. 培养基灭菌（9瓶）;
2. 无菌水3瓶；
3. 牛皮纸一袋；
（三）接种
1. 接种室紫外灯照射灭菌；无菌操纵台、接种器具（解剖刀、酒精灯、镊子）灭菌。
2. 接种。首先将洋葱除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净。把材料切割成适当大小2~3cm为宜，灭菌容器能放入。用0.01%的升汞消毒12~15min。取出后放在灭过菌的牛皮纸上切割成1~2cm的大小。一分为二。将其接种在无菌培养瓶中。
（四）培养
培养20~25天。
五 结果
9瓶培养中有4瓶污染杂菌，5瓶的愈伤组织生长良好。
六 讨论
（1）导致结果失败的主要原因有：
灭菌不彻底。培养基灭菌、材料灭菌时间不够。
所选的材料有问题，生长点有细菌侵入。
在接种过程中污染了杂菌。

在配培养基时称量不精确导致，植物生长受阻。
（2）组织培养中出现黄化的原因有几种？
答：黄化是指在组培过程中由于培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的幼苗整株失绿，全部或部分叶片黄化、斑驳。引起黄化的主要原因是培养基中Fe的含量不足；各矿质营养不均衡；培养环境通气不良，瓶内乙烯含量升高；激素配比不当；糖用量不足或长时间不转移糖已耗尽；PH值变化过大；培养温度不适；光照不足等。
解决的方法是，首先在配制母液和培养基的制作过程中，要检查仪器设备是否准确，还要认真细致地核对每项称量的每一个环节；及时转接培养物；使用透气的封口膜以改善瓶内通气状况；适当调节pH值、激素配比和无机盐浓度；配制培养基时切记不要忘记加糖；控制培养室内的温度；适当增加光照；另外，在培养基中添加抗生素类物质如青霉素、链霉素、头孢霉素等，有时也会出现幼苗黄化现象，应适当减少用量或停止使用。.
通过开展本实验，我对植物组织培养的认识由初时的了解到如今能熟练的掌握基本操作技术。这是一门对我们都很有用的技术，我还从中学到了不断总结缺点，开拓创新的良好方法。只要我们能很好的讲起吧运用到实践中去，它会是一笔价值不菲的财富。

（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）