茭白提取物及不同溶剂萃取物的抗氧化活性研究.pdf
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1、138功能与营养摘要:以茭白干和鲜茭白为原料,采用溶剂法得到茭白醇提物和水提物,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶剂对艾白醇提物进行萃取测定茭白提取物及各溶剂萃取物中总多酚、总黄酮和总多糖含量,并分析其对DPPH、A BT S、羟基自由基的清除活性和总还原能力。结果表明:乙酸乙酯萃取物总多酚和总黄酮含量最高,鲜艾白醇提物总多糖含量最高;白提取物及各溶剂萃取物均检测出抗氧化活性,乙酸乙酯和正丁醇萃取物相对活性更高,可作为天然抗氧化剂;总多酚、总多糖含量与DPPH、羟基自由基清除能力呈极显著相关(P0.01)。关键词:茭白提取物;总多酚;总黄酮;总多糖;抗氧化活性Study on the antio
2、xidant activity of extracts ofZizania latifolia and extracts from different solventsSONG Ya-jing,LIN Qian-jin,WU Yan-xin,WANG Zheng-liang,ZHANG Ya-fen(College of Life Sciences,China Jiliang University,Hangzhou 310018,Zhejiang,China)Abstract:The ethanol extract and water extract of Zizania latifolia
3、were obtained by solvent method withdry and fresh Zizania latifolia as raw materials.The ethanol extract of Zizania latifolia was extracted withpetroleum ether,ethyl acetate,and n-butanol solvents respectively.The contents of total polyphenols,total flavonoids,and total polysaccharides in Zizania la
4、tifolia extract and solvent extracts were deter-mined,and their scavenging activity on DPPH,ABTS,and hydroxyl free radicals and total reducing abil-ity were analyzed.The results showed that the content of total polyphenols and flavonoids in the ethyl ac-etate extract was the highest,while the conten
5、t of total polysaccharides in the ethanol extract of fresh Zi-zania latifolia was the highest.The extracts of Zizania latifolia and various solvents showed antioxidantactivity,while the extracts of ethyl acetate and n-butanol showed higher relative activity and could beused as natural antioxidants.T
6、he content of total polyphenols and polysaccharides was highly significantlycorrelated with DPPH and hydroxyl radical scavenging ability(P 0.01).Key words:Zizania latifolia extract;total polyphenols;total flavonoids;total polysaccharides;antioxi-dant activity中图分类号:TS201.2菱白是我国第2 大水生蔬菜,经济效益显著,是蔬菜中的佳品
7、。菱白营养丰富,被誉为“水中人参”,有着不菲的药用价值 。研究发现,菱白提取物具有抗过敏 2 功效,菱白苞叶和菱白膨大茎具有抗氧化活性 3-5。本研究拟以菱白膨大茎为原料,收稿日期:2 0 2 2-10-0 7基金项目:中国计量大学基本科研业务费项目资助(2 0 2 1YW21)作者简介:宋亚静(19 9 6 一),女,硕士,研究方向为药学。通信作者:张雅芬(19 8 7 一),女,博士,副教授,研究方向为生物安全及生物计量。粮食与油脂菱白提取物及不同溶剂萃取物的抗氧化活性研究宋亚静,林前锦,吴妍欣,王正亮,张雅芬(中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310 0 18)文献标志码:A2023年第
8、36 卷第11期文章编号:10 0 8-9 57 8(2 0 2 3)11-0 138-0 6采用9 5%乙醇(体积分数,下同)对菱白进行提取,并用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶剂对菱白醇提物进行萃取,研究溶剂类型对提取物中总多酚、总黄酮和总多糖含量的影响,以及各个提取物抗氧化活性的差异,为研究菱白抗氧化相关食品提供参考。2023年第36 卷第11期1材料与方法1.1 材料与试剂菱白(浙菱7 号),浙江金华基地种植;无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、1,1-二苯基-2-苦基自由基(DPPH)、2,2-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、三氯乙酸、铁氰化钾、硫酸亚铁、水杨酸、
9、三氯化铁、碳酸钠、无水氯化铝、氢氧化钠、抗坏血酸、过硫酸钾、质量分数9 9.5%过氧化氢、二硝基水杨酸(DNS)、亚硝酸钠、邻苯三酚、1.5 mol/L Tris-HCl缓冲液、2 0 磷酸盐(PBS)缓冲液、福林酚、没食子酸标准品、(+)-儿茶素标准品,分析纯。1.2仪器与设备XLH6B密封型摇摆式粉碎机,广州市旭郎机械设备有限公司;UV-1600B型紫外可见分光光度计,上海美谱达仪器有限公司;KQ-250B型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;FlexA-200型酶联免疫分析仪,杭州奥盛仪器有限公司;FA2004型电子天平,上海舜宇恒平科学仪器有限公司;R-210型旋转蒸发仪,步琦实验室
10、设备贸易(上海)有限公司。1.3试验方法1.3.1艾白提取物及各溶剂萃取物的制备1.3.1.1艾白提取物的制备菱白干醇提物的制备:取3kg鲜菱白肉质茎切成小块状,于烘箱中晒干得菱白干燥物,粉碎过0.178mm筛,取10 0 g过筛后粉末加10 0 0 mL体积分数9 5%乙醇,于7 0 超声2 h,抽滤后再向滤渣中添加10 0 0 mL体积分数9 5%乙醇,以7 0 超声2h,抽滤后将2 次滤液合并,旋蒸至无醇味,加适量水蒸干乙醇,收集后冷冻干燥,得醇提物(菱白干醇提物)。菱白干水提物的制备:将醇提物制备中抽滤后的残渣置于烘箱烘干后,取之称重并加人其10 倍质量的水,浸泡并搅拌4h,以7 0
11、水浴3h,重复2次,过滤后旋蒸至50 0 mL,添加5倍体积9 5%乙醇,在4左右房间过夜。以50 0 0 r/min离心5min得沉淀物,加少量水旋蒸去除多余乙醇,收集后冷冻干燥,得水提物(菱白干水提物)。鲜菱白醇、水提物的制备:取3kg鲜菱白肉质茎切成小块状,于榨汁机中榨汁得到菱白汁水和剩余残渣,在残渣中添加其5倍体积的9 5%乙醇,超声并水浴(步骤同上),后经过滤纸过滤,得乙醇提取液,将菱白汁添加至乙醇提取液中,静置4h,过粮食与油脂滤,以50 0 0 r/min离心5min后冷冻干燥,得水提物(鲜菱白水提物)。上清液继续旋蒸至无醇味后冷冻干燥,得醇提物(鲜菱白醇提物)。1.3.1.2各
12、溶剂萃取物的制备向菱白醇提物中加入适量水溶解,再分别加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,将所得上层液减压旋蒸,经冷冻干燥后即得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物以及萃余物 6 1.3.2总多酚含量的测定参考文献 7 的方法并作修改。总多酚含量测定采用福林酚法。称取菱白提取物及各溶剂萃取物粉末,加人蒸馏水配制成不同质量浓度的样品溶液。使用酶联免疫分析仪建立标准曲线并测定样品溶液中总多酚含量。以没食子酸质量浓度(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为y1=7.2867xl+0.1098,R=0.994。总多酚含量计算见式(1)。含量=PxVxNm式中:p为从标准曲线上查得的
13、菱白提取液中各指标质量浓度,mg/mL;V为提取液体积,mL;N为稀释倍数;m为菱白提取物质量,%。1.3.3总黄酮含量的测定参考文献 8 的方法并作修改。采用NaNO2-AICl,法,使用酶联免疫分析仪建立标准曲线并测定样品溶液中总黄酮含量。以儿茶素质量浓度(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得方程为y2=1.6254x-0.003,R2=0.999。总黄酮含量计算见式(1)。1.3.4总多糖含量的测定参考文献 9-10 的方法并作修改。采用DNS 法,使用紫外可见分光光度计进行试验。以葡萄糖质量浓度(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线为y3=5.2429x
14、3+0.0004,R=0.995。精确吸取1mL样品溶液,添加2 mLDNS,充分混匀后,置于沸水浴中反应5min,迅速流水冷却,并将溶液用蒸馏水稀释至2 0 倍体积,测定其在波长540nm处的吸光度。总多糖含量计算见式(1)。1.3.5提取物及各溶剂萃取物抗氧化活性的测定1.3.5.1DPPH自由基清除能力的测定用蒸馏水配制成相应质量浓度梯度的菱白提取物及各溶剂萃取物样品溶液和维生素C溶液。分别取不同质量浓度的样品溶液0.5mL,添加139(1)1401.5mL0.1 mmol/LDPPH乙醇溶液,避光反应30min后,在波长510 nm处测定混合物的吸光度A,1-14。以等体积蒸馏水代替样
15、品溶液作为空白溶液,维生素C作对照组。每个试验需重复3次,结果取平均值,菱白提取物对DPPH 自由基的清除率计算见式(2),并通过 SPSs统计分析得到 Ic.,5。DPPH自由基清除率=(式中:A。为空白溶液吸光度;A2为以等体积无水乙醇代替DPPH乙醇溶液的吸光度。1.3.5.2羟基自由基清除能力的测定参考文献 16 的方法进行测定,以等体积蒸馏水代替样品溶液作为空白溶液,维生素C作对照组。每个试验组进行3次重复,结果取平均值,菱白提取物对羟基自由基的清除率计算见式(3),并通过SPSS 统计分析得到ICs0。羟基自由基清除率=(1式中:A,为空白溶液吸光度;A4为各样品溶液的吸光度;A,
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