动物疫病检测中环境拭子采集技巧 (1).pdf

8520245技术推广实用技术动物疫病检测中环境拭子采集技巧王建发1，金 鹏2（1.通海县里山乡农业农村综合服务中心，云南 通海 652705；2.通海县动物疫病预防控制中心，云南 通海 652700）1 准备工作1.1拭子选择（1）拭子与样品保存管选择。虽然木柄灭菌脱脂棉签作为拭子也能使用，但为提高检测敏感性，推荐使用植绒、聚丙烯材质拭子，样品保存管尽量选择无菌、对核酸无吸附作用的螺旋盖塑料管。（2）当1个保存管需装多根拭子时，要提前测试样品保存管与拭子配套性，防止实际操作时装不了。（3）拭子长度。拭子长度不小于10cm，特别是在采样与装拭子的人不同情况下，拭子太短容易被手污染。1.2保存液添加用量样品保存管盛装保存液液量以放入拭子后不会溢出，也不会被拭子吸干为宜。一般5mL样品保存管添加约3mL保存液，2mL样品保存管添加约1.3mL保存液，预期采样后拭子干燥时可稍微增加，拭子潮湿应适当减少。2 规划采样路线2.1规划路线采样前根据采样需求及采样对象实际情况规划采样路线，相对洁净区域先采，污染较重区域后采，采样路线尽量不要交叉，不可避免出现交叉时，一定不要将采样人员曾路过及脚踩过的位置选作采样点。2.2确定顺序除了规划整体采样路线，采集具体对象时，也要注意采样顺序。以猪圈为例：采集较大猪圈时，可以按顺时针或逆时针方向依次采样；猪圈较小时采集圈门附近中心站在中心采集剩下3个拭子，每采1个都退回到中心（见图1）。图 1 圈舍拭子采集顺序3 具体位点选择3.1避开消毒点不要选择消毒剂明显残存的地方。一方面该点多半消毒彻底，采样意义不大，另一方面将粘带消毒剂的拭子放入样品保存管后，可能导致其他拭子采集的病毒核酸被破坏。3.2确定取样点数采集圈舍时，通常同时采集东、西、南、北、中5个方位点，可以简单将圈舍分成中间及四角5个区域，每个区域采1根拭子，具体位点在对应区域立体空间范围内，除了地面，还能采集墙面、缝隙、水嘴、料槽，甚至包括屋梁、灯具等。4 采样操作注意事项4.1避免交叉感染所有采样人员应穿戴必要的个人防护用品，采样过程要小心谨慎，避免人员、环境、样品之间发生交叉污染。4.2保证准确性整个采样过程中，拭子前段应避免接触采样对象以外的任何物品，在交接拭子及将拭子装入样品保存管时应尤为注意。4.3防止棉头掉落使用拭子采样时，既要充分蘸取环境中的灰哲理清静不在热闹繁杂中，更不在一颗所求太多的心中，放下挂碍，开阔心胸。8620245技术推广实用技术尘、污渍，又要注意防止棉头掉落，一般左右擦拭或画圈较好。4.4采样速度采集完成后，拭子应尽快放入样品保存管中，长时间手持会加大污染风险，造成已采到的病原脱落。4.5保存液量的影响拭子放入样品保存管前，先观察管中保存液量，如果拭子太湿或保存液太多有溢出风险，应先处理。4.6关闭保存管，避免阳光直射样品保存管盖子在采好样品后再打开，放好拭子后立即关闭。减少样品保存管暴露在室温下的时间，避免阳光直射。4.7拭子放入方法往样品保存管放入拭子时，应逐根放入，污渍较多、容易掉落的先放。拭子放入样品保存管后不要插到底才剪断，防止留下的签杆太长，导致样品保存管盖子无法完全闭合。4.8拭子手持方法采样数量较多、人员不足情况下，可以用手指缝隙夹持拭子（方法见图2）。相邻两个指缝前后交错夹，棉头朝向地面。一只手1次能同时夹带装入4个样品保存管的拭子，但容易出现拭子掉落、病原脱落、不同样品保存管样品间污染情况。5 导致结果误差原因分析5.1环境中存在病原未能检出一是采样数量太少，未采到存在病原位点。二是拭子擦拭力度太轻，未能将存在病原的污渍抹到拭子上。三是沾染消毒剂，导致病原核酸被破坏。四是已采到的病原（灰尘）从拭子上脱落。五是样品保存液升温、变质。图2 单手持拿多个样品5.2环境中无病原却检出阳性一是防护用品或工具未充分灭菌。二是未按无菌操作，拭子、保存液、样品保存管等被污染。5.3阳性样品数量大于实际情况一是因保存液溢出、采样人员手套等被污染、采样操作不规范等原因，导致阴性样品被阳性样品污染。二是采样路线交叉，采到人员移动过程中扩散的病原。6 小 结动物疫病检测样品的采集是一项非常重要的基础工作，千万不能因其简单而忽视，不合格采样轻则导致时间、资源浪费，重则导致结果误判，牵连后续检测、数据分析、处置、甚至影响防疫策略制定。因此，相关人员在采样中，一定要秉持谨慎负责的精神，万勿轻视。收稿日期：2023-11-07农事百科引进国外优质高产奶牛冻精及性控冻精，加快遗传改良进展、加速扩大优良奶牛群体。生猪标准化养殖