高效液相色谱法同时检测洛匹那韦和利托那韦血药浓度.pdf

172024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著高效液相色谱法同时检测洛匹那韦和利托那韦血药浓度厉琳琳，陈方亮，谢颖洁浙江省台州医院、台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院，浙江台州 318050【摘要】目的 建立高效液相色谱法（HPLC）同时检测洛匹那韦（LPV）和利托那韦（RTV）血药浓度的方法。方法 流动相为乙腈和0.01 mol/L 磷酸二氢钠，体积比 56 44，流速 1 ml/min，紫外检测波长为 210 nm 和 215 nm 双波长，柱温 35。取血浆 100 l，加入 2 g/ml地西泮内标100 l，涡旋振荡1 min，12 000 r/min离心10 min，取上清液100 l进样分析。结果 双波长均显示LPV在1.57201 g/ml 浓度范围内以及 RTV 在 0.38 48.5 g/ml 浓度范围内线性均良好（分别为r=0.999 5 和r=0.999 6）。在 LPV 和 RTV 极低浓度（2.47 g/ml、0.62 g/ml）、低浓度（7.41 g/ml、1.85 g/ml）、中浓度（22.22 g/ml、5.56 g/ml）、高浓度（66.67 g/ml、16.67 g/ml）质控样品中，210 nm处LPV和RTV的日内变异和日间变异分别为0.78%12.32%、2.07%13.41%和2.70%19.41%、4.36%24.86%；215 nm 处分别为 2.36%9.30%、2.82%11.20%和 1.18%27.12%、1.30%28.13%。四个浓度质控样品的准确度，210 nm 条件下是 85.30%123.33%，215 nm 条件下是 89.20%110.81%。四个浓度质控样品的方法学回收率，210 nm 条件下是 85.08%111.66%，215 nm 条件下是 91.05%111.41%。结论 本方法经济便捷，适用于临床 LPV 和 RTV 血药浓度的检测。【关键词】洛匹那韦；利托那韦；HPLC；血药浓度 Simultaneous determination of Lopinavir and Ritonavir blood concentrations by high performance liquid chromatographyLI Lin-lin,CHEN Fang-liang,XIE Ying-jie.Taizhou Hospital of Zhejiang Province affiliated to Wenzhou Medical University、Enze Hospital,Taizhou Enze Medical Center(Group),Taizhou 318050,China.【Abstract】Objective To establish a method for the simultaneous determination of Lopinavir(LPV)and Ritonavir(RTV)blood concentrations by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods The mobile phase was acetonitrile and 0.01 mol/L sodium dihydrogen phosphate,the volume ratio was 56:44,the flow rate was 1 ml/min,the UV detection wavelength was 210 nm and 215 nm,and the column temperature was 35.100 l of plasma was taken,100 l of 2 g/ml diazepam internal standard was added,vortex shaking for 1 min,centrifuged at 12 000 r/min for 10 min,and 100 l of supernatant was taken into the sample for analysis.Results The linearity of both wavelengths was good at 1.57201 g/ml LPV and 0.3848.5 g/ml RTV(r=0.999 5 and r=0.999 6,respectively).In the quality control samples of LPV and RTV at extremely low concentration(2.47 g/ml,0.62 g/ml),low concentration(7.41 g/ml,1.85 g/ml),mediumconcentration(22.22 g/ml,5.56 g/ml)and high concentration(66.67 g/ml,16.67 g/ml),the intra-day variation and inter-day variation of LPV and RTV at 210 nm were 0.78%12.32%,2.07%13.41%and 2.70%19.41%,4.36%24.86%,respectively.At 215 nm,they were 2.36%9.30%,2.82%11.20%and 1.18%27.12%,1.30%28.13%,respectively.The accuracy of the four concentration quality control samples was 85.30%123.33%at 210 nm,and 89.20%110.81%at 215 nm.The methodological recovery of the four concentration quality control samples was 85.08%111.66%at 210 nm,and 91.05%111.41%at 215 nm.Conclusion This method is economical,convenient,suitable for determination of clinic LPV and RTV blood concentrations.【Key words】Lopinavir；Ritonavir；HPLC；Blood concentration据统计，截至 2021 年 10 月底，全国报告现存艾滋病患者114 万例1。艾滋病病毒（HIV）主要攻击人类的免疫系统，使机体无法对病毒、细菌等外来感染物做出迅速反应，继而诱发各种感染性疾病和肿瘤。2019 年，卷席全球的新型冠状病毒攻击人类呼吸系统，传染性极强、传播范围极广。针对艾滋病、新型冠状病毒感染，目前没有特效药，一些抗病毒药物能够抑制、干扰病毒复制，但是需要在感染早期使用。洛匹那韦（Lopinavir，LPV）和利托那韦（Ritonavir，RTV）的复合制剂（LPV/r）又称克力芝，对抗逆转录病毒有成效，能延长患者生存时间、提高患者生命质量，降低病毒对机体的侵袭率2，研究其在患者体内的血药浓度有重要意义。已有研究3 表明，艾滋病患者可长期使用LPV/r。新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第六版）4 提出，推荐使用 LPV/r 对患者进行治疗。但是，随着研究的不断深入，我们对新型冠状病毒的了解更深入，新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第八版）5 提出，不推荐单独使用 LPV/r，但是可以与其他药物联合使用。基金项目：2020 年台州市第二批社会发展科技计划项目 （20ywb76）2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 172024医师在线杂志 第4期-拼.indd 172024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43182024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著国内外大部分文献是用质谱法检测 LPV/r 的血药浓度，虽然检测结果准确度高，但是价格昂贵，不适合我国国情，故本实验旨在建立用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）检测 LPV/r 血药浓度的实验方法。1 材料与方法1.1 对照品与试剂详见表 1。1.2 主要仪器高 效 液 相 色 谱 仪 LC-2040C（日 本 岛 津 公 司）、Labsolution 色谱数据处理系统、VORTEX-5 涡旋振荡仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）、HC-2518 高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、分析电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）、雷磁 pHS-3E pH 计（上海精密科学仪器有限公司）、超声波清洗机CQ-80A（上海跃进医用光学器械厂）、电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）。1.3 色谱条件色谱柱为 Symmetry C18（4.6 mm250 mm，5 m）分析柱（批号 WAT054275）。流动相为乙腈和 0.01 mol/L 磷酸二氢钠（NaH2PO4），pH=4.80，体积比 56 44。流速为1 ml/min。紫外检测波长为 210 nm 和 215 nm 双波长。柱温为 35。1.4 储备液配制2 mg/ml LPV 储备液：准确称取 LPV 标准品 0.02 g（实取 0.020 1 g）于 10 ml 容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度线，充分混匀，实际浓度为 2.01 mg/ml。1 mg/ml RTV 储备液：准确称取 RTV 准品 0.01 g（实取0.970 0 g）于 10 ml 容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度线，充分混匀，实际浓度为 0.97 mg/ml。2 g/ml 地西泮乙腈内标溶液：准确称取地西泮 0.02 g 于10 ml 容量瓶中，加乙腈溶解稀释至刻度线，充分混匀，即得。0.01 mol/L NaH2PO4缓 冲 溶 液：准 确 称 取 1.560 1 g NaH2PO4于 1 000 ml 容量瓶中，加入纯化水至刻度线；充分混匀；加入浓磷酸（H3PO4）滴定至 pH=4.8，抽滤待用。1.5 血浆样品处理准确吸取血浆样本 100 l 于离心管，加入 2 g/ml 地西泮乙腈内标溶液 100 l；涡旋振荡 1 min；12 000 r/min离心 10 min；转移上清液 100 l 于样品瓶中。1.6 标准曲线和质控样品的制备1.6.1 标准曲线的制备样品 A：吸取标准储备溶液 LPV（2 mg/ml）100 l，RTV（1 mg/ml）50 l，加入空白血浆 850 l，配制成浓度为LPV 200 g/ml，RTV 50 g/ml。样品 B：吸取 A 溶液 500 l，加入空白血浆 500 l，配制成浓度为 LPV 100 g/ml，RTV 25 g/ml。样品 C：吸取 B 溶液 500 l，加入空白血浆 500 l，配制成浓度为 LPV 50 g/ml，RTV 12.5 g/ml。样品 D：吸取 C 溶液 500 l，加入空白血浆 500 l，配制成浓度为 LPV 25 g/ml，RTV 6.25 g/ml。样品 E：吸取 D 溶液 500 l，加入空白血浆 500 l，配制成浓度为 LPV 12.5 g/ml，RTV 3.125 g/ml。样品 F：吸取 E 溶液 500 l，加入空白血浆 500 l，配制成浓度为 LPV 6.25 g/ml，RTV 1.563 g/ml。样品 G：吸取 F 溶液 250 l，加入空白血浆 750 l，配制成浓度为 LPV 1.563 g/ml，RTV 0.375 g/ml。1.6.2 质控样品的制备样品 H：吸取 A 溶液 250 l，加入空白血浆 500 l，配制成溶液浓度 LPV 66.67 g/ml，RTV 16.67 g/ml。样品 M：吸取 H 溶液 250 l，加入空白血浆 500 l，配制成溶液浓度 LPV 22.22 g/ml，RTV 5.56 g/ml。样品 L：吸取 M 溶液 250 l，加入空白血浆 500 l，配制成溶液浓度 LPV 7.41 g/ml。RTV 1.85 g/ml。样品 LL：吸取 L 溶液 250 l，加入空白血浆 500 l，配制成溶液浓度 LPV 2.47 g/ml，RTV 0.62 g/ml。1.6.3 空白对照的配制方法同 1.6.2 质控样品的制备，将空白血浆换成色谱级甲醇。1.7 线性范围以峰面积与内标峰面积的比值（X）为横坐标，LPV、RTV 总浓度（Y）为纵坐标，作线性回归分析，采用加权最小二乘法，获得回归方程。1.8 精密度与准确度高（样品 H）、中（样品 M）、低（样品 L）、极低（样品 LL）四个浓度的质控样品各 6 份（n=6），各浓度每天取 1份进行分析测定，计算日间变异。同批处理高、中、低、极低四个浓度的质控样品各 5 份（n=5），各浓度在 1 d 中分析测表 1 对照品与试剂名称厂家批号纯度/浓度洛匹那韦对照品上海源叶生物科技有限公司M12F11L10864299%利托那韦对照品上海源叶生物科技有限公司H03D9Z76283 99%地西泮对照品天津金耀药业有限公司2101051 99.9%乙腈天津市四友精细化学品有限公司211109 99.9%甲醇天津市四友精细化学品有限公司211116 99.9%磷酸二氢钠上海试剂总厂20171220 99.0%注：水为实验室纯化水2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 182024医师在线杂志 第4期-拼.indd 182024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43192024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著定 5 次，计算日内变异。精密度用质控样品测定值的相对标准偏差（RSD）表示，准确度用质控样品测定均值对理论值的相对偏差（RE）表示。1.9 提取回收率高、中、低、极低四个浓度的质控样品各 5 份（n=5），同时配制高、中、低、极低四个浓度不含血浆的质控样品各5份，检测 1 次，计算提取回收率。2 结果2.1 色谱行为本实验条件下，内标、LPV、RTV 甲醇溶液各峰形尖锐，与杂峰分离良好，见图 1。在本色谱方法条件下，空白血浆样品经处理，进样分析后图谱只在溶媒峰位处显峰，在内标、LPV、RTV峰位处背景干净，无杂峰干扰，见图 2。在本实验条件下，在 210 nm（红色）处，内标地西泮、LPV、RTV 的保留时间分别为：6.942、8.303、9.443 min。在215 nm（蓝色）处，内标地西泮、LPV、RTV的保留时间分别为：6.941、8.302、9.441 min。见图 3。2.2 线性关系在 210 nm 条件下，LPV 在 1.57 201 g/ml 内线性良好，线性方程：Y=125.014 3 X 0.284 12（r=0.999 5，n=7）。RTV在 0.38 48.5 g/ml 内线性良好，线性方程：Y=9.771 8 X 0.571 29（r=0.999 6，n=7）。在 215 nm 条件下，LPV 在 1.57 201 g/ml 内线性良好，线性方程：Y=95.948 32 X 0.835 54（r=0.999 5，n=7）。RTV在 0.38 48.5 g/ml 内线性良好，线性方程：Y=16.090 49 X 0.918 55（r=0.999 6，n=7）。2.3 精密度与准确度210 nm 条件下，LPV 的日内变异为 0.78%12.32%，日 间 变 异 为 2.07%13.41%，RTV 的 日 内 变 异 为 2.70%19.41%，日间变异为 4.36%24.86%。高、中、低、极 低四个浓度质控样品的准确度在 85.30%123.33%。见表 2。215 nm 条件下，LPV 的日内变异为 2.36%9.30%，日间变异为2.82%11.20%，RTV的日内变异为1.18%27.12%，日间变异为 1.30%28.13%。高、中、低、极低四个浓度质控样品的准确度在 89.20%110.81%。见表 3。2.4 回收率210 nm条件下，LPV高、中、低、极低浓度质控样本（n=5）的绝对回收率分别为 102.12%、85.08%、94.69%、99.18%，图 1 内标、LPV、RTV 甲醇溶液对照品色谱图图 2 空白血浆色谱图图 3 空白血浆加内标和对照品色谱图表 2 210 nm 处精密度与准确度药品质控样品浓度（g/ml）日内变异（n=5）日间变异（n=6）测定值（s，g/ml）RE（%）RSD（%）测定值（s，g/ml）RE（%）RSD（%）LPV66.6769.421.75104.122.52 68.792.19103.183.1822.2220.590.1692.660.78 20.750.4393.382.077.417.140.8896.3612.32 7.380.9999.613.412.472.430.1098.384.12 2.400.1297.175.00RTV16.6714.221.1085.307.74 14.831.7988.9612.075.565.650.15101.622.70 5.730.25103.064.361.851.700.3391.8919.41 1.850.4610024.860.620.680.11109.6816.18 0.740.18123.3324.32注：RE=测定值/理论值 100%；RSD=标准偏差/测定值 100%2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 192024医师在线杂志 第4期-拼.indd 192024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43202024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著均值为 95.27%。RTV 高、中、低、极低浓度质控样本的绝对回收率分别为 105.41%、111.66%、93.41%、100.00%，均值为 102.62%。高、中、低、极低浓度质控样品的方法学回收率在 85.08%111.66%。215 nm 条件下，LPV 高、中、低、极低浓度质控样本 的 绝 对 回 收 率 分 别 为 102.42%、106.59%、107.31%、103.61%，均值为 104.98%。RTV 高、中、低、极低浓度质控样本的绝对回收率分别为 97.81%、91.05%、111.41%、100.00%，均值为 100.07%。高、中、低、极低浓度质控样品的方法学回收率在 91.05%111.41%。3 讨论速度快、准确度高、灵敏度高为质谱检测的优点，故国内外相关研究报告测定人血浆 LPV/r 血药浓度的项目大多运用质谱法。鉴于质谱检测器贵重、我国资源分布不均等，因此普及面不够广。故本实验采取 HPLC 对 LPV/r 进行检测，在减少操作成本的同时又确保了速度。实验前期，我们对实验条件进行了一系列探索。通过查阅文献6，LPV、RTV 可溶解在甲醇，内标地西泮则溶解在乙腈中。通过多次尝试，发觉甲醇和乙腈试剂均在 2 3 min 出峰，对内标和被测药物没有其余杂峰干扰，故 LPV、RTV 最终溶解在色谱级甲醇试剂中，内标地西泮则溶解在色谱级乙腈中。至于流动相和柱温，根据项目资料要求为乙腈和 0.01 mol/L NaH2PO4缓冲溶液，体积比为 60 40，检测波长为210 nm，柱温为 40。在此条件下，单独 100 g/ml 内标保留时间为 5.935 min，单独 100 g/ml RTV 保留时间为 6.857 min，单独 100 g/ml LPV 保留时间为 7.460 min，药物之间的分离度较小，比较接近。由于内标在 10 g/ml 就有较好的峰形，LPV 则在 1 000 g/ml 中有明显的大峰，在色谱条件探索时，先设定内标、RTV、LPV 的浓度为 10、100、1 000 g/ml。在此实验条件下，将它们按上述浓度按实验比例混合，内标、RTV、LPV 的保留时间分别为：6.164、7.110、7.925 min，混合在一起后的出峰时间比单独出峰时间均往后移了一些，但是分离度仍是不够。将流动相之间的比例改为5050，其余条件不变，保留时间分别为 10.044、16.860、19.535 min，出峰位置虽然拉开了，但是保留时间往后延迟太多。将流动相之间的比例换成 55 45，其余条件不变，保留时间分别为 7.673、10.381、11.806 min，发现降低乙腈的比例，提高 NaH2PO4缓冲液的比例能拉开彼此之间的保留时间，但是，NaH2PO4缓冲液乙腈=50 50 时保留时间太过于靠后，因此提高缓冲液的比例不得超过乙腈的比例。将温度下调至 35，其余条件不变，保留时间分别为：6.301、7.115、8.014 min，发现降低柱温能拉开 RTV 和 LPV 之间的分离度。通过尝试，柱温 35，乙腈 NaH2PO4=56 44 这个条件下保留时间分别为 7.183、8.840、10.108 min，彼此之间保留时间均 1.2 min，分离度较合适、清晰，最终使用此流动相比例和柱温。对于血浆的处理，阅读大量文献找到适合本实验条件的四种处理血浆的方法，并根据实际实验条件，最终筛选出一种。人血浆样品 100 ml+200 ml 内标地西泮溶液（100 g/ml）涡旋振荡 1 min+11 000g 离心 10 min，经上述处理后吸取上清液 100 ml 并加入 200 ml 的纯化水，混匀待测。按照此方法，人血浆需求量极大，药品之间出峰的峰面积较小，不利于本实验顺利进行。经过思考，先尝试人血浆 1 ml+2 ml 内标地西泮溶液（10 g/ml）涡旋振荡 1 min+11 000g 离心 10 min，经上述处理后吸取上清液 1 ml 并加入 2 ml 的纯化水，涡旋混匀后进样，结果是内标峰面积大大超过药品峰面积。再经过进一步调整，在上述实验基础上，内标溶液加入体积改为 1 ml，最终内标峰面积仍然较高于药品峰面积，与上一次的尝试相比，有一点小进展。后进行血浆内标（2 g/ml）=1 1，涡旋时间不变，离心调为 12 000 r/min，离心后直接取上清液进样。此次尝试效果良好，血浆处理方法就此建立。表 3 215 nm 处精密度与准确度药品质控样品浓度（g/ml）日内变异（n=5）日间变异（n=6）测定值（s，g/ml）RE（%）RSD（%）测定值（s，g/ml）RE（%）RSD（%）LPV66.6764.421.5296.63 2.36 63.941.8095.91 2.8222.2223.781.16107.02 4.88 23.561.16106.03 4.927.416.610.3889.20 5.75 6.770.5291.367.682.472.580.24104.45 9.30 2.500.28101.21 11.20RTV16.6717.010.20102.03 1.18 16.950.22101.68 1.30 5.566.000.21107.91 3.50 6.090.30109.53 4.931.852.050.26110.8112.68 1.960.33105.95 16.840.620.590.1695.16 27.12 0.640.18103.23 28.13注：RE=测定值/理论值 100%；RSD=标准偏差/测定值 100%2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 202024医师在线杂志 第4期-拼.indd 202024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43212024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著双波长具有减少散色光的影响、减少样品本身光吸收的干扰、提高准确性的优点，因此本实验在波长选择上也进行了不同的尝试。在其他条件如上，检测波长设置为 210 nm 时，三个峰分离良好。当设置 205 nm 和 210 nm 进行色谱分析时，低浓度 LPV在 205 nm 处峰面积不明显，在 210 nm 处表达良好。后把检测波长设置为210 nm和215 nm时，保留时间、峰面积均表达良好。经过不断地实验摸索，最终确定建立本实验的检测方法学。4 结论本实验建立操作简便、经济便捷的 HPLC，为日后开展HPLC 检测 LPV 和 RTV 血药浓度提供了方法学基础。参考文献1我国艾滋病感染者达114万例DB/OL.生活晨报.2021-12-032022-05-01.https:/ JVD,Avihingsanon A.Clinical pharmacology and pharmacokinetics of antiretrovirals in AsiaJ.Asian Biomed,2010,3(1):53-62.3樊梦怡,徐志.克力芝的合成及抗病毒研究进展J.国外医药(抗生素分册),2020,41(5):339-346.4新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)J.中国病毒病杂志,2020,10(2):81-85.5新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)J.中国病毒病杂志,2020,10(5):321-328.6时美慧,李俭,甘慧,等.快速测定人血浆中洛匹那韦/利托那韦浓度的LC-MS/MS方法建立J.国际药学研究杂志,2016(1):162-166.裸眼 2D 显微镜与光学显微镜在后牙树脂直接充填术中应用比较郑梓婷，曾宇婷，闫文娟*（南方医科大学南方医院，广州 510550）【摘要】目的 探讨裸眼 2D 显微镜在后牙树脂直接充填术中的应用价值，为临床提供参考。方法 对纳入于口腔牙体牙髓病科行后牙树脂直接充填术的 65 例患者进行回顾性研究，患者分成两组，光学显微镜组 33 例，裸眼 2D 显微镜组 32 例。比较两组充填修复操作时长、充填体边缘密合性及医生评价得分，评估临床中使用裸眼 2D 显微镜的可行性。结果 光学显微镜组平均处理每颗牙齿所需的时间为（23.064.12）min；裸眼 2D 显微镜组为（26.973.64）min，差异具有统计学意义（P 0.05）。术后即刻检查两组充填体的边缘密合情况，边缘密合性的成功率均达到 100%。裸眼 2D 显微镜在术者姿势、视觉疲劳、操作难易方面的得分高于光学显微镜组，差异有统计学意义（P 0.05）。结论 裸眼 2D 显微镜可用于后牙树脂直接充填修复治疗，在临床效果方面可与传统光学显微镜相媲美，且在人体工程学和操作空间位置等方面具有一定的独特优势，提示其具有广泛临床使用的潜力。【关键词】裸眼 2D 显微镜；光学显微镜；树脂充填修复；人体工程学Comparison of the application of naked-eye 2D microscope and optical microscope in resin direct filling of posterior teethZHENG Zi-ting,ZENG Yu-ting,YAN Wen-juan.Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510550,China.【Abstract】Objective To explore the application value of the naked-eye 2D microscope in posterior tooth resin direct filling procedures,and to provide a reference for clinical practice.Methods A retrospective study was conducted on 65 patients who had undergone posterior tooth resin direct filling in the Department of Conservative Dentistry and Endodontics.These patients were divided into two groups:an optical microscope,which comprised 33 patients;and a naked-eye 2D microscope group,which include 32 patients.The study compared the duration of filling restoration,the marginal adaptation of the filling,and the doctors evaluation scores between the two groups to assess the feasibility of using the naked-eye 2D microscope in clinical settings.Results The average time required for each tooth treatment was(23.064.12)minutes in the optical microscope group and(26.973.64)minutes in the naked-eye 2D microscope group,with statistically significant difference(P0.05).Immediate postoperative examination of both groups showed a 100%success rate in marginal adaptation of the fillings.The naked-eye 2D microscope group scored higher than the optical microscope group in terms of the operators posture,visual fatigue,and ease of operation,with statistically significant differences(P0.05).Conclusion The naked-eye 2D microscope is viable for posterior tooth resin direct filling restorations and can match the clinical effects of traditional optical microscopes.Moreover,it has unique advantages in ergonomics and operational space positioning,suggesting its potential for widespread clinical use.【Key words】Naked-eye 2D microscope;Optical microscope;Resin filling restoration;Ergonomics2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 212024医师在线杂志 第4期-拼.indd 212024/4/18 10:12:442024/4/18 10:12:44