姜黄素对慢性酒精成瘾致肝损伤的干预作用.pdf

姜黄素对慢性酒精成瘾致肝损伤的干预作用吴一鸣，林雪，苏雅静，薛?，张晨（宁夏大学教育学院，银川 ；宁夏医科大学总医院医学研究院，银川 ；宁夏医科大学总医院临床病原微生物学宁夏重点实验室，银川 ；宁夏大学生命科学学院，银川 ）【摘要】目的：探讨姜黄素（）对慢性酒精成瘾性引起的小鼠肝损伤的干预作用。方法：将 只 小鼠随机分为正常对照组（）、模型组（）、低剂量 组（，）、中剂量 组（，）和高剂量 组（，），每组 只。采用 的白酒制备慢性酒精成瘾性肝损伤模型，组每天灌胃 生理盐水；组每天灌胃 白酒 ，治疗组每天用对应浓度的 灌胃，每次 ，连续 。测量小鼠肝脏重量，观察小鼠健康状况。检测小鼠血清谷丙转氨酶（）、谷草转氨酶（）、碱性磷酸酶（）和肝脏中甘油三酯（）、总胆固醇（）、高密度脂蛋白胆固醇（）、低密度脂蛋白胆固醇（）、丙二醛（）、总超氧化物歧化酶（）、谷胱甘肽过氧化物酶（）、一氧化氮（）浓度。观察苏木精和伊红染色的肝组织病理形态学变化。结果：与对照组相比，模型组小鼠肝脏质量及血清中 、水平显著升高（，），和 活力显著降低（，），肝细胞有空泡和炎性细胞浸润，肝组织 和 蛋白表达水平显著上调（）。与模型组相比，组的 、的水平显著降低并 和 活力显著升高（，）。结论：可能通过调控 信号通路有效地减少肝脏组织损伤。【关键词】姜黄素；慢性酒精成瘾；酒精性肝损伤；氧化应激；小鼠【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】（）【】，（，；，；，）【】：（）：（），（），（，），（，）（，），：，（，），（，），（），（，）：【】；，（）【基金项目】宁夏回族自治区重点研发项目（）；宁夏回族自治区重点研发项目（）；宁夏自然科学基金（）；宁夏自然科学基金（）【收稿日期】【修回日期】【通讯作者】：；：，长期大量饮酒会导致脂肪变性或脂肪肝、肝炎、纤维化和肝硬化等形式的酒精性肝病（，），最终发展为酒精性肝硬化和肝癌 ，是全球慢性肝病的主要原因。近年来，随着生活水平的提高，的发病率逐年上升，已成为继病毒性肝炎之后引起肝损伤的第二大原因 。的发病机制尚不完全清楚，目前认为其发病机制主要与氧化应激和脂质过氧化有关。至今有关有效治疗 的方法鲜有报道。虽然传统药物治疗取得了良好的效果，但由于存在单一草药成分的复杂性、组合药物的多样性、药物配方的不确定性、口服给药的随机性，以及作用机制未知等问题，因此迫切需要研制作用机制明确、副作用发生率低的有效药物。姜黄素是一种从姜黄根茎中提取的植物化学多酚，具有多种生物活性和广泛的药理作用，如抗肿瘤、抗炎、抗氧化应激、抗微生物、调节免疫等，在各个治疗领域中均得到深入研究 ，。几个世纪以来一直被用于亚洲传统医学，并且被认为是一种潜在的治疗剂。姜黄和姜黄素在体外和体内的抗炎活性方面得到最好的认可和共识，但也有报道表明其具有抗高血糖活性 。近年来，越来越多的基础和临床研究表明，姜黄素具有保护肝脏的各种屏蔽功能，并对多种疾病具有治疗作用，如胃肠道疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、神经精神疾病等 。姜黄素的许多药理作用和机制与肠黏膜屏障的保护作用有关，它可以通过多种途径保护肠黏膜屏障，包括抗炎、抗氧化应激、抗菌、抗凋亡、调节肠道微生态和肠道免疫反应等 ，。但姜黄素对慢性酒精成瘾性引起的小鼠肝损伤是否具有干预作用鲜有报道。因此，本研究中，的白酒灌胃诱导的小鼠慢性酒精成瘾后建立肝损伤模型，研究姜黄素对慢性酒精成瘾性引起的小鼠肝损伤的干预作用及其机制，为进一步作为保健食品提供实验依据。材料与方法 主要材料与试剂 白酒：汾酒购自山西杏花村汾酒厂股份有限公司。采用纯净水按比例稀释成浓度为 。姜黄素：中国 公司（）。谷丙转氨酶（，）、谷草转氨酶（，）、碱性磷酸酶（，）、甘油三酯（，）、总胆固醇（，）、低密度脂蛋白胆固醇（，）、高密度脂蛋白胆固醇（，）试剂盒由深圳雷杜生命科学股份提供。丙二醛（，）、超 氧 化 物 歧 化 酶（，）、一氧化氮（，）和谷胱甘肽过氧化物酶（，）试剂盒由南京建成科技有限公司提供。苏木精 伊红（，）染液：北京索莱宝科技有限公司。实验动物 只 级雄性 小鼠，体重（），由北京维通利华实验动物有限公司提供。将小鼠饲养在恒温（）和相对湿度（）的无病原体设施中，光照 黑暗周期为 ，并允许随意进食和饮水。所有动物实验和实验方案均经宁夏大学伦理委员会批准（中国银川；批准号 ）。模型复制与分组设计小鼠适应一周后将小鼠随机分为 个处理组（）：正常对照组（）、模型组（）、低剂量 组（，）、中剂量 组（，）和高剂量 组（，）。正常对照组：灌胃等量生理盐水；模型对照组与 各剂量组每天灌胃 白酒 。正常组和 各剂量组每天用对应浓度的 灌胃，每次 ，连续 。实验动物取材实验连续进行 后，用乙醚麻醉小鼠后眼球取血，每只小鼠取 的血液。将血液静置 ，离心机预冷后，以 离心 分离血清并储存在 冰箱用于后续血清生化等指标的检测。解剖小鼠后仔细取出肝脏，冲洗三次后吸水纸吸净水分后称重。一部分肝脏组织用 多聚甲醛固定，用于组织病理学检查，剩余部分保存于 冰箱用于肝脏相关指标检测。肝脏重量测定不同处理组小鼠解剖后仔细取出肝脏组织，冲洗 次后吸水纸吸净水分后称重。血清相关指标检测使用商业试剂盒，按照试剂盒说明书进行检测不同处理组小鼠血清中 、和 的水平。中国应用生理学杂志，（）肝脏相关指标检测每个处理组取 肝脏组织于冷冻研磨机中研磨，离心（，），取上清液待测。按照试剂盒说明书进行检测不同处理组小鼠肝脏中的 、和 的水平。血清 蛋白表达的检测使用酶联免疫吸附测定试剂盒（）对 的表达水平进行量化。肝脏组织病理学分析不同处理的肝脏组织经 多聚甲醛固定后，洗涤 次，酒精梯度洗脱。石蜡包埋后切片（）。切片放入烘箱烤片，二甲苯脱蜡，酒精梯度洗脱，苏木精 伊红染色，再次酒精梯度洗脱，中性树胶封片。使用激光共聚焦观察组织病理学变化。统计学处理实验数据以平均值 标准差（珋 ）表示，实验数据使用 软件（，）分析。不同实验组组间差异采用单因素方差分析（），进一步两两比较采用 检验。结果 姜黄素对慢性酒精成瘾引起肝损伤小鼠肝脏质量和血清转氨酶水平的影响如表 所示，组小鼠的肝脏质量显著高于正常对照组（）；与 组相比，低剂量 组、中剂量 组和高剂量 组肝脏质量显著降低（，）。与 组相比，组小鼠血清中 、和 的水平均显著升高（，），说明成功建立小鼠慢性酒精成瘾性肝损伤模型。与 组相比，组小鼠血清中 、水平均显着降低。这表明 对小鼠慢性酒精性肝损伤相关转氨酶具有一定的改善作用。（珋 ，）（）（）（）（）：；：；：；：；：，；，；姜黄素对慢性酒精成瘾引起肝损伤小鼠血脂代谢的影响如表 所示，组小鼠血清 、水平较 组均显著升高（，）。与 组相比，低剂量 组、中剂量 组和高剂量 组 、的水平均显著降低（，）。这表明，可以有效缓解慢性酒精成瘾引起的肝脏脂肪沉积。（，珋 ，）：；：；：；：；：，；，；姜黄素对慢性酒精成瘾引起的肝损伤小鼠丙二醛和抗氧化酶水平的影响如表 所示，组 和 活性均显著低于 组，和 水平显著高于 组（，）。与 组相比，低剂量 组、中剂量 组和高剂量 组 和 活 ，（）性均显著升高，和 水平均显著降低（，），这表明 可有效防止因酒精成瘾引起的小鼠肝细胞过度氧化，并能增强机体的抗氧化能力。，（珋 ，）（）（）（）（）：；：；：；：；：，；，；姜黄素对慢性酒精成瘾引起的 表达的影响如表 所示，与 组相比，组 表达量均显著上调（）。与 组比较，低剂量 组、中剂量 组和高剂量 组 蛋白表达量均显著下调（，）。这表明姜黄素可能通过 信号通路改善慢性酒精成瘾引起的肝损伤。（，珋 ，）：；：；：；：；：，；，；姜黄素对慢性酒精成瘾引起的肝组织形态的影响如图 所示，组肝细胞收缩结构清晰，肝细胞排列整齐，形态正常，未见细胞坏死和炎症细胞浸润。组肝细胞有空泡和明显的炎性细胞浸润。与 组相比，组有明显的修复迹象，肝细胞空泡数量变少，细胞结构更清晰，低、中、高剂量与逐渐修复的趋势相关。这表明 对慢性酒精成瘾引起的肝损伤具有干预作用。（）讨论酒精成瘾会损害肝细胞且肝脏是酒精代谢的主要器官，进而可导致酒精性肝病（）。是一个全球性的公共卫生问题；由于酒精滥用率增加，长期饮酒会导致不同程度的肝损伤，其患病率和发病率每年都在增加，严重损害人体健康 。姜黄素，是姜黄根中含有的主要多酚。姜黄素作为一种亲脂性多酚，近年来广泛用于抗癌、抗生素和抗炎的体内体外研究和临床试验 。尽管姜黄素在人类的各种慢性疾病中发挥有益的作用，但目前关于姜黄素对慢性酒精成瘾引起肝损伤干预作用的报道颇少且缺乏系统性。、和 是存在于肝细胞质中的可溶性酶 。肝细胞损伤后，细胞膜的通透性增加，导致 、和 进入血流 。因此，血清 、和 活性可以反映肝细胞损伤的程度。此外，在酒精的代谢过程中，会释放出大量的脂肪酶，促进 、的合成，进而通过 、从肝脏转移到外周部位，导致脂肪在肝细胞中沉积 。如果肝组织中出现脂肪病变，会造成血脂水平异常。是自由基作用于脂质过氧化的重要产物之一，体内脂质过氧化的程度可以通过 含量来反映 。代谢及氧化抗氧化系统功能状态与肝损伤密切相关，代谢紊乱会导致体内自由基浓度中国应用生理学杂志，（）异常升高 ，机体为捕捉和清除这些过量浓度的自由基以恢复抗氧化水平的动态平衡，就必然消耗大量的 和 ，从而导致 和 等抗氧化酶含量显著降低 。本实验结果显示，组血清中 、水平在明显升高、肝脏质量增加，提示小鼠肝脏出现一定程度的损伤，本实验肝损伤模型建立成功。姜黄素干预后小鼠血清中 、水平均降低、肝脏质量降低，这些结果表明姜黄素对小鼠慢性酒精性肝损伤具有一定的干预作用。组血清中 和 水平均升高，和 抗氧化酶活性降低，提示小鼠肝脏抗氧化系统受损。姜黄素干预后均可显著降低 、水平，提高小鼠肝组织 和 的活性，表明姜黄素对慢性酒精成瘾诱导肝损伤的干预作用可能与其抗氧化活性有关。此外，大量酒精分解也会刺激肝细胞的免疫功能，激活免疫细胞 。活化的免疫细胞迅速激活转录调节因子，如 。作为炎症信号转导通路中最重要的转录调节因子，在该通路炎症介质的转录合成中起关键调控作用 。本实验结果显示，组血清中 的水平显著升高，姜黄素干预后 的水平显著下降，表明姜黄素可能通过 信号通路减少慢性酒精成瘾引起的肝损伤，其作用机制可能与改善肝脏氧化应激和抑制炎症反应有关。综上所述，姜黄素对慢性酒精成瘾造成的肝损伤有明显的干预作用，为临床治疗酒精性肝损伤提供理论依据，但是其确切机制尚有待进一步研究。【参考文献】吴菲，倪照军，高雪娇，等酒精依赖成瘾的机制及治疗研究进展 中国医刊，（）：汪冠豪，郭亮，郑璐璐，等通过酒精饲养小鼠建立小鼠酒精模型 微生物学杂志，（）：陈洁，刘斌，袁桥玉，等姜黄素对酒精性肝损伤大鼠 的影响及机制探讨 天津医药，（）：夏娟，张书春，代紫阳，等姜黄素通过抑制 信号通路减轻高糖致 心肌细胞损伤的实验研究 天津中医药大学学报，（）：潘妍，贾红亮，齐彬，等生姜中姜黄素提取及抗氧化活性 特种经济动植物，（）：张桃，谢雅，陈颖，等筒鞘蛇菰提取物蛇菰多糖对 半乳糖诱导大鼠肝损伤的保护作用及其机制 中国应用生理学杂志，（）：王晓霞，占海兵，高青，等姜黄素联合黄芩苷对乙醇诱导的大鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用研究 毒理学杂志，（）：叶丽云，程冰，马水丽，等赤芝多糖对小鼠急性酒精性肝损伤的保护效果和作用机制 食品科学，（）：郑修齐，吕小会，张鑫，等姜黄素通过抑制内质网应激对酒精诱导的小鼠肝损伤的保护作用 贵州医药，（）：，：，（）：，（）：，（）：戴晨曦，阿尔斯拉玉苏甫，孙慧，等熊胆粉通过调节 信号通路产生对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用 世界科学技术 中医药现代化，（）：，（）：王丹，高峰，陈慧，等人参归脾丸对脾不统血证大鼠肝损伤的保护作用及其机制 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