江苏沿海地区养殖脊尾白虾“僵尸病”的防控药物筛选研究.pdf

第 4 期文章编号押 2096原4730穴圆园23雪园4原0319原05江苏沿海地区养殖脊尾白虾“僵尸病”的防控药物筛选研究赵然1,2，朱健强1,2，仇俊3，冯卫2，史文军2，王李宝2，黎慧2，吴旭干1，万夕和2(1.上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心，上海200120；2.江苏省海洋水产研究所，江苏南通226007；3.江苏省沿海农业发展有限公司金东台分公司，江苏盐城224200)摘要：对近年来江苏沿海地区脊尾白虾养殖中常爆发的“僵尸病”进行了初步的防控药物筛选，试验采用纸片扩散法(K-B 法)测定了二尖梅奇酵母 MQ2101 对 18 种抗菌类药物的敏感性，并采用微量稀释法测定了 8 种优选药物及 7 种常见消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示，在优选的 8 种抗菌药物中克霉唑、益康唑、制霉菌素、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、酮康唑对二尖梅奇酵母 MQ2101 具有较好的抑制效果，MIC 均为 0.125 滋g mL-1；伊曲康唑对二尖梅奇酵母的杀灭效果最好，MBC 为 0.25 滋g mL-1；在常见消杀制剂中高锰酸钾、甲醛对二尖梅奇酵母 MQ2101 的抑制效果最好，MIC 为 50 滋g mL-1，亚甲基蓝、甲醛对二尖梅奇酵母 MQ2101 的杀灭效果最好，MBC 均为 200 滋g mL-1。最后，本研究结合养殖过程中的实际情况提出了脊尾白虾“僵尸病”的防控建议。关键词：脊尾白虾；“僵尸病”；二尖梅奇酵母；防控中图分类号：S945.1+3；S945.4+9文献标识码：AStudy on Drug Screening for the Control of Zombie Disease inExopalaemon carinicauda Cultured in Coastal Areas of JiangsuProvinceZHAO Ran1,2,ZHU Jianqiang1,2,QIU Jun3,et al(1.National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education,Shanghai Ocean University,Shanghai201306;2.Institute of Oceanology and Marine Fisheries,Nantong226007;3.Jiangsu CoastalAgricultural Development Company Limited Jindongtai Branch,Yancheng224200,China)Abstract:The zombie disease has been a recurring issue in the Exopalaemon carinicauda culture alongthe coastal areas of Jiangsu Province in recent years.This study aimed to conduct a preliminary screening of收稿日期：2022-12-16基金项目：江苏省农业重大新品种创制项目(PZCZ201747)；江苏省沿海开发集团有限公司 2022 年科研项目(2022YHNF2201)；2022 年江苏省水产良种保存与更新项目(2022-SJ-028)作者简介：赵然(1998-)，男，江苏苏州人，硕士研究生，研究方向：海水虾类病害防控研究.通信作者：万夕和.E-mail:浙江海洋大学学报穴自然科学版雪允燥怎则灶葬造 燥枣 在澡藻躁蚤葬灶早 韵糟藻葬灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠穴晕葬贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻雪第 42 卷 第 4 期圆园23 年 7 月Vo1.42No.4Jul.,2023浙江海洋大学学报穴自然科学版雪第 41 卷drugs for the prevention and control of this disease.Using the microdilution method,the minimum inhibitoryconcentration(MIC)and minimum bactericidal concentration(MBC)of eight preferred drugs and seven commondisinfectants were determined against Metschnikowia bicuspidata MQ2101.The results indicated that amongthe preferred antibacterial drugs,clotrimazole,econazole,mycophenolate,5-fluorocytosine,itraconazole,andketoconazole had a better inhibitory effect on MQ2101,with an MIC of 0.125 滋g mL-1.Moreover,itraconazoleshowed the best killing effect on M.bicuspidata MQ2101 with an MBC of 0.25 滋g mL-1.Regarding the commondisinfection agents,potassium permanganate and formaldehyde had the best inhibitory effect on M.bicuspidataMQ2101,with an MIC of 50 滋g mL-1,while methylene blue and formaldehyde had the best killing effect on M.bicuspidata MQ2101,with both an MBC of 200 滋g mL-1.Based on the above findings and the actual farmingsituation of E.carinicauda,this paper presents prevention and control suggestions for zombie disease in E.carinicauda.Key words:Exopalaemon carinicauda;zombie disease;Metschnikowia bicuspidata;control脊尾白虾 Exopalaemon carinicauda 又名小白虾，隶属于甲壳亚门 Crustacea 十足目 Decapoda 长臂虾科Palaemonidae 白虾属 Exopalaemon1。因其生长速度快、繁殖能力强、适应性广、易于养殖等优点，在江苏沿海地区得到了广泛的推广，成为江苏省沿海主要养殖的海水经济虾类之一2。近年来，随着养殖规模的逐渐扩大和养殖密度的逐步提高，脊尾白虾养殖生产中各类病害频繁发生，造成了严重的经济损失，因此有关对其疾病防控办法的研究已引起了水产从业者的高度重视3-5。脊尾白虾“僵尸病”是近年来新发现的一种疾病，主要流行时间从 11 月开始一直到次年 5 月，其中高峰期为 25 月，其间养殖池塘水体温度为 15耀22 益。该病发病率在 5%耀30%，死亡率在 3%耀10%，患病白虾体色泛红，肌肉浑浊，头胸甲下蓄积大量乳白色液体，离水后较快死亡。对该病进行病原分离鉴定发现二尖梅奇酵母 MQ2101 Metschnikowia bicuspidata为该病致病源6。二尖梅奇酵母作为水产致病酵母可感染罗氏沼虾 Macrobrachium rosenbergii7，三疣梭子蟹 Portunus trituberculatus8和中华绒螯蟹 Eriocheir sinensis9-10等多种水生经济动物，因此对二尖梅奇酵母的防控药物筛选已成为当下防控由其引起的相关疾病的关键。申洪斌11发现 5-氟胞嘧啶、两性霉素-B 对蟹源二尖梅奇酵母抑制效果良好。ZHANG Hongqian,et al12研究表明马索亚内酯对不同二尖梅奇酵母菌株均有较好的杀灭效果，其中最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为 0.15 和 0.34 mg mL-1。本研究采用纸片扩散法(K-B 法)测定了二尖梅奇酵母 MQ2101 对 18 种抗菌类药物的敏感性，并用微量稀释法测定了 8 种优选药物及 7 种常见消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MIC 和 MBC，研究结果可为江苏省沿海地区养殖脊尾白虾“僵尸病”和水产养殖中二尖梅奇酵母引起的水生动物疾病的防控提供一定参考。1 材料与方法1.1 菌株来源二尖梅奇酵母 MQ2101 分离自南通市启东市黄海滩涂开发有限公司养殖区患“僵尸病”脊尾白虾血淋巴，保存于江苏省海洋水产研究所海洋生物技术研究室菌种库中。1.2 试验药品10 种抗菌药物药敏试纸购自湖南比克曼生物科技有限公司，克霉唑、益康唑、氟康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素-B、5-氟胞嘧啶和伊曲康唑购自上海麦克林生化科技股份有限公司；硫酸铜、二氧化氯、高锰酸钾、聚维酮碘、亚甲基蓝、氢氧化钠和甲醛购自如东县环渔村水产养殖动保市场。1.3 病原菌药物敏感性测定二尖梅奇酵母 MQ2101 对 18 种抗菌类药物的敏感性测定采用 K-B 法，其中克霉唑、益康唑、氟康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素-B、5-氟胞嘧啶和伊曲康唑的药敏纸片根据药敏纸片判定标准自制。首先将320第 4 期这 8 种试验药物均配置成 1 000 滋g mL-1母液，并用打孔器制作 6 mm 圆形滤纸，按照 20 张 1 份，将制作好的滤纸分装到西林瓶中，牛皮纸封口，于 121 益、15 min 烘干，随后取 20 张滤纸片测定其饱和吸水量，按剂量要求计算所需母液体积，加入西林瓶中以完全润湿 20 张滤纸片，不足以完全润湿 20 片的要加无菌水稀释后混匀加入，用牛皮纸密封瓶口，37 益烘干待用。将菌株 MQ2101 接种于马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)，在 28 益，150 r min-1的摇床中培养 24 h 后，取 100 滋L 菌液均匀涂布于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上。待自然干燥后，用经灭菌的镊子取药敏纸片依次平贴于培养基表面，每个平板贴 6 张药敏纸片，重复 3 次。置 28 益培养箱中倒置培养 36 h 后测量抑菌圈直径，并根据药敏纸片使用说明书判定敏感性。根据判定标准，敏感抗菌药物用于后续 MIC 和 MBC 的测定。1.4 病原菌对 8 种优选抗菌药物及 7 种消杀制剂的 MIC 和 MBC 测定1.4.1 抗菌药物及消杀制剂的配制抗菌药物克霉唑、益康唑、制霉菌素用 DMSO 溶解，配成 6.4 mg mL-1母液；伊曲康唑、两性霉素-B、酮康唑用 DMSO 溶解，配成 1.6 mg mL-1母液待用；5-氟胞嘧啶、氟康唑用无菌水溶解，配成 1.28 mg mL-1母液待用。消杀制剂均用无菌水溶解，配成 6.4 mg mL-1母液待用。1.4.2 药敏板制备及接种取无菌 96 孔板 1耀10 孔中连续倍比稀释，第 11 孔作为不含药物的生长对照孔，第 12 孔作为不含药物且不加菌液的空白对照组。菌株接种于 PDA 培养基，恒温培养箱中 28 益活化 36 h。用无菌棉签蘸取菌落溶于生理盐水中，于振荡器上振荡 15 s 制备成菌悬液。用血细胞计数板将菌悬液浓度用 PDB 培养液调整至 1伊106CFU mL-1，最后再用 PDB 将菌液稀释 1 000 倍，制备成 2 倍终浓度的菌悬液，除第 12 孔外各孔均加入 100滋L 菌悬液(克霉唑、益康唑、制霉菌素、5-氟胞嘧啶、氟康唑终浓度为 0.125耀64 滋g mL-1、伊曲康唑、两性霉素-B、酮康唑终浓度为 0.125耀16 滋g mL-1、消杀制剂终浓度均为 6.25耀3 200 滋g mL-1)。将 96孔培养板 28 益、120 r min-1恒温孵育 24 h。1.4.3 MIC 与 MBC 判定方法取出 96 孔试验板，用酶标仪检测 605 nm 处吸光度值，与生长对照孔相比吸光度值下降 80%为该化合物的最低抑菌浓度(MIC)。每种药同时做 3 个生物学重复。根据 MIC 测定结果，从各个药物未见明显生长的孔中吸取 50 滋L 液体，无菌条件下均匀涂布于 PDA培养基上，28 益倒置培养 48 h，观察是否有菌落生长，无菌落生长的最低药物浓度即为该药物的最小杀菌浓度(MBC)。每孔试验重复 3 次。2 试验结果与分析2.1 二尖梅奇酵母 MQ2101 对 18 种抗菌类药物的敏感性通过纸片扩散法测定了脊尾白虾“僵尸病”病原二尖梅奇酵母 MQ2101 对供试 18 种抗菌类药物敏感性如表 1 所示。结果显示二尖梅奇酵母 MQ2101 对克霉唑、益康唑、氟康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素-B、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑 8 种药物敏感，该 8 种药物用于后续试验；对红霉素、氯霉素、氟苯尼考、青霉素、羧苄西林、头孢拉定、头孢他啶、多西环素、新霉素、恩诺沙星耐药。2.2 8 种优选抗菌药物与 7 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MIC8 种优选抗菌药物与 7 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MIC 如图 1、2 所示。结果显示，在试验浓度范围内 8 种抗菌药物对二尖梅奇酵母 MQ2101 均有抑制效果。其中克霉唑、益康唑、两性霉素-B、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、酮康唑对 MQ2101 的抑制效果最好，MIC 均为 0.125 滋g mL-1；氟康唑抑制效果次之，MIC 为 0.5 滋g mL-1；制霉菌素抑制效果最差，MIC 为 1 滋g mL-1。在试验浓度范围内 7 种生产中常见消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 均有抑制效果。其中高锰酸钾、甲醛对 MQ2101 的抑制效果最好，MIC 为 50滋g mL-1；亚甲基蓝次之，MIC 为 100 滋g mL-1，硫酸铜、氢氧化钠、二氧化氯、聚维酮碘抑菌效果较差，MIC分别为 200、200、400 和 1 600 滋g mL-1。赵然等：江苏沿海地区养殖脊尾白虾“僵尸病”的防控药物筛选研究321浙江海洋大学学报穴自然科学版雪第 41 卷2.3 8 种优选抗菌药物与 7 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MBC8 种优选抗菌药物与 7 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MBC 如图 3、4 所示。结果显示，在试验浓度范围内 8 种抗菌药物对二尖梅奇酵母 MQ2101 均有杀灭效果。其中伊曲康唑对 MQ2101 的杀灭效果最好，MBC 为 0.25 滋g mL-1；酮康唑、益康唑、两性霉素-B、克霉唑杀灭效果次之，MBC 分别为 0.5、1、1和 1 滋g mL-1；制霉菌素、氟康唑、5-氟胞嘧啶杀灭效果较差，MBC 分别为 4、8 和 16 滋g mL-1。在试验浓度范围内 7 种常见消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 均有杀灭效果。其中亚甲基蓝、甲醛对 MQ2101 的抑制效果最好，MBC 为 200 滋g mL-1；硫酸铜次之，MBC 为 400 滋g mL-1，二氧化氯、氢氧化钠、高锰酸钾、聚维酮碘抑菌效果较差，MIC 分别为 800、1 600、1 600 和 3 200 滋g mL-1。表 1二尖梅奇酵母 MQ2101 对 18 种抗菌药物的敏感性Tab.1Susceptibility of M.bicuspidata MQ2101 to 18 antibacterial drugs药物名称药物含量/滋g抑菌圈直径/mm表型抑菌圈直径判断标准SIR克霉唑益康唑氟康唑酮康唑制霉菌素两性霉素-B5-氟胞嘧啶伊曲康唑红霉素氯霉素氟苯尼考青霉素羧苄西林头孢拉定头孢他啶多西环素新霉素恩诺沙星1010151550101081530301010030303030104337444731244421原原11原原原原原原原SSSSSSSSRRRRRRRRRR逸20逸20逸20逸20逸15逸20逸20逸15逸23逸18逸18逸29逸23逸18逸18逸16逸17逸2812耀1912耀1912耀1912耀1910耀1412耀1912耀1910耀1422耀1417耀1317耀1328耀2920耀2215耀1715耀1713耀1513耀1622耀27臆11臆11臆11臆11无抑菌圈臆11臆11无抑菌圈臆13臆12臆12臆28臆19臆14臆14臆12臆12臆21图 18 种抗菌药物对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MICFig.1MIC of 8 antimicrobial drugs on M.bicuspidata MQ2101图 27 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MICFig.2MIC of 7 disinfectants commonly used in farmingon M.bicuspidata MQ2101硫酸铜二氧化氯高锰酸钾聚维酮碘氢氧化钠亚甲基蓝甲醛7 种消杀制剂1 7001 6501 6001 5501 50050040030020010008 种抗菌药物氟康唑5-氟胞嘧啶益康唑伊曲康唑两性霉素-B制霉菌素酮康唑克霉唑1.21.00.50.0322第 4 期硫酸铜二氧化氯高锰酸钾聚维酮碘氢氧化钠亚甲基蓝甲醛7 种消杀制剂3 4003 2003 0002 0001 5001 00050008 种抗菌药物氟康唑5-氟胞嘧啶益康唑伊曲康唑两性霉素-B制霉菌素酮康唑克霉唑20151051.51.00.50.03 讨论本研究利用 K-B 法开展了脊尾白虾“僵尸病”病原二尖梅奇酵母 MQ2101 对常见抗菌药物的敏感性试验，结果表明红霉素，氯霉素和恩诺沙星等常见 10 种抗生素类药物对脊尾白虾“僵尸病”病原没有防控效果，这与预期结果一致，因为该病原属于真菌类，因此在养殖生产过程中使用抗生素类药物对脊尾白虾“僵尸病”进行防控是没有意义的，相反会存在导致其他病原菌耐药性的风险。微量稀释法测定结果表明在优选的抗菌药物中克霉唑、益康唑、制霉菌素、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、酮康唑对二尖梅奇酵母有较好的抑制效果，MIC 均为 0.125 滋g mL-1；伊曲康唑对二尖梅奇酵母的杀灭效果最好，MBC 为 0.25 滋g mL-1。克霉唑、酮康唑、益康唑均为咪唑类抗真菌药物，具有广谱抗真菌作用，抗菌活性高，能够抑制多种微粒体 P450 同工酶13，干扰细胞膜麦角固醇的生物合成，来抑制酵母细胞的生长14。伊曲康唑属于三唑类抗真菌药物，抑菌机制与咪唑类药物类似，但其相较于咪唑类而言，其抗菌谱更广，药物安全性也大大增加15。制霉菌素为多烯类抗真菌药物，其可与酵母细胞膜中的甾醇物质发生相互作用，形成一种复合物贯穿整个细胞膜的通道，导致细胞内含物大量流失，进而导致细胞死亡16。5-氟胞嘧啶为核苷类似物，能通过酵母细胞的渗透酶系统进入细胞内，转化为氟尿嘧啶后替代尿嘧啶进入酵母的 DNA中，引起酵母 RNA 遗传密码错误，其通过阻断酵母的合成来发挥抗菌作用17。这些常见抗真菌药物对二尖梅奇酵母 MQ2101 都有较好的体外抑制作用，但在养殖生产过程中用药还应考虑药物在脊尾白虾体内的吸收、分布、代谢及药物残留等情况，另外此类药物价格昂贵，因此可在应急治疗中使用，不宜用于生产中的常规防治。在常见消杀制剂中，高锰酸钾、甲醛对二尖梅奇酵母 MQ2101 的抑制效果最好，MIC 为 50 滋g mL-1，亚甲基蓝、甲醛对二尖梅奇酵母 MQ2101 的杀灭效果最好，MBC 均为 200 滋g mL-1。高锰酸钾、甲醛和亚甲基蓝等 7 种常规渔药为水产养殖业常用的消毒剂或杀菌剂，主要用于养殖水体或养殖对象的消毒等。在试验所选浓度范围内，这些消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 都有抑制杀灭效果，但作用浓度均超过了脊尾白虾的使用安全浓度18，因此不宜在养殖生产阶段进行全池泼洒。脊尾白虾“僵尸病”发病机制复杂，当病虾出现典型症状时，已经进入感染后期，难以治疗。本研究结果表明伊曲康唑、亚甲基蓝和甲醛对二尖梅奇酵母 MQ2101 均有较好的杀灭效果，但浓度超过了脊尾白虾的使用安全浓度，可在养殖周期结束后，根据试验测定的 MBC 结果，选择相应化学药物进行清塘消杀，确保下一周期养殖环境的安全。养殖过程中要加强预防意识，贯彻防大于治的原则，选择优质苗种，加强投喂管理，密切关注环境温度，定期进行养殖环境生态调控，如发生病害可根据病原检测结果指导用药，此外还可以投放一些肉食性鱼类捕食感染的病虾，切断传播链，实现脊尾白虾的绿色健康养殖。参考文献：1 马鸿梅,王兴强,曹梅,等.脊尾白虾养殖研究进展J.现代农业科技,2019(16):171-172.2 沈晔,王兴强,曹梅,等.脊尾白虾养殖技术研究J.安徽农学通报,2019,25(15):76-80.图 38 种抗菌药物对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MBCFig.3MBC of 8 antimicrobial drugs on M.bicuspidata MQ2101图 47 种消杀制剂对二尖梅奇酵母 MQ2101 的 MBCFig.4MBC of 7 disinfectants commonly used in farmingon M.bicuspidata MQ2101(下转第 337 页)赵然等：江苏沿海地区养殖脊尾白虾“僵尸病”的防控药物筛选研究323第 4 期3 张年国,潘桂平,周文玉.脊尾白虾在套养池塘中的病害及其防控对策J.科学养鱼,2015(7):59-60.4 张文文,王庚申,施慧,等.一种引起脊尾白虾红体病病原菌的初步研究 J.浙江海洋学院学报(自然科学版),2014,33(1):65-71.5 冯艳艳.氟苯尼考在脊尾白虾体内药代动力学及药效学研究D.上海:上海海洋大学,2017.6 赵然,史文军,王李宝,等.脊尾白虾“僵尸病”的初探J/OL.水产学报,2022:1-11.(2022-03-16)2022-12-01.7 孙玉华,孙其焕.罗氏沼虾亲虾暴发性疾病病原的研究及防治J.水产学报,1998,22(1):56-60.8 王国良,金珊,陈寅儿,等.三疣梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病性研究J.海洋科学进展,2006,24(4):526-531.9 马红丽,孙娜,陆晓岑,等.辽宁地区中华绒螯蟹“牛奶病”的病原分离与鉴定J.大连海洋大学学报,2020,35(5):714-718.10 BAO Jie,JIANG Hongbo,SHEN Hongbin,et al.First description of milky disease in the Chinese mitten crab Eriocheir sinen原sis caused by the yeast Metschnikowia bicuspidataJ.Aquaculture,2021,532:735 984.11 申洪彬.中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)“牛奶病”病原鉴定、组织病理及防治技术研究D.沈阳:沈阳农业大学,2020.12 ZHANG Hongqian,CHI Zhe,LIU Guanglei,et al.Metschnikowia bicuspidate associated with a milky disease in Eriocheirsinensis and its effectitve treatment by Massoia lactoneJ.Microbiological Research,2021,242:126 641.13 刘瑜新,傅静兰,夏霄彤,等.华法林与唑类抗真菌药物相互作用及其机制研究进展J.中国临床药理学杂志,2019,35(13):1 406-1 409.14 李辉,杨晓莉,刘立科,等.3 种咪唑类抗真菌乳膏剂微生物限度检查方法学研究J.药物评价研究,2021,44(4):721-727.15 魏文华,曲秀君,胡欣,等.抗真菌药物研究进展J.中国现代药物应用,2012,6(23):111-112.16 曾繁旭,乔建军.多烯大环内酯类抗生素的研究进展J.中国抗生素杂志,2014,39(3):171-181.17 郑莉.抗真菌药物的药理和临床研究进展J.成都医药,2004,30(5):305-307.18 张彩明,程鹏君.4 种化学品对脊尾白虾的急性毒性研究J.中国渔业质量与标准,2014,4(1):21-25.3 417.53 张继平,郭照良.小球藻对降低南美白对虾养殖水体中亚硝酸盐氮含量的研究J.水产科学,2006,25(10):517-519.54 沈南南,李纯厚,贾晓平,等.小球藻与芽孢杆菌对对虾养殖水质调控作用的研究J.海洋水产研究,2008,29(2):48-52.55 GOSWAMI G,MAKUT B B,DAS D.Sustainable production of bio-crude oil via hydrothermal liquefaction of symbioticallygrown biomass of microalgae-bacteria coupled with effective wastewater treatmentJ.Scientific Reports,2019,9(1):15 016.56 LIU Lu,CHEN Junhui,LIMP E,et al.Dual-species cultivation of microalgae and yeast for enhanced biomass and microbiallipid productionJ.Journal of Applied Phycology,2018,30(6):2 997-3 007.57 杨立平.半封闭式中国明对虾育苗池细菌生态与微藻抑菌作用研究D.青岛:中国海洋大学,2003.58 郑莲,黄翔鹄,刘楚吾,等.两种微藻对凡纳滨对虾养殖环境中细菌数量变化的影响J.台湾海峡,2005,24(2):178-182.59 肖伟,吴红艳,毕永红.3 种细菌对小球藻生长和脱氮除磷效率的影响J.水生态学杂志,2021,42(2):124-130.60 陈海敏,陈声明.工厂化水产养殖废水菌藻联合处理模式研究J.浙江树人大学学报,2002,2(4):64-67.61 HE P J,MAO B,L譈 F,et al.The combined effect of bacteria and Chlorella vulgaris on the treatment of municipal wastewatersJ.Bioresource Technology,2013,146:562-568.62 STOCKENREITER M,HAUPT F,SEPP魧L魧 J,et al.Nutrient uptake and lipid yield in diverse microalgal communities grownin wastewaterJ.Algal Research,2016,15:77-82.63 严清,孙连鹏.菌藻混合固定化及其对污水的净化实验J.水资源保护,2010,26(3):57-60.64 PARK J B K,CRAGGS R J,SHILTON A N.Recycling algae to improve species control and harvest efficiency from a highrate algal pondJ.Water Research,2011,45(20):6 637-6 649.65 LAVOIE A,DE LA NO譈E J.Harvesting of Scenedesmus obliquus in wastewaters:Auto-or bioflocculation?J.Biotechnologyand Bioengineering,1987,30(7):852-859.(上接第 323 页)宋楚儿等：微藻在水产养殖水质净化中的应用337